沙眼衣原体隐蔽性质粒分子流行病学调查与分析

目的:调查分析广州地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体隐蔽性质粒的分子流行病学。方法:设计合成隐蔽性质粒特定序列区域的特异性引物,半巢氏PCR扩增沙眼衣原体隐蔽性质粒DNA片段,同时结合omp1基因PCR扩增,比较分析质粒型。结果:143例沙眼衣原体ELISA检测阳性的标本,隐蔽性质粒内外引物扩增全部阳性,而omp1基因PCR扩增检出140例阳性。质粒分型为质粒完整型沙眼衣原体143株菌,未见质粒缺失型和无质粒型菌株。结论:广州地区尚未发现质粒变异型沙眼衣原体,有效地检测沙眼衣原体质粒分子流行病学状况对于实验室诊断和制定控制策略有重要的意义。

淋球菌隐蔽性质粒cppB基因探针制备及初步应用的研究

应用碱变性法从淋球菌Ｄ参考菌株获得４．２ｋｂ隐蔽性质粒ＤＮＡ，通过ＰＣＲ方法扩增该质粒６３３ｂｐｃｐｐＢ基因。采用ＤＮＡ直接酶标─化学发光自显影技术标记ｃｐｐＢ基因探针，通过斑点及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交加以鉴定并初步应用于临床标本检测。旨在为临床淋病实验室诊断提供一个简便、快速方法。

乳酸乳球菌内源隐蔽性质粒序列分析及食品级克隆载体的构建

为构建乳酸菌食品级载体,对乳酸乳球菌内源隐蔽性质粒p KL001进行全序列测定、序列分析及PCR扩增,获得了该质粒的复制子。以Southern杂交对质粒p KL001复制模式进行分析,结果显示p KL001为θ型复制。将该复制子与镉抗性功能片段连接,构建了食品级克隆载体p KF168,其在受体菌株KLDS4.0319-5中可稳定存在。

植物乳杆菌内源性质粒序列分析及其表达载体的构建

目的:构建乳酸杆菌的表达载体,对菌株携带的质粒进行序列测定和功能分析,并利用自身带有的质粒系统构建乳酸杆菌的表达系统,对乳酸菌口服疫苗的制备起到积极的促进作用。方法:从植物乳杆菌LP3中提取质粒并进行序列测定和功能分析。通过质粒pLP3复制子,与pCPSP载体的氯霉素基因CmR、pUC19的复制子构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒。在穿梭质粒的基础上加上嗜酸乳杆菌的S层蛋白启动子PslpA和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,eGFP)基因,进一步构建乳酸菌表达载体D-pLP3-PslpA-eGFP。结果:从植物乳杆菌LP3中得到一个天然隐蔽性质粒pLP3,该质粒大小为2017 bp,GC含量为37.48%。基于质粒pLP3,构建了大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒D-pLP3,并成功转化至不同类型乳酸菌,转化效率介于0.3×102~1.0×103 CFU/μg(DNA质量计)之间。乳酸菌表达载体D-pLP3-PslpA-eGFP转化至植物乳杆菌,成功获得了荧光蛋白的表达。结论:成功构建了乳酸菌表达载体D-pLP3-PslpA,为乳酸菌基因操作提供了新的工具。

聚合酶链反应在淋病奈瑟氏菌检测中的应用

聚合酶链反应在淋病奈瑟氏菌检测中的应用湖南医科大学检验系临床微生物学、免疫学教研室（４１００７８）吴水河，查国章湖南医科大学９０级本科师资班学员周国兴湖南医科大学湘雅医院现代技术研究中心范春，张阳德淋病是我国目前流行的性传播性疾病中发病率最高的病种。...

一步一管PCR法检测淋病奈瑟菌在公安工作中的应用

一步一管ＰＣＲ法检测淋病奈瑟菌在公安工作中的应用孙亚洲，何建文，华永庆，袁建玲，倪海亭，胡斌玮（上海市公安局性病艾滋病鉴定室，２０００２０）１９８５年Ｍｕｌｌｉ等人发明的聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）是一种在体外扩...