阿长·隐鼠·《山海经》

《阿长与(山海经)》中的主人公长妈妈，是鲁迅儿童时代的保姆，也是鲁迅最早接触到的一位农村劳动妇女。鲁迅上学以前的整个幼儿时期都和她一起度过。《狗·猫·鼠》《从百草园到三味书屋》《病后杂谈之余——关于“舒愤懑”》等散文中曾多次提到长妈妈给鲁迅讲“美女蛇”

隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。

隐孢子虫鼠基因型糖蛋白GP900下段基因的克隆和鉴定

目的构建隐孢子虫鼠基因型糖蛋白GP900下段基因的克隆载体。方法采用巢式PCR方法扩增目的基因片段GP900下段,PCR产物纯化后,将目的片段与载体连接,将连接产物转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中,对所得菌落进行阳性克隆的筛选,鉴定阳性结果后进行基因测序。结果成功构建GP900下段基因的克隆载体。结论GP900F段基因克隆载体的构建为下一步表达GP900、研究GP900蛋白功能及其在隐孢子虫侵入靶细胞中的作用、研制疫苗奠定了基础。

补肾益气清热方对溴隐亭致低PRL大鼠流产模型蜕膜PRLR、PR、ER mRNA的影响

目的 :从基因转录水平探讨补肾益气清热中药对溴隐亭致低 PRL流产大鼠模型的 PRLR、PR、ER m RNA在蜕膜上表达的影响 ,同时观察血中 PRL、P、E2 的动态变化。方法 :采用 RT- PCR方法行半定量图像分析 ,观察溴隐亭致低 PRL流产大鼠模型组 ( A组 )与模型 +中药保胎组 ( A+ H组 )之间 PRLR、PR、ER m RNA表达的差异 ;放免法测定血清 PRL、P、E2 的水平。结果 :A组蜕膜PRLR、PR m RNA表达明显低于 A+ H组 ( P<0 .0 1 ) ,ER m RNA表达两组间无显著性差异 ( P>0 .0 5 ) ;A组流产率为 67% ,而 A+ H组流产率仅为 1 7% ,差异有显著性 ;A组孕 7～ 1 0 d血清PRL、P水平显著低于 A+ H组 ( P<0 .0 5 )。结论 :溴隐亭可导致血清 PRL、P水平下降 ,且下调早孕大鼠蜕膜 PRLR、PR m RNA的表达而导致流产发生 ,补肾益气清热方可能通过促进 PRL、P分泌 ,上调 PRLR、PR m RNA的表达 ,恢复正常的妊娠微环境而起到保胎作用。

隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

将隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)P23基因亚克隆到pGEX-4T-1载体中,并用大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌诱导表达。以纯化的rP23为诊断抗原,建立隐孢子虫间接ELISA检测方法,观察其敏感性、特异性和重复性,并对临床血清样品进行检测。结果隐孢子虫鼠基因型P23基因在大肠杆菌中获得了高效表达,Western blot检测显示rP23能被隐孢子虫感染兔血清识别。以纯化rP23为诊断抗原,成功地建立了检测兔隐孢子虫病的间接ELISA技术。对23份临床血清检测结果显示,该方法检出率高于Sheather's蔗糖漂浮法、套式PCR法。本研究结果为研制兔隐孢子虫病诊断试剂盒打下了基础。

白术内酯Ⅲ介导的肌动蛋白相关蛋白2/3抑制肠上皮间质转化以缓解溃疡性结肠炎的研究

目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,确定AT-Ⅲ的关键靶点。脂多糖(LPS)与IEC-6共孵育模拟UC模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;划痕实验测定IEC-6迁移速率;蛋白质印迹法测定上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Arp2/3含量;分子对接评估AT-Ⅲ与关键靶点的结合能力。结果:基于lip-SMap获得的特征蛋白参与调控磷脂酰肌醇3激酶-丝苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路和紧密连接(TJ)信号通路;与对照组比较,LPS组中IL-6和TNF-α释放量升高(均P<0.05),迁移速率变快(P<0.05),E-cadherin和Vimentin的表达都有不同程度的影响(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+CK666+AT-Ⅲ组显著降低IL-6和TNF-α含量(均P<0.01),有效逆转LPS诱导的细胞迁移变化及E-cadherin和Vimentin表达(均P<0.05);分子对接显示,Arp2/3与AT-Ⅲ有较好的结合活性。结论:Arp2/3作为AT-Ⅲ的关键靶点,可通过上皮细胞-间充质转化(EMT)缓解LPS诱导的UC。

隐孢子虫鼠基因型CP15基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达

为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15基因的重组真核表达质粒,检测其重组质粒在Hela细胞中的表达。采用PCR方法,从pMD18-T-CP15菌液中扩增了CP15及含寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)的CP15基因,酶切测序鉴定;将该基因亚克隆至pVAX1载体中,用脂质体介导的方法转染Hela细胞,RT-PCR法、间接免疫荧光法和Western-blot法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示,扩增了约360 bp和380 bp的隐孢子虫鼠基因型CP15和含CpG-ODN的CP15基因,酶切测序鉴定成功构建了pVAX1-CP15和含有CpG-ODN的重组真核表达质粒pVAX1-C-CP15。转染Hela细胞后,用RT-PCR法检测到外源基因有效的转录,用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot法检测到外源基因的有效表达。结果表明,构建的重组真核表达质粒能够在Hela细胞中成功转录和表达,并且表达产物具有良好的免疫活性。这为下一步深入研制具有高保护性的隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础。

醋制降低京大戟对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6毒性研究

目的:比较京大戟醋制前后对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6的毒性差异,初步探讨京大戟醋制减毒机制。方法:以大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,采用MTT法检测京大戟醋制前后对IEC-6细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察醋制前后对细胞形态的影响;采用高内涵细胞成像系统(HCS)分析醋制降低肠细胞线粒体凋亡通路。结果:与阴性对照组比较,增殖抑制实验显示京大戟生品具有较强的肠细胞毒性(P<0.01),HCS分析结果显示京大戟可显著降低细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度(P<0.05,P<0.01),并显著增加Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度(P<0.01,P<0.01,P<0.01);醋制后与京大戟生品各剂量组比较,京大戟醋品可显著降低京大戟生品对肠细胞的增殖抑制作用,增加细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度(P<0.05,P<0.05),降低Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度(P<0.01,P<0.01,P<0.05),且呈一定的剂量相关性。结论:醋制可降低京大戟对肠细胞的毒性,其可能机制为通过降低京大戟对IEC-6细胞膜通透性,从而为进一步阐明京大戟醋制减毒机制提供了一定的依据。

试论《朝花夕拾》的人情美

一、《朝花夕拾》人情美的宏观考察我们探索和论述鲁迅散文集《朝花夕拾》的人情美问题,也如研究其它文学和美学课题一样,先应作一番宏观的综合考察。鲁迅全部作品中,无不呈现着丰赡多采,风格特异的人情美,但因内容和文体有别而各显示着不同的感情侧面。所谓“喜、怒、哀、乐,人之常情。”如果说,鲁迅小说中包孕着的常是哀情,杂文中喷射着的多为怒情,则《朝花夕拾》,由其直抒胸臆的散文文体和“从记忆中抄出来的”自身生活经历题材。

鲁迅记事散文漫说——鲁迅散文创作概观之一

散文,广义地说,甚至是除诗歌以外一切文学体裁的母体。她孕育着文学体裁,一旦成熟,她们就会脱离母体,如小说,报告文学,杂文,散文诗等无不如此。但也正因为如此,作为文学体裁的一种,散文又是“单纯的”。所以。

鲁迅怎样写散文

一、心静 要写好散文,内心必须保持完全的沉静。心里哪怕只有一丝浮尘,都会影响到文章的质量。鲁迅文字,至少是《朝花夕拾》,我读出的是一种不动声色的冷静、深沉、稳重。别的作家很少给我这样的感觉。如《从百草园到三味书屋》开头：＂我家的后面有一个很大的园,相传叫作百草园。现在是早已并屋子一起卖给朱文公的子孙了,连那最末次的相见也已经隔了七八年,其中似乎确凿只有一些野草;但那时却是我的乐园。＂只要细细揣摩,就不难感到沉静稳健的鲁迅风。

课本注释正误之见

语文课本里,无论是现代文还是文言文,都少不了对字词的注释。很少有人对注释提出追问和置疑,但是,课本上的注释全都是正确的吗?或者说,课本上的注释是唯一的正解吗?'学而不思则罔,思而不学则殆。'孔子早已阐明孤立的'学'或'思'的不良后果。

阿长与《山海经》(有删节)

辞岁之后,从长辈得到压岁钱,红纸包着,放在枕边,只要过一宵,便可以随意使用。睡在枕上,看着红包,想到明天买来的小鼓、刀枪、泥人、糖菩萨……长妈妈,已经说过,是一个一向带领着我的女工,说得阔气一点,就是我的保姆。我的母亲和许多别的人都这样称呼她,似乎略带些客气的意思。只有祖母叫她阿长。我平时叫她“阿妈”,连“长”字也不带;但到憎恶她的时候,——例如知道了谋死我那隐鼠的却是她的时候,就叫她阿长。

何首乌·猹

鲁迅先生终其一生对自然科学,特别是生物科学的分支——动物学、植物学——有着浓厚的兴趣。不必说少年时从蛇的袭击下救出了隐鼠(《狗·猫·鼠》),也不必说从远房叔祖处借阅讲述园圃花木的《花镜》(《阿长与〈山海经〉》),单是归国后1910年任绍兴府中学堂生物学教员,除课堂讲授外,还曾带领学生到野外采集、制作植物标本,就足以证明先生对这门学科已有一定的造诣。

《朝花夕拾》的人情美

鲁迅的回忆散文集《朝花夕拾》以雍容简单的笔调,满富情趣地描绘了他童年及青少年成长岁月的生活图景。与其它作品相比,《朝花夕拾》温馨又和谐的人情美给人以非常深刻的印象。人情美首先就是有人情味。'任何诉诸人情味的,反过来都有利于一件艺术作品,如果人情味写得成功的话。

跋李桐画

绘画之难,莫难于人物。而人物之难,首难于静,次难于洁——静者,非谓形象冲默、声影欲息、盖谓其思虑闲而动止安,性情贞而中心定也;洁者,非谓纸笔娟净、物态空明,盖谓其意境幽而标韵淡,风神远而气骨清也。然而静洁二字,亦存乎修养,关乎性分,岂炫技售奇徒以烟润恍惚欺人耳目者可得与言哉!当世画家,数十万计,光怪陆离,不可比方。豹隐鼠跃,龙潜鱼飞,五色晃目。

对立的艺术——再读《阿长与〈山海经〉》

《阿长与〈山海经〉》一文,选自鲁迅＂从记忆中抄出来的＂的散文集《朝花夕拾》,是鲁迅先生为纪念儿时的保姆长妈妈而写的。文中,鲁迅对主要事件和情节的处理看似轻描淡写,漫不经心,实则浓墨重彩,技法巧妙,这里笔者尝试从对立的角度来解读这篇文章。

长妈妈缘何令人难忘

在鲁迅的《从百草园到三味书屋》中,阿长妈妈虽然身份卑微、陋习讨厌,但她爱岗敬业的精神以及助人为乐的品质,给鲁迅留下了难以磨灭的印象——以至于鲁迅在多篇文章中都提到这位可爱的长妈妈。无论是因为谋害隐鼠而令人讨厌的阿长,在《从百草园到三味书屋》中讲述美女蛇故事的长妈妈,还是鲁迅在《阿长与<山海经>》里详细描述的那位称职的好保姆。

鲁迅的《故事新编》 借古事躯壳激发现代人之所爱憎

我似乎遇着了一个露雳,全体都震悚起来;赶紧去接过来,打开纸包,是四本小小的书,略略一翻,人面的兽,九头的蛇,果然都在内。这又使我发生新的敬意了,别人不肯做,或不能做的事,她却能够做成功。她确有伟大的神力。谋害隐鼠的怨恨,从此完全消灭了。