UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS法鉴定隔山消提取物在功能性消化不良大鼠体内代谢产物

目的建立UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS法鉴定隔山消提取物在功能性消化不良大鼠体内代谢产物。方法建立功能性消化不良大鼠模型。分析采用Hypersi 1 GOLD C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm);流动相水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。结果共鉴定出4种原型成分(白首乌二苯酮、去酰基萝藦苷元、青阳参苷元、丁香酸)及其110种代谢产物,其中粪便、尿液共有代谢产物12种,尿液特有代谢产物56种,粪便特有代谢产物42种。原型成分代谢途径包括Ⅰ相代谢(氧化、还原等)、Ⅱ相代谢(硫酸化、葡萄糖醛酸化等)及Ⅰ相、Ⅱ相复合反应。结论该方法高效全面,可为进一步寻找隔山消潜在活性代谢产物奠定基础。

隔山消不同极性提取物抗菌作用实验研究

目的观察隔山消乙酸乙酯提取物和丙酮提取物的抗菌活性。方法采用试管稀释法测定上述提取物对各实验菌株的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC),采用纸片扩散法测定抑菌圈直径。结果①隔山消提取物对各实验菌均有不同程度的抑制作用,对葡萄球菌、痢疾志贺菌的抑制作用最强,乙酸乙酯部分MIC值均为0.39 mg/mL,丙酮部分均为0.78 mg/mL。同一种提取物对同一种菌的不同菌株表现出相近的抗菌活性。②纸片扩散法结果显示两种提取物均有明显抗菌作用,并且随着浓度降低抑菌圈直径逐渐减小,差异有统计学意义(P﹤0.001)。结论隔山消提取物均具有良好的体外抗菌作用,乙酸乙酯部分抗菌作用强于丙酮部分。

隔山消提取物对功能性消化不良模型大鼠脑肠肽及胃肠道功能的作用机制研究

目的探讨隔山消提取物对功能性消化不良(FD)模型大鼠脑肠肽及胃肠道功能的作用机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常组(A组,生理盐水),模型组(B组,0.5 mol/L冰盐酸),多潘立酮组(C组,31.5 mg/kg多潘立酮),以及隔山消提取物低、中、高剂量组(D1组、D2组、D3组,0.5,1.0,2.0 g/kg隔山消提取物),各8只。除A组外,所有大鼠按8.0 m L/kg容量灌胃0.5 mol/L冰盐酸,同时采用不规则喂养,以构建FD大鼠模型,A组大鼠灌胃等量生理盐水。所有大鼠造模第11天后分别给予相应药物;造模第21天后,取各组大鼠小肠、胃和血液,测定小肠推进率,采用酶联免疫吸附法测定血浆中胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、血管活性肠肽(VIP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠胃窦组织的病理变化。结果与B组相比,C组、D1组、D2组、D3组大鼠的小肠推进率和血浆GAS水平均显著升高,TNF-α水平均显著降低,C组、D3组大鼠的MTL水平均显著升高,C组、D2组、D3组大鼠的VIP水平均显著降低(P<0.05或P<0.001);B组大鼠部分黏膜层细胞空泡变性,未见明显脱落、炎性细胞浸润及坏死,其余各组大鼠胃组织整体结构正常。结论隔山消提取物可通过降低FD模型大鼠血浆VIP和TNF-α水平,升高MTL和GAS水平,从而促进胃肠道运动,改善胃肠道功能。

隔山消不定根多糖提取工艺优化及提取物的抗氧化活性研究

为优化隔山消多糖提取工艺,该研究以生物反应器培养的隔山消不定根为实验材料进行闪式提取,并以多糖得率为指标,利用正交设计法对提取温度、料液比、提取时间进行了优化。结果表明:提取温度为60℃、料液比为1∶40(g∶mL)、提取时间为70 s时,多糖得率最高,达到7.24%。为了将隔山消不定根应用于产品生产中,开展了抗氧化活性评价研究。结果表明:DPPH和ABTS^(+)清除力和铁离子螯合力随提取物浓度的增加而增加,清除DPPH和ABTS^(+)自由基的半数效应浓度分别为0.39和16 mg/mL。该研究结果表明隔山消不定根在抗氧化产品的开发及生产中具有很好的应用价值。

隔山消对小鼠小肠推进作用的研究

目的:初步探讨隔山消乙酸乙酯提取物对小鼠小肠推进功能的影响。方法:对正常小鼠以及阿托品诱导的小肠功能抑制小鼠给予隔山消乙酸乙酯提取物,通过测定不同实验组炭末混悬液在小肠中的推进距离,评价隔山消乙酸乙酯提取物对小肠推进功能的影响。结果:隔山消乙酸乙酯提取物各剂量组均能明显提高正常小鼠小肠炭末推进率,其中高剂量组的作用最为明显,推进率达到了75.93%;隔山消乙酸乙酯提取物各剂量组还能提高阿托品抑制的小鼠小肠炭末推进率,以低剂量作用最好,推进率达到了43.28%。结论:隔山消乙酸乙酯提取物可以明显促进小肠运动,并能对抗阿托品所致的小鼠小肠功能障碍,这可能与M胆碱受体有关。

隔山消化学成分的研究

从民族药隔山消分离得到7个化合物,分别鉴定为β-香树脂醇乙酸酯(1),谷甾醇(2),齐墩果酸(3),甘油-1-棕榈酸酯(4),白首乌二苯酮(5),胡萝卜苷(6),东莨菪内酯(7。其中化合物3、4、7为首次从该植物中分离得到。

外翻肠囊法研究隔山消提取物在正常和功能性消化不良模型大鼠中的肠吸收差异

考察隔山消提取物在正常与功能性消化不良(FD)模型大鼠病理状态下的肠吸收特性差异,采用离体外翻肠囊模型,通过UPLC-MS/MS检测隔山消提取物中丁香酸、东莨菪内酯、告达亭、白首乌二苯酮、青阳参苷元、去酰基萝藦苷元6个代表性成分在不同肠段的含量,计算累积吸收量(Q)和吸收速率常数(K)。结果发现,隔山消提取物中6个成分均可吸收进入肠囊,且未呈饱和状态,推测东莨菪内酯的吸收方式可能有主动转运,而其余成分的吸收方式可能为被动扩散。正常状态下,丁香酸、白首乌二苯酮在回肠吸收较好,青阳参苷元、去酰基萝藦苷元在回肠、十二指肠吸收较好,告达亭在结肠吸收较好,而东莨菪内酯低、中、高剂量分别在空肠、回肠、结肠吸收最好。而模型状态下各成分最佳吸收部位均在回肠。各成分不同剂量下正常组与模型组的吸收特征较为复杂,未表现出一致的吸收趋势,提示小肠对药物的吸收具有选择性,且FD病理状态会改变药物的吸收特征。该研究可为隔山消的临床用药和产品开发提供理论依据。

蒙药山沉香护肝、抗氧化活性部位研究

目的研究蒙药山沉香不同提取物护肝、抗氧化作用,筛查山沉香具有护肝、抗氧化作用的活性部位。方法以浓度为95%乙醇回流提取山沉香粉末浓缩得到乙醇提取物浸膏,用水分散制成混悬液后按极性从小到大依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇按比例1∶3萃取,减压浓缩干燥后称质量用于药效学实验。将80只雄性昆明种小鼠随机分成空白组(羧甲基纤维素钠CMC-Na)、模型组(CCl4-花生油)、阳性对照组(联苯双酯)、山沉香乙醇部位提取物组、山沉香石油醚部位提取物组、山沉香乙醚部位提取物组、山沉香乙酸乙酯部位提取物组、山沉香正丁醇部位提取物组,每组10只。每天按20 mL·kg^-1的剂量灌胃给药1次,连续灌胃7 d。最后一次给药1 h后除空白组外其余组均注射0.1%CCl4-花生油(20 mL·kg^-1)造成急性肝损伤模型,空白组注射等量花生油。12 h后观察小鼠的毛色及活动情况,检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量,肝匀浆中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,并观察肝组织形态外观、切片病理特征及对其进行Ishak评分。结果与空白组比较,模型组小鼠体型偏瘦,毛发黯淡无光且较稀疏,灵活度下降,容易聚堆;血清ALT、AST含量明显升高(P<0.01);肝匀浆MDA含量明显升高(P<0.01),GPx和SOD含量明显降低(P<0.01);模型组小鼠肝组织外观呈暗棕色,体积增大;病理切片表现为肝小叶中央静脉周围出现凝固性坏死、肝索肝窦排列不整齐Ishak评分明显升高(P<0.01)。与模型组比较,山沉香乙醇提取物组和乙酸乙酯提取物组小鼠毛色光泽,体型较为丰满;血清ALT、AST含量明显降低(P<0.01);山沉香乙酸乙酯提取物组小鼠肝匀浆MDA含量明显降低(P<0.01),GPx(P<0.01)和SOD(P<0.05)含量明显升高;且该组肝组织形态外观与空白组接近,病理损伤有明显改善,Ishak评分明显降低(P<0.01)。结论蒙药山沉香具有护肝作用,而且可通过抗脂质过氧化来保护肝脏,山沉香95%醇提物的乙酸乙酯提取物是其护肝、抗氧化的活性部位。

海南裂叶山龙眼抗肿瘤活性部位的筛选

目的:分离筛选出海南裂叶山龙眼叶抗肿瘤活性部位。方法:采用溶剂萃取法和大孔树脂柱分离法对海南裂叶山龙眼叶水提物进行不同部位分离,采用MTT法对各部位进行体外抗肿瘤活性测定;通过B16F10黑鼠皮下移植瘤模型考察最佳活性部位对实体瘤生长的影响。结果:海南裂叶山龙眼叶水提物显示出较强的体外抗肿瘤活性,水提物的乙酸乙酯萃取部位对MGC-803细胞的细胞毒性最强,其IC50为44.1μg/m L;石油醚萃取部位和90%乙醇洗脱部位对人胃癌MGC-803无抑制作用;水提物的乙酸乙酯萃取部位对B16F10黑鼠皮下移植瘤具有显著的抑制作用,剂量为25mg/kg时,抑制率达56.23%。结论:水提物的乙酸乙酯部位为海南裂叶山龙眼叶抗肿瘤的活性部位。

山香圆苷A～E:三叶山香圆叶中的葡糖苷

从省沽油科植物三叶山香圆(Turpinia ternate)叶中分离出1个大柱烷(megastigmane,1)和7个大柱烷苷(2～8)。从该植物中得到的成分1的结构和绝对构型与从野鸭椿(Euscaphis japonica)中分离得到的完全相同,成分2、3为已知物。采用NMR光谱分析法和改良Mosher法确定出新成分4～8的结构和绝对构型。