雄激素受体剪切变异体阳性去势抵抗性前列腺癌新型药物

雄激素受体剪切变异体(AR-Vs)被认为是去势抵抗性前列腺癌(CRPC)发展的重要机制,也是AR靶向药物耐药的关键因素。目前AR-Vs靶向药物明显提高了CRPC患者生存率、改善了生活质量。该文综述了AR-Vs阳性CRPC的新型药物。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂CUDC-101对去势抵抗性前列腺癌雄激素受体剪切变异体7表达的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂CUDC－101对去势抵抗性前列腺癌（castration－resistant prostate cancer，CRPC）雄激素受体剪切变异体7 （androgen receptor splice variant 7，AR－V7）表达的影响。方法2015年4月至2016年4月采用免疫印迹法检测前列腺癌细胞株PC－3、VCaP、22Rv1、LNCap中AR－V7蛋白表达情况，并选取表达量最高的细胞株进行后续实验。通过细胞增殖与活性实验对组蛋白去乙酰化酶抑制剂CUDC－101、组蛋白甲基化抑制剂DZNeP、DNA甲基化抑制剂吉西他滨、组蛋白乙酰化转移酶抑制剂MG149进行筛选，选出能够降低CRPC细胞中AR－V7蛋白表达的抑制剂。分别将30、300 nmol的CUDC－101与1、10、20μmol的MDV3100联合使用处理可表达AR－V7的细胞株，检测其对细胞生长的抑制作用。结果免疫印迹实验结果显示AR－V7蛋白仅在CRPC细胞株22Rv1中阳性表达。采用不同的表观遗传抑制剂处理22Rv1细胞，仅CUDC－101处理后AR－V7的表达量明显降低并趋于阴性，其他抑制剂对AR－V7的表达无影响。在细胞增殖与活性实验中，30 nmol CUDC－101与1、10、20μmol的MDV3100联合使用对22Rv1细胞株的抑制率分别为10%、35%和45%，高于单独使用MDV3100的5%、28%和42%，差异有统计学意义（P〈0.05）。300 nmol CUDC－101与1、10、20μmol MDV3100联合使用对22Rv1的抑制率分别为30%、60%和65%，明显高于单独使用MDV3100，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论CUDC－101可以抑制CRPC中AR－V7的表达。

雄激素受体剪切变异体与前列腺癌关系的研究进展

前列腺癌是欧美国家男性最常见的恶性肿瘤，病死率居第2位。近年来，我国前列腺癌的发病率不断上升，位列男性泌尿生殖系肿瘤的第1位。晚期前列腺癌的治疗方法首选雄激素剥夺治疗（androgen deprivation therapy, ADT），也称内分泌治疗，但是随着内分泌治疗时间的持续，绝大多数激素依赖性前列腺癌会进展为去势抵抗型前列腺癌（castration-resistant prostate cancer, CRPC）。

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞雄激素受体剪接变异体对内分泌激素水平的影响

目的·探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者卵巢颗粒细胞雄激素受体插入型剪接变异体(androgen receptor splice variant insertion isoform,AR-ins)对性激素及胰岛素水平的影响。方法·纳入2017年6月—2018年6月于上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院辅助生殖科行体外受精-胚胎移植的154例PCOS患者(PCOS组)和79例正常排卵患者(对照组)。通过病史摘录收集其社会人口学信息、血清基础性激素及胰岛素数据,其中激素水平由化学发光法检测。收集所有患者的卵巢颗粒细胞及卵泡液。采用巢式PCR鉴定PCOS患者卵巢颗粒细胞中的雄激素受体剪接变异体,进一步将PCOS组患者分为PCOS野生型(wild type,Wt)组(39例)和PCOS AR-ins组(115例)。利用化学发光法检测3组患者卵泡液中的性激素及胰岛素水平,计算游离雄激素指数(free androgen index,FAI)。采用One-way ANOVA、Welch's ANOVA、Kruskal-Wallis H检验和χ^2检验比较3组患者的社会人口学信息、血清及卵泡液的性激素及胰岛素水平的差异。结果·与对照组相比,PCOS AR-ins组患者血清中性激素结合球蛋白(sex hormone-binding globulin,SHBG)水平显著降低(P=0.000),总睾酮(total testosterone,TT)水平(P=0.000)、胰岛素水平(P=0.001)及FAI(P=0.000)均显著增高。分别与对照组和PCOS Wt组相比,PCOS AR-ins组患者卵泡液中SHBG、TT、胰岛素水平及FAI间的差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论·存在AR-ins的PCOS患者血清中具有高雄激素和高胰岛素的特点,而在其卵巢局部此效应更为显著。

雄激素受体剪接变异体7检测方法的研究进展

去势抵抗型前列腺癌(CRPC)治疗方法包括:以紫杉烷为基础的化疗、新型内分泌治疗、免疫疗法和镭233。目前尚无能预测CRPC患者治疗疗效并指导用药的临床生物标志物,大量研究显示雄激素受体剪接变异体(AR-V7)与阿比特龙、恩杂鲁胺耐药相关,而与紫杉烷类药物的耐药不相关,有望成为预测临床疗效、指导用药选择的一种临床实用的肿瘤标志物。然而,AR-V7的检测方法成为其应用于临床的挑战之一。本文就现有的AR-V7检测方法做一综述,并对AR-V7临床应用进行展望,以期推进AR-V7从实验室走向临床。

Eur Urol:雄激素受体剪接变异体7预测激素敏感型前列腺癌患者雄激素剥夺疗法的短期应答

雄激素剥夺疗法(androgen deprivation therapy,ADT)是初发转移性前列腺癌(prostate cancer,PCa)的基石性治疗,但绝大多数患者在接受治疗1~2年内仍不可避免地会出现疾病反弹,进展成难治的去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC),成为患者死亡的主要原因。雄激素受体剪接变异体7(androgen-receptor splice variant 7,AR-V7)是雄激素受体的一种异常剪接体,可表达一种C-端连接区域缺失、N-端区域仍保留转录活性的一种特殊蛋白,其异常表达可能是导致PCa发生去势抵抗的原因之一。

转移性去势抵抗性前列腺癌临床治疗标志物——雄激素受体剪接变异体7

随着越来越多的转移性前列腺癌患者对去势治疗抵抗,进入去势抵抗性前列腺癌(CRPC)阶段,治疗方案的合理选择及对治疗效果的预测变得越来越重要。大量研究发现雄激素受体变异体7(ARV7)参与CRPC发生与进展的过程。研究发现ARV7在CRPC中表达水平明显高于激素敏感性前列腺癌,在对阿比特龙、恩扎鲁胺治疗抵抗以及紫杉烷类药物化疗逃逸的机制中发挥了重要作用。此外,部分临床研究发现,ARV7的水平可提示不同治疗方案的预后:循环肿瘤细胞(CTC)ARV7阴性预示新型内分泌治疗与紫杉烷类化疗效果有效,而CTC ARV7阳性则预示新型内分泌治疗效果不佳。这些发现预示ARV7可成为临床医生对于CRPC治疗方案的选择以及判断预后等方面的生物标志物。

雄激素受体剪接变异体7在去势抵抗性前列腺癌中的作用及其临床意义

去势抵抗性前列腺癌(CRPC)是经过初次持续内分泌治疗后仍然进展的前列腺癌。CRPC的发生和发展机制极其复杂,目前尚未完全研究清楚,但雄激素受体(AR)信号的持续激活仍是重要因素。雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)是AR重要的变异体之一,其与CRPC发生、发展存在密切联系,在促进AR的再活化、肿瘤的生长转移以及耐药性的产生中起着重要作用,与内分泌治疗的敏感性和总体存活率降低相关,是一种潜在评价指标,深入研究AR-V7与CRPC的关系,不仅可以指导现阶段CRPC的用药,还可以为CRPC的治疗提供新的途径和方向。

AR剪切突变体、雄激素新生和miRNA在去势抵抗性前列腺癌发生中的作用

前列腺癌大多数患者在雄激素剥夺治疗（ADT）2~3年之后转为去势抵抗性前列腺癌（CRPC），但是对于CRPC的发生机制目前仍不清楚。作者主要针对CRPC发病机制的研究现状做一综述，重点从雄激素受体（AR）的剪切变异体、雄激素的肿瘤内合成以及miRNA表达异常三个方面进行论述。

前列腺癌组织中雄激素受体剪接变异体7的表达及临床意义

目的探讨雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)在前列腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集2017年3月至2019年3月大连医科大学附属大连市中心医院泌尿外科48例患者的组织标本。其中良性前列腺增生18例(良性增生组)、局限性前列腺癌18例(局限癌组)、前列腺癌骨转移12例(骨转移癌组)。免疫组化染色检测各组AR-V7阳性表达;qRT-PCR检测各组AR-V7 mRNA的表达。结果免疫组化结果显示3组比较AR-V7阳性表达存在统计学差异(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,与良性增生组比较,局限癌组AR-V7 mRNA表达增高(P<0.05);与良性增生组和局限癌组比较,骨转移癌组AR-V7 mRNA表达增高(P<0.05)。结论前列腺癌组织中AR-V7表达增高,且与前列腺癌的临床进展相关,提示AR-V7可能参与前列腺癌的临床进展和骨转移的发生。

子宫内膜癌中雌激素受体亚型α第五外显子变异体的表达

目的:探讨雌激素受体亚型α的第5外显子野生型及变异体在内膜癌中的表达以及在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法:选取1999年10月至2003年1月行手术治疗的子宫内膜癌患者41例,以2001年11月至2003年3月接受手术的正常子宫内膜癌患者29例做为对照,进行逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR),半定量研究雌激素受体亚型第5外显子变异体的表达。结果:内膜癌组织中雌激素受体α第5外显子变异体的表达高于正常内膜组织(P<0.05),而二者之间野生型及野生型与变异体的比值差异无显著性(P>0.05)。结论:雌激素受体α第5外显子缺失型变异体可能在内膜癌的发生和发展中起重要作用。

miR-141-3p、KLF9异常表达对前列腺癌细胞株药物敏感性和雄激素受体表达的影响及靶向关系

目的观察miR-141-3p、Krüppel样因子9(KLF9)对前列腺癌细胞株药物敏感性、雄激素受体(AR)表达的影响,验证miR-141-3p、KLF9之间的靶向关系,以探讨miR-141-3p、KLF9对PCa药物敏感性的调控作用及机制。方法选择雄激素敏感且表达AR的LNCaP细胞株。将细胞分为miR-141-3p低表达组、miR-141-3p正常组、KLF9过表达组、KLF9正常组,采用脂质体转染法分别转染miR-141-3p-inhibitor、inhibitor阴性对照物(inhibitor-NC)、KLF9过表达质粒、空白质粒。上述各组细胞加入不同浓度(0、10、25、50、75、100µmol/L)比卡鲁胺或(0.5、1.0、2.5、5.0 nmol/L)多西他赛后培养48 h,检测各组细胞OD值,计算细胞增殖率(反映药物敏感性)。采用qRT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中AR及AR-V7。采用TargetScan数据库预测miR-141-3p与KLF9是否存在结合位点,然后采用荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与KLF9的靶向调控关系[将LNCaP细胞株分别分为A、B、C、D组,A组先后转染野生型KLF9荧光素酶报告基因质粒(KLF9-WT)、inhibitor-NC,B组先后转染KLF9-WT、miR-141-3p-inhibitor,C组先后转染突变型KLF9荧光素酶报告基因质粒(KLF9-Mut)、inhibitor-NC,D组先后转染KLF9-Mut、miR-141-3p-inhibitor,转染24 h后检测各组荧光素酶活性]。通过细胞功能回复实验进一步验证miR-141-3p通过靶向调控KLF9抑制前列腺癌细胞药物敏感性[将LNCaP细胞株分别分为a、b、c、d组,a组先后转染si-KLF9阴性对照(si-Ctrl)、inhibitor-NC,b组先后转染si-Ctrl、miR-141-3p-inhibitor,c组先后转染si-KLF9、inhibitor-NC,d组先后转染si-KLF9、miR-141-3p-inhibitor,转染24 h后分别使用75µmol/L比卡鲁胺或2.5 nmol/L多西他赛处理细胞48 h,使用CCK-8法检测细胞OD值,并计算细胞增殖率]。结果LNCaP细胞培养48 h,在无药物加入时,miR-141-3p低表达组细胞增殖率低于miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组细胞增殖率低于KLF9正常组(P均<0.05);随着药物浓度升高,各组细胞增殖率呈下降趋势(P均<0.05);在同等药物浓度情况下,miR-141-3p低表达组细胞增殖率低于miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组细胞增殖率低于KLF9正常组(P均<0.05)。LNCaP细胞培养48 h,与不加入药物的miR-141-3p正常组相比,加入75、100µmol/L比卡鲁胺的miR-141-3p正常组AR相对表达量升高(P均<0.05),加入50、75、100µmol/L比卡鲁胺的miR-141-3p正常组AR-V7相对表达量升高(P均<0.05);加入0.5、1.0、2.5、5.0 nmol/L多西他赛的miR-141-3p正常组AR及AR-V7相对表达量升高(P均<0.05)。miR-141-3p低表达组的AR及AR-V7相对表达量低于加入同药物浓度的miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组的AR及AR-V7相对表达量低于加入同药物浓度的KLF9正常组(P均<0.05)。TargetScan数据库预测miR-141-3p与KLF9存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,B组的相对荧光活性高于A组、C组及D组(P均<0.05)。功能回复实验结果显示,d组的细胞增殖率高于b组(P均<0.05),低于c组(P均<0.05),但与a组差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-141-3p低表达、KLF9过表达均可增强LNCaP细胞株的药物敏感性,并可抑制LNCaP细胞株AR和AR-V7的表达,miR-141-3p和KLF9存在靶向关系,miR-141-3p可靶向KLF9抑制LNCaP细胞药物敏感性,可能是通过促进AR-V7的表达实现的。

大鼠睾丸黄体生成素受体剪切变异体cDNA在昆虫细胞中的高效表达

研究了大鼠睾丸黄体生成素受体剪切变异体ｃＤＮＡ在昆虫细胞中的表达，并对其产物性质作了初步鉴定。ＳＤＳＰＡＧＥ银染和免疫印迹结果显示，表达产物呈两条带，分子量为３８５ｋＤａ的主带和分子量为４０ｋＤａ的次带。１２５ＩｈＣＧ结合印迹分析表明，表达产物Ｒ３１６具有与配基专一性结合的生物活力。竞争性配基结合曲线和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析结果显示，重组受体Ｒ３１６和配基ｈＣＧ有较高的亲和力，平衡解离常数Ｋｄ为８１５×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ。表达产物为与膜结合的蛋白。

人生长激素释放激素受体剪接变异体1型对人肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的:探讨人生长激素释放激素受体剪接变异体1型(GHRHR SV1)对肝癌细胞系HepG2增殖的影响,阐明GHRHR SV1对人肿瘤细胞的促增殖作用。方法:将GHRHR SV1真核表达载体导入HepG2细胞建立HepG2-SV1细胞系。设计对照组(野生型HepG2)、空载质粒组(HepG2-pCDNA 3.0细胞系)和干扰组(HepG2-SV1细胞系)。采用PCR和Western blotting法鉴定HepG2-SV1细胞系,CCK-8法检测各组细胞的增殖率,克隆形成实验检测各组细胞的单克隆形成率,细胞划痕实验检测细胞的迁移率。结果:PCR与Western blotting法检测,构建的HepG2-SV1细胞系能稳定表达GHRHR SV1;CCK-8法检测,干扰组HepG2-SV1细胞系的增殖率高于空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系(P<0.05);克隆形成实验,干扰组HepG2-SV1细胞系的单克隆形成率约为空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系的3.5倍(P<0.05);细胞划痕实验,所构建的干扰组HepG2-SV1细胞系的迁移率高于空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系(P<0.05)。结论:GHRHR SV1能促进HepG2细胞的增殖。

雄激素受体可变剪接异变体7与前列腺癌关系的研究进展

雄激素受体(AR)信号通路在前列腺癌(PCa)发生发展过程中起重要作用。AR信号转导途径的改变和重新激活是促进去势抵抗性前列腺癌(CRPC)发展和耐药性产生的核心因素。AR可变剪接异变体7(AR-V7)的表达是AR信号通路异常激活的重要原因之一,AR-V7具有与AR不同的结构及功能,在PCa发展、耐药和临床治疗中起着重要的推动作用,同时也具有作为CRPC生物标志物和治疗靶标的巨大潜力。现总结分析AR与AR-V7的结构和功能上的差异,以及在AR靶向药物作用下CRPC患者的疗效,为CRPC的治疗提供理论依据。阐述AR-V7在PCa治疗和耐药方面的主要研究进展及其在判断CRPC疗效和预后方面的作用,同时进一步分析AR-V7特异性检测在临床应用中的不足之处,以期取得技术上的进步和发展。

雄激素受体与去势抵抗性前列腺癌关系的研究进展

去势抵抗性前列腺癌(CRPC)是雄激素剥夺治疗(ADT)后晚期前列腺癌终极阶段。雄激素受体(AR)是前列腺癌发生发展的重要因素,即使在CRPC阶段,AR途径信号的激活仍然起着重要作用,其可能的机制有受体基因的扩增或过表达、基因突变、结构性受体改变及剪接变异体等。本文对CRPC期AR的主要改变综述如下。AR是核受体超家族的一员,属于类固醇受体,是一种配体依赖型的反式转录调节蛋白,是雄激素作用的中介物质。

雌激素受体的变异与生殖系统肿瘤

许多实验结果和临床资料支持雌激素受体(ER)变异体在生殖系统正常组织和肿瘤组织中共表达,而且与生殖系统肿瘤的发生、发展、转移、耐药以及预后有关,但各种ER变异体蛋白的生理和病理功能还不完全清楚。此外,从某些类型ER变异体蛋白具有组织特异性表达可推测ER变异体与配体的相互作用有组织特异性。因此,对ER变异体结构和功能改变及其与其他信号传导通路相互作用的研究具有重要意义,同时也是今后研究中面临的挑战。本文综述ER的变异与生殖系统肿瘤的关系。

雌激素受体α的突变mRNA在乳腺癌肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达

为检测正常乳腺组织及乳腺癌组织中野生型雌激素受体α不同mRNA突变体ERC_4、ERD_3、ERD_5mRNA的表达,采用巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测技术,对18例乳腺癌患者正常乳腺组织及乳腺癌组织中野生型雌激素受体α不同mRNA突变体进行检测。结果:在ER阳性/PR阳性组中,ERC_4mRNA在肿瘤组织中的表达比正常组织中明显增高;在肿瘤组织中,ERD_3mRNA的表达比相邻的正常组织中的表达有降低的倾向,但仅在ER阳性组中有统计学显著性差异;乳腺癌组织中ERD5mRNA的表达比相应的正常乳腺组织显著升高;在乳腺癌的发生过程中,ERα突变体mRNA的表达失控。

一种新的FR4剪切变异体的确认和鉴定

目的确认并鉴定一个新发现的小鼠FR4剪切变异体,并在mRNA水平检测其在小鼠脾淋巴细胞亚群中的表达。方法PCR克隆FR4CDS区时发现存在一个新的剪切变异体,酶切和测序予以鉴定,Western blot检测脾细胞中变异体的表达,流式分选脾细胞中CD8+、CD4+CD25-、CD4+CD25+T淋巴细胞,RT-PCR检测新的变异体在各细胞亚群中的表达。结果凝胶电泳显示存在一个CDS区碱基数大于野生型FR4的条带,测序表明此条带在野生型外显子基础上包含一个内含子成分,Western blotting证实新发现的剪切体在蛋白水平也存在,脾细胞中不同T细胞亚群均表达此新型变异体。结论mRNA和蛋白水平均证实存在一种新型FR4剪切变异体,不同T细胞亚群均表达此变异体暗示其在淋巴细胞摄取叶酸功能上不可或缺。

雌激素受体β与乳腺癌

目的 探讨雌激素受体 β(ERβ)在乳腺癌方面的研究进展。 方法 采用文献回顾方法 ,对ERβ的生物学功能、变异 ,及其乳腺癌发生、发展、预后评估及内分泌治疗反应方面的可能作用加以综述。结果 ERβ是类固醇激素受体超家族的新成员 ,可能在乳腺癌发生、发展、预后评估及内分泌治疗反应方面具有重要作用。结论 ERβ是一种新的乳腺癌预后评估指标。