雄激素受体(hAR)CAT报告基因筛选AR激动剂和拮抗剂的方法研究

[目的]建立雄激素受体(hAR)报告基因实验,为AR激动剂和拮抗剂活性筛选提供检测方法。[方法]构建受雄激素效应元件(ARE)调控的氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因质粒pMMTV-CAT,将该质粒与hAR表达质粒AR/pcDNA3.1和阳性对照质粒pSV-β-Gal共转染非洲猴肾细胞株CV-1。以AR激动剂5α-双氢睾酮(5α-DHT)、糖皮质激素受体(GR)激动剂地塞米松和AR拮抗剂氟鲁他明为受试物,研究它们对AR的激动或拮抗作用。[结果]10^(-9)mol/L的5α-DHT显著诱导CAT的表达,诱导倍数为56.67,10^(-8)mol/L时达最大值,诱导倍数为79.30,在10^(-8)mol/L～10^(-6)mol/L范围内CAT的表达量维持在较高的平台水平。地塞米松不诱导CAT的表达。氟鲁他明在10^(-7)mol/L～10^(-5)mol/L浓度范围内显著拮抗1nmol/L的5α-DHT诱导的CAT的表达。[结论]5α-DHT对CAT的诱导和氰鲁他明对CAT的拮抗呈剂量-效应关系。该方法不存在与GR激动剂的交叉反应,具有较高的特异性。雄激素受体报告基因实验可以作为化学物(抗)雄激素活性筛选的方法。

基于荧光素酶报告基因的CHO细胞(抗)雄激素样物质检测方法的建立

目的 建立基于报告基因的CHO细胞体外(抗)雄激素检测系统,并研究2 ,4 DDT、甲氧氯的抗雄激素样作用。方法 通过脂质体转染法将人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV Luc及内对照质粒phRL SV4 0瞬时转入CHO细胞,检测报告基因lucferase的表达,给予DHT、FLU后检测该系统的有效性和特异性,并用2 ,4 DDT、METH等受试物进行验证。结果 转染后的CHO细胞对DHT呈明显的剂量-反应关系,1×10 - 1 0 mol LDHT可出现明显的兴奋效应,至1×10 - 7mol L可达到最大反应值,而未转染雄激素受体质粒与DHT无明显反应,FLU可以显著抑制二氢睾酮的激动效应,说明检测系统有效、特异。验证结果表明3×10 - 7mol L以上2 ,4 DDT及3×10 - 7mol L以上METH可对雄激素受体活性产生抑制作用,2 ,4 DDT的抑制作用强于甲氧氯。结论 本试验建立的基于报告基因的体外(抗)雄激素检测系统是可行的,2 ,4 DDT、甲氧氯有明显的抗雄激素活性作用。

报告基因方法检测壬基酚、双酚A抗雄激素样活性的体外研究

[目的]利用基于报告基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)体外抗雄激素检测方法对壬基酚、双酚A的抗雄激素样活性进行研究,为进一步验证该法在检测抗雄激素样物质的可行性和揭示内分泌干扰作用的机制提供依据。[方法]采用本室建立的瞬时转染人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV-Luc及内对照质粒phRL-SV40的CHO细胞,在给予1×10-7mol/L二氢睾酮(DHT)后给予不同浓度的壬基酚(NP)及双酚A(BPA),检测报告基因表达活性。[结果]浓度均>1×10-6mol/L的NP、BPA可抑制1×10-7mol/LDHT产生的雄激素样作用,两者具有抗雄激素活性,但较雄激素拮抗剂氟他安(FLU)弱,BPA的抑制作用强于NP。[结论]NP、BPA有一定的抗雄激素活性,BPA的抑制作用强于NP。

实验性肝癌雄激素受体表达的病理意义

目的 探讨肝癌癌变过程中雄激素受体 (AR)表达的动态变化和病理意义。方法 以二甲氨基偶氮苯 ( 3′ Me DAB)建立大鼠诱发性肝癌模型 ,将 6 0只雄鼠分为 2组 :诱癌组 (n =35 ) ,以 3′ Me DAB诱癌 ,对照组 (n =2 5 ) ,以精制大米喂服。放射配基结合技术检测各实验期大鼠肝脏AR的定量表达。结果 诱癌组大鼠肝重 /体重比值在第 4、5个月时大幅度上升 (P <0 .0 5 )。诱癌组雄激素受体定量以癌变启动期 (第 1个月 )和成癌期 (第 5个月 )最高 ,第 2个月最低 ,细胞核AR分别为 ( 5 6 .2 8± 9.48) ,( 5 9.49± 4.42 )和 ( 33.5 2± 3.2 4)fmol/mg蛋白质。对照组大鼠的生理性AR表达与年龄依赖的性活动能力一致。诱发癌瘤受体定量以肝细胞型肝癌最高 (P <0 .0 5 ) ,且癌瘤组织高于癌周组织 (P <0 .0 5 )。结论 实验性肝癌癌变特定阶段雄激素受体表达活跃 。

大黄素通过抑制雄激素受体表达抑制前列腺癌细胞生长的体内实验研究

目的 进一步证实大黄素在体内对前列腺癌的作用和作用机制。方法 选用PC3-AR荷瘤裸鼠和C3 ( 1) /SV40 转基因小鼠作为动物模型,分别设对照组和治疗组,对照组腹腔注射DMSO ,治疗组腹腔注射大黄素4 0mg/ (kg·d)。每周测动物体重及肿瘤大小。结果 在PC3-AR荷瘤裸鼠中,治疗组小鼠肿瘤体积明显小于对照组(P <0 0 0 1)。在C3 ( 1) /SV40 转基因小鼠中,治疗组小鼠的生存时间明显长于对照组(P <0 0 0 1)。与治疗组相比,对照组小鼠的体重明显降低,皮毛光滑度差,活动能力差。对C3 ( 1) /SV40 转基因小鼠肿瘤进行组织化学染色和Westernbloting分析表明:治疗组小鼠肿瘤表达雄激素受体阳性细胞明显减少(P <0 0 5 ) ;雄激素受体的表达与对照组相比也有明显的降低。此外,对照组小组(1/ 7)与治疗组(7/ 7)相比更具有向周围组织转移和浸润的倾向。以上结果证明了大黄素在体内对前列腺癌的作用机制与体外相同。结论 大黄素不但对前列腺癌的生长有明显的抑制作用,还可抑制前列腺癌的发生。提示大黄素不仅可用于前列腺癌的临床治疗,也可用于前列腺癌的预防。

骨肉瘤中P53蛋白和雄激素受体的表达及意义

P53基因是一种肿瘤抑制基因，其突变失活在肿瘤演变过程中具有重要意义。性激素受体可存在于许多非激素依赖性肿瘤中，其中雄激素受体（AR）与一些肿瘤的关系引起人们的注意，本实验选取不同类型的骨肉瘤蜡块包埋组织50例，其中骨母细胞型20例，软骨母细胞型12例，纤维母细胞型13例，其他型5例，P53、AR单克隆抗体工作浓度1：100，采用SP法行免疫组织化学实验，PBS和血清代替一抗分别作空白对照和阴性对照，结果进行x^2及相关性检验统计学分析。

心血管系统性激素受体及其作用

60年代初,Jensen等首次用放射性配基法测定了体内的雌激素受体,这极大地推动了对性激素及其靶器官的研究。动物实验证明,哺乳动物的心血管系统也存在性激素受体,但对其研究较少。本文就目前有关这方面的研究进展加以综述。

雄激素受体与乳腺癌的相关性

乳腺癌是一种激素依赖性肿瘤，乳腺癌患者雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）水平的检测已成为临床实验室的常规检测项目。然而，雄激素和雄激素受体（AR）在乳腺癌生物学中的作用以往一直是临床上和基础研究中被忽略的领域。近年来随着检测技术的改进和发展，已有研究报告AR多与ER、PR共表达于乳腺癌，AR表达率甚至高于ER、PR。而且，AR也存在于通常认为的对性激素不敏感的ER、PR阴性乳腺癌，检出率达45％-50％。越来越多的实验研究发现AR与乳腺癌的发生、发展和预后密切相关，这些引起了人们的重视。现就国际上AR与乳腺癌关系研究的新进展作一综述。

蛇床子素对生殖系统损伤小鼠血清睾酮和AR表达的影响

目的:研究蛇床子素对环磷酰胺致生殖系统损伤雄性小鼠血清睾酮和睾丸雄激素受体(AR)表达的影响。方法:建立环磷酰胺致生殖系统损伤雄性小鼠模型,灌胃蛇床子素20天后,用放免法测定血清睾酮水平,用免疫组化法测定AR含量,计算性器官脏器系数。结果:蛇床子素高剂量可显著升高环磷酰胺致生殖系统损伤雄性小鼠血清中睾酮的含量(P<0.05),免疫组化结果显示,高剂量可增加睾丸肌样细胞AR阳性细胞表达百分率,高、低剂量可增加精液囊的脏器系数。结论:蛇床子素可升高环磷酰胺致生殖系统损伤小鼠血清睾酮含量的降低;增强睾丸肌样细胞AR的表达。

黄荷凤课题组在多囊卵巢综合征发病机制研究方面获得新突破

上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院研究人员发现雄激素受体剪接变体在多囊卵综合征发病机制中的重要作用 上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院及教育部生殖遗传重点实验室的黄荷凤教授课题组在多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome, PCOS）发病机制的研究上获关键性突破，

亮丙瑞林治疗肯尼迪病的开放式研究

肯尼迪病的病因为位于Xq11-12的雄激素受体（androgen receptors，AR）基因发生突变。动物实验结果表明，亮丙瑞林可有效改善肯尼迪病转基因鼠的临床症状。为检验亮丙瑞林对于肯尼迪病患者的疗效，我们进行了亮丙瑞林治疗肯尼迪病的开放式临床研究。

多沙唑嗪诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡机制的研究

我们采用体外实验方法观察α1受体阻断剂多沙唑嗪对人雄激素非依赖前列腺癌细胞株PC-3增殖的抑制作用，探讨其细胞凋亡的信号传导途径。