四羟基壬烯对前列腺癌雄激素拮抗作用的机制研究

目的:探讨四羟基壬烯(4-HNE)通过雄激素受体(AR)-促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在前列腺癌雄激素拮抗作用中的机制。方法:将前列腺癌LNCaP细胞分为野生型组(对照组)和转染组,转染组又分为空载体转染组(NC-L7组)及GSTA4基因转染组(A0718,GSTA4-OE组)。GSTA4-OE组给予LNCaP细胞培养、GSTA4质粒转染构建LNCaP的4-HNE稳转细胞系,对照组给予LNCaP细胞培养、未做GSTA4质粒转染。通过不同浓度4-HNE(0、40、80、120μmol/L)刺激前列腺癌细胞,活化AR信号通路,采用Western印迹检测AR、MAKP、AKT、PKCα蛋白的表达。选择60例患者前列腺癌组织及60例患者良性前列腺增生组织,采用免疫组化染色技术测定以上组织中4-HNE的阳性表达率,分析4-HNE阳性表达与肿瘤Gleason分级以及前列腺癌进展为CRCP的相关性。结果:GSTA4-OE组细胞内4-HNE的水平受到抑制。Western印迹检测结果显示:与对照组相比,GSTA4-OE组细胞PKCα蛋白表达水平显著降低(P<0.05),AR、AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。40、80、120μmol/L 4-HNE处理前列腺癌细胞后,与对照组相比,处理组AKT的表达量显著降低(P<0.01),MAKP(P<0.01)、PKC(P<0.01)、AR(P<0.01)的表达量显著升高。免疫组化结果显示,60例良性前列腺增生组织中4-HNE阳性率为5.0%,60例前列腺癌组织中4-HNE阳性率为63.3%,差异有统计学意义(P<0.01)。在Gleason分级1~5级中4-HNE阳性率分别为41.2%、50.0%、63.6%、81.8%、100.0%,随着Gleason分级越高,4-HNE阳性率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。随访10~35个月,其中33例患者进展为CRCP,27例患者未进展为CRCP,4-HNE在2组中的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在4-HNE作用下AR-MAPK通路相关蛋白表达上升,4-HNE可能通过AR-MAPK通路对前列腺癌进展起到促进作用,有望成为CRPC新的治疗靶点。

山楂酸对异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌纤维化的影响

目的探讨山楂酸(MA)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌纤维化的影响。方法使用ISO诱导成年雄性C57BL/6小鼠心肌纤维化,MA给药2周,检测MA对心功能和纤维化的影响。RT-PCR和免疫印迹检测纤维化标志物和信号通路分子变化。将原代培养的大鼠成纤维细胞中分别加入磷酸缓冲盐溶液(PBS)、PBS+p38 MAPK抑制剂(SB203580)、PBS+MA、ISO、ISO+SB203580、ISO+MA。48 h后收集细胞进行后续检测。结果本研究成功制备心肌纤维化小鼠模型,ISO+MA组的左心室短轴缩短率(FS)和左心室内压最大上升速率和最大下降速率(±dp/dt)显著高于ISO组[分别为(35.1±1.8)%比(28.5±2.6)%、(7256±153)mmHg/s比(6402±240)mmHg/s、(7156±163)mmHg/s比(6319±219)mmHg/s,P<0.05];ISO+MA组间质和血管周胶原沉积程度高于ISO组(P<0.05),ISO+MA组的COL-1、COL-3和TGF-βmRNA相对水平显著低于ISO组(1.70±0.24比3.69±0.34、1.72±0.56比4.84±0.82、1.52±0.19比2.64±0.29,P<0.05);ISO+MA组的p38 MAPK和Smad3的磷酸化水平和TGF-β1蛋白表达水平低于ISO组(1.67±0.35比2.61±0.58、1.68±0.23比2.52±0.19、1.56±0.15比2.48±0.26,P<0.05);体外细胞实验结果显示,p38 MAPK特异性抑制剂(SB203580)组和MA组的COL-1、COL-3、TGF-βmRNA水平均显著低于ISO组(分别为2.25±0.51,2.16±0.48比5.29±1.21;1.58±0.34,1.69±0.29比4.97±1.32;1.41±0.31,1.55±0.38比3.53±0.56,P<0.05);SB203580组和MA组的p38 MAPK、Smad3的磷酸化水平均显著低于ISO组,TGF-β1的蛋白表达低于ISO组(分别为1.81±0.18,1.77±0.16比2.56±0.32;1.85±0.21,1.81±0.17比2.48±0.37;1.84±0.24,1.72±0.17比2.52±0.29,P<0.05)。结论MA可抑制p38 MAPK的磷酸化,进而抑制经典的TGF-β1/Smads纤维化信号通路来发挥抗纤维化的作用。