四羟基壬烯对前列腺癌雄激素拮抗作用的机制研究

目的:探讨四羟基壬烯(4-HNE)通过雄激素受体(AR)-促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在前列腺癌雄激素拮抗作用中的机制。方法:将前列腺癌LNCaP细胞分为野生型组(对照组)和转染组,转染组又分为空载体转染组(NC-L7组)及GSTA4基因转染组(A0718,GSTA4-OE组)。GSTA4-OE组给予LNCaP细胞培养、GSTA4质粒转染构建LNCaP的4-HNE稳转细胞系,对照组给予LNCaP细胞培养、未做GSTA4质粒转染。通过不同浓度4-HNE(0、40、80、120μmol/L)刺激前列腺癌细胞,活化AR信号通路,采用Western印迹检测AR、MAKP、AKT、PKCα蛋白的表达。选择60例患者前列腺癌组织及60例患者良性前列腺增生组织,采用免疫组化染色技术测定以上组织中4-HNE的阳性表达率,分析4-HNE阳性表达与肿瘤Gleason分级以及前列腺癌进展为CRCP的相关性。结果:GSTA4-OE组细胞内4-HNE的水平受到抑制。Western印迹检测结果显示:与对照组相比,GSTA4-OE组细胞PKCα蛋白表达水平显著降低(P<0.05),AR、AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。40、80、120μmol/L 4-HNE处理前列腺癌细胞后,与对照组相比,处理组AKT的表达量显著降低(P<0.01),MAKP(P<0.01)、PKC(P<0.01)、AR(P<0.01)的表达量显著升高。免疫组化结果显示,60例良性前列腺增生组织中4-HNE阳性率为5.0%,60例前列腺癌组织中4-HNE阳性率为63.3%,差异有统计学意义(P<0.01)。在Gleason分级1~5级中4-HNE阳性率分别为41.2%、50.0%、63.6%、81.8%、100.0%,随着Gleason分级越高,4-HNE阳性率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。随访10~35个月,其中33例患者进展为CRCP,27例患者未进展为CRCP,4-HNE在2组中的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在4-HNE作用下AR-MAPK通路相关蛋白表达上升,4-HNE可能通过AR-MAPK通路对前列腺癌进展起到促进作用,有望成为CRPC新的治疗靶点。