雄激素致高胰岛素与高雄激素性无排卵大鼠模型

给9日龄 SD 雌性大鼠注射丙酸睾丸酮造成雄激素致不孕大鼠(ASR),分别观察卵巢形态、血液及组织匀浆激素含量、糖耐量和血胰岛素水平以及卵泡膜和卵巢间质细胞在体外不同刺激状态下(空白、加胰岛素、加 hCG、加胰岛素+hCG)的 T 含量。结果发现:(1)卵巢体积缩小,呈多囊性改变,无黄体;(2)垂体 LH 含量比对照组降低(P<0.01),肾上腺及卵巢中 T、E_2 含量明显升高(分别为P<0.05及P<0.01);(3)糖耐量下降,胰岛素水平显著升高(分别为 P<0.01及 P<0.05);(4)卵泡膜和卵巢间质细胞体外培养 T 含量明显高于对照组(P<0.001),在 hCG 协同作用下胰岛素可使 ASR 及正常大鼠卵巢 T 含量明显增加(P<0.01)。提示雄激素致不孕大鼠可作为高胰岛素和高雄激素性无排卵的动物模型。

饮食和养阴药对雄激素致不孕大鼠排卵及能量状态、血脂的影响

目的探讨饮食和养阴药对雄激素致不孕大鼠(ASR)排卵及能量状态、血脂的影响及其相互关系。方法给出生9日龄SD雌性大鼠丙酸睾酮1.25mg皮下注射,建立ASR模型,将其随机分为①模型组;②中药组(80日龄起灌服滋肾阴药“天癸方”);③节食组(80日龄开始饲料减为自由进食时的70%);④中药+节食组;⑤设立对照组。每组14只。各组于110日龄称重,断头处死,测定各组血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油、血糖的变化;同时对能量状态指标(每日摄食量、腹膜后脂肪垫、体重)进行评估;卵巢苏木精伊红染色作形态学观察。结果雄激素致不孕大鼠呈高代谢、能量失衡肥胖状态,其低密度脂蛋白胆固醇、葡萄糖较对照组增加(P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、三酰甘油无明显改变(P>0.05),镜下见卵巢卵泡囊性扩张;分别予滋肾阴中药、节食、滋肾阴+节食治疗后,能量失衡肥胖状态改善,低密度脂蛋白胆固醇、葡萄糖恢复正常,卵巢排卵功能不同程度地恢复,以中药+节食组治疗效果最佳(排卵率达71.43%),而中药组、节食组排卵率分别为42.86%,28.57%。结论雄激素致不孕大鼠有肥胖、脂质代谢紊乱及不排卵特点。养阴药+节食能改善能量代谢紊乱,促进排卵,且两者有协同作用。

补肾助孕汤对雄激素致不孕大鼠的促排卵及卵巢IGF-1表达的影响

目的探讨补肾助孕汤对雄激素致不孕大鼠(ASR)促排卵的作用机制。方法选择9日龄SD龄雌性大鼠随机分为4组,正常对照组:皮下注射中性茶油;ASR模型组:皮下注射丙酸睾丸酮;中药组及西药组:ASR模型自81 d龄起,每天灌胃给药;连续28 d。采用阴道涂片测定大鼠动情周期及排卵率,采用ELISA法测定促卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)及孕酮(P)水平;采用免疫组织化学sp检测卵巢细胞胰岛素样生长因子(IGF-1)表达。结果补肾助孕汤可明显增加大鼠卵巢组织各级卵泡及黄体数目,恢复排卵功能;提高血清中FSH、LH及P水平,并且降低卵巢细胞中IGF-1的表达。结论补肾助孕汤可通过调节卵巢局部因子IGF-1及相应激素,促进卵泡生长发育及排出。

畅枢汤对痤疮模型大鼠雄激素受体的影响

目的:探讨畅枢汤对痤疮模型大鼠雄激素受体(androgen receptor,AR)的影响。方法:取36只Sparague Dawley大鼠,6只组成正常组;其余大鼠皮下注射痤疮丙酸杆菌菌液建立大鼠痤疮模型,造模成功后,随机分为模型组、异维A酸组、畅枢汤组、畅枢汤+异维A酸组,每组6只。异维A酸组以31μL异维A酸软胶囊混悬液加2 mL蒸馏水灌胃,畅枢汤组以畅枢汤颗粒1.542 g加2 mL蒸馏水灌胃,畅枢汤+异维A酸组将1.542 g畅枢汤颗粒及31μL异维A酸软胶囊混悬液加入2 mL蒸馏水灌胃,正常组和模型组给予2 mL蒸馏水灌胃。1 mL/次,2次/d,连续干预4周。分别在造模前后、干预2周和4周末从大鼠尾静脉采血,检测各组大鼠血清AR水平。结果:建模后,与正常组对比,模型组和3个药物组AR水平均升高(P<0.01)。药物干预2周和4周末,与同期模型组对比,3个药物组的AR水平均下降,且干预4周AR水平低于干预2周(P<0.01或P<0.05);畅枢汤+异维A酸组下降程度最明显,其次为异维A酸组和畅枢汤组(P<0.01或P<0.05)。结论:畅枢汤可下调痤疮模型大鼠AR表达,联合异维A酸软胶囊可增强其下调作用,且与干预时间成正相关。

吴萸当归四逆汤对不孕症大鼠子宫、卵巢及血清性激素水平的影响

目的:研究吴萸当归四逆汤治疗不孕症的作用机理,为临床提供科学依据。方法:用丙酸睾酮于大鼠颈背部皮下注射复制雄激素致无排卵不孕症大鼠模型(ASR),观察吴萸当归四逆汤对模型大鼠的体重差、子宫/卵巢指数、子宫/卵巢组织形态学及血清性激素水平、Ca^(2+)含量的影响。结果:吴萸当归四逆汤有降低ASR大鼠体重的趋势,能明显升高子宫指数,使子宫内膜厚度显著增厚,卵泡总数显著增加(均P<0.01);并可使ASR大鼠的血清T水平显著降低,P和E_2水平显著升高(P<0.05或P<0.01),FSH和Ca^(2+)有升高趋势。结论:吴萸当归四逆汤可能具有改善不孕症大鼠肥胖症的作用趋势,具有调节性激素水平、促进排卵与子宫内膜生长的作用,从而有助于受孕。

逍遥丸对雄激素致无排卵大鼠卵巢功能的影响

目的:探讨逍遥丸对雄激素致无排卵大鼠(ASR)卵巢功能的影响,研究其治疗无排卵性疾病的作用机制。方法:出生9日龄SD雌性大鼠随机分为ASR模型组及对照组。模型组大鼠1次性皮下注射丙酸睾丸酮(T)1.25mg,建立ASR模型,模型组给予逍遥丸治疗7周。选择动情前期处死,观察比较各组大鼠血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)水平的变化,卵巢和子宫指数、卵巢形态学的变化,研究逍遥丸治疗ASR的作用机制。结果:无排卵大鼠血清E2、T水平明显高于正常组(P<0.01),卵巢、子宫重量指数明显降低。卵巢形态学观察:卵巢多囊变、黄体罕见,卵母细胞消失。逍遥丸治疗后,血清T、E2激素水平降低(P<0.01)。卵巢、子宫重量指数明显增加,改善了卵巢形态结构。结论:逍遥丸可能通过调节性激素水平,进而改善卵巢形态结构,改善卵巢功能来达到治疗无排卵的作用。

补肾调经方对雄激素诱导无排卵大鼠氧化损伤、抗氧化能力及卵巢雌激素水平的影响

目的 :探讨补肾调经方对无排卵大鼠血浆丙二醛 (MDA )、血清总胆红素 (Tbil)、直接胆红素 (Dbil)、间接胆红素 (I bil)、总抗氧化能力 (T AOC)及卵巢雌激素水平的影响。方法 :采用雄激素诱导无排卵模型大鼠为研究对象 ,应用苯甲酸钠—咖啡因比色法、比色法、放免法测定大鼠血浆丙二醛 ,血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总抗氧化能力和雌激素水平。结果 :无排卵大鼠血浆丙二醛含量显著高于正常大鼠 ,血清总胆红素、直接胆红素和总抗氧化能力明显低于正常组。补肾调经方能显著提高无排卵大鼠血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素及总抗氧化能力 ,降低丙二醛含量。结论 :氧化损伤可能影响无排卵的发生 ,补肾调经方具有提高无排卵大鼠血清总胆红素、直接、间接胆红素水平及总抗氧化能力 。

补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢形态及性激素的影响

目的通过观察补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征模型大鼠的性激素、抗苗勒氏管激素(antiMüllerian hormone,AMH)、卵巢形态的影响,探讨补肾促排卵汤治疗多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的作用机制。方法应用补肾促排卵汤作用于以脱氢表雄酮诱导的PCOS大鼠模型,对卵巢进行形态学分析并检测血清性激素、AMH。结果与正常组相比,模型组大鼠卵巢弥漫性囊性重度扩张,可见大小不等的囊腔,粒层细胞被挤压呈扁平或立方形,黄体及各种发育阶段卵泡稀少。补肾促排卵汤能明显改善PCOS模型大鼠成熟卵泡个数、黄体个数、性激素及AMH水平,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补肾促排卵汤能改善PCOS模型大鼠血清性激素水平、降低血清AMH及恢复卵巢排卵功能,从而达到治疗多囊卵巢综合征的作用。

补肾固冲系列方对雄激素所致无排卵大鼠垂体的影响

卵泡成熟及排卵是月经生理、生殖内分泌生理及受孕的基础 ,卵泡发育及成熟障碍可出现功能失调性子宫出血、月经稀发、闭经、不孕等无排卵性疾病。西医多采用激素促排卵 ,但存在许多问题。补肾固冲系列方是著名中医妇科专家顾小痴教授的验方之一 ,临床对治疗功能性子宫出血、不孕症、闭经等疾病有显著疗效。本研究是在补肾固冲系列方药治疗功能性子宫出血临床研究基础上 ,通过动物实验观察补肾固冲系列方对雄激素所致无排卵大鼠 (ASR)下丘脑—腺垂体—卵巢轴的影响 ,从细胞水平探讨补肾调经中药的调经和治疗无排卵疾病的作用环节和机理。为中药治疗无排卵疾病提供客观依据。本研究为河北省科技厅资助项目 (NO 96Z1113) 。

环磷酰胺复制中老年男性雄激素部分缺乏综合征大鼠模型的研究

目的应用环磷酰胺复制中老年男性雄激素部分缺乏综合征的大鼠模型建立。方法取20只大鼠随机分为2组:正常组,模型组。分别于造模前、造模后1 d、造模后30 d观察大鼠一般情况、体质量、悬尾实验和强迫游泳实验时间以及睾丸指数,放射免疫法测定各组造模前后血清TT、FT水平,免疫组化法测定各组大鼠睾丸间质细胞stAR蛋白平均灰度值,并进行统计分析。结果与正常组比较,模型组大鼠悬尾实验时间延长,差异具有统计学意义(P<0.01),强迫游泳实验时间缩短,差异具有统计学意义(P<0.01),血清TT、FT水平、stAR蛋白平均灰度值均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论环磷酰胺造成的大鼠血清TT、FT水平下降,行为学改变的反睾丸组织退行性变,基本类似PADAM模型。

补肾法对肾虚排卵抑制模型大鼠妊娠的内分泌激素、脏器湿重及妊娠率的影响

目的:探讨补肾法对肾虚排卵抑制模型大鼠妊娠的内分泌激素、脏器湿重及妊娠率的影响。方法:采用羟基脲灌胃造肾虚排卵抑制大鼠模型,造模成功后予以罗氏促排卵汤和/或针灸补肾法治疗,治疗后的第6天与雄鼠合笼,合笼后继续治疗10d取出雄鼠,1周后观察大鼠内分泌激素、脏器湿重及妊娠率的情况。结果:治疗后各治疗组大鼠内分泌激素及脏器湿重及妊娠率均有不同程度的增加。结论:补肾法包括补肾复方和/或针刺加电针对肾虚-排卵抑制病理模型大鼠进行治疗,可以有效增加大鼠的妊娠率,但对大鼠其他脏器湿重、内分泌指标的影响无统计学意义。

通脉大生片对肾虚排卵障碍不孕模型大鼠卵巢基质金属蛋白酶-9的影响

目的:探讨通脉大生片治疗对雄激素致不孕大鼠模型(ASR)卵巢基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法:采用雄激素致不孕大鼠模型(ASR模型),以原位杂交方法观察分析卵巢MMP-9 mRNA信号表达的情况。结果:由于药物的干预,各个用药组MMP-9阳性细胞的表达浓度和表达总量均高于模型组,以通脉大生片高剂量组卵巢MMP-9 mRNA表达尤其明显,与正常组水平接近,差异无统计学意义(P>0.05)。通脉大生片高剂量组卵巢MMP-9 mRNA表达亦明显优于氯米芬组,差异(P<0.05)。结论:通脉大生片可能通过促进肾虚排卵障碍不孕大鼠卵巢基质金属蛋白酶-9的表达,发挥其对不孕症的治疗作用,这可能是其促进卵泡发育和卵巢排卵的机制之一。

雄激素致不孕大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及相关酶caspase-3的研究

目的探讨ASR卵巢颗粒细胞凋亡及凋亡相关酶caspase-3的表达。方法9日龄sD雌性大鼠颈背部皮下注射丙酸睾丸酮制造无排卵模型，3—4月龄时191道脱落细胞涂片选取动情前期处死大鼠，免疫组化法检测ASR卵巢颗粒细胞凋亡及相关酶caspase-3的表达。结果在ASR和正常大鼠均检测到颗粒细胞的凋亡及凋亡相关酶easpase-3的表达，模型组颗粒细胞凋亡及凋亡相关酶caspase-3的表达较强。结论卵巢颗粒细胞凋亡及凋亡相关酶caspase-3的表达增强导致了排卵障碍性不孕症的发生。

雄激素致无排卵大鼠血清胆红素的变化

目的通过观察雄激素致无排卵大鼠血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素的情况,研究胆红素与无排卵性疾病的关系。方法采用9d龄SD雌性大鼠颈背部皮下注射雄激素的方法制造无排卵模型,以正常大鼠为对照。观察动情前2组大鼠胆红素含量的变化。结果无排卵大鼠血清总胆红素、间接胆红素水平明显低于正常组。结论血清总胆红素、间接胆红素水平降低可能与无排卵的发生有关。

补肾中药对雄激素致不孕大鼠基质金属蛋白酶-9的影响

目的 :观察补肾中药治疗前后雄激素致不孕大鼠模型 (ASR)基质金属蛋白酶 9(MMP 9)的变化。方法 :建立雄激素致不孕大鼠模型 ,通过阴道涂片筛选各组大鼠。进行MMP 9原位杂交 ,显微镜检并电脑摄像 ,图像分析卵巢MMP 9RNA信号表达强度。结果 :MMP 9mRNA的表达面积和表达强度 :模型组 <正常组 <阳性组 <中药组 (P <0 0 1)。结论 :卵巢基质金属蛋白酶 9mRNA在雄激素致不孕大鼠表达水平较其它组为低 。

雄激素致无排卵大鼠卵巢转化生长因子β1及其受体的变化

目的:探讨雄激素致无排卵大鼠卵泡发育的影响。方法:建立雄激素致无排卵大鼠模型,并设正常对照组,放免法测定血清睾酮(T),HE染色观察卵巢组织形态学变化,免疫组化法检测卵巢转化生长因子β1及其受体(TGFβ1/TGFβ1R)的表达。结果:①模型组血清T水平明显高于对照组;②模型组大鼠卵巢中卵泡囊状扩张,颗粒细胞层极薄;而对照组可见发育期各级卵泡及黄体形成;③模型组卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞、间质细胞TGFβ1/TGFβ1R的表达明显高于对照组。结论:雄激素致无排卵大鼠卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞、间质细胞TGFβ1/TGFβ1R的表达明显增高可能是导致卵泡发育障碍、无排卵的因素之一。

控制性超促排卵大鼠模型的建立

目的选择理想的符合临床实际的控制性超促排卵(COH)大鼠模型,为后续的实验提供良好的实验基础。方法将75只大鼠随机平均分为正常组(N),模型10组(M10),模型20组(M20),模型40组(M40)和模型100组(M100),每组各15只。各模型组分别于动情期后一日的下午5:00给予腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10单位、20单位、40单位和100单位,并于48 h后,再分别给予腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)10单位、20单位、40单位和100单位,注射完后立即合笼,以次日行阴道涂片见大量精子记为怀孕1 d。在第8天,行剖宫探查,记录大鼠的妊娠情况和着床的胚泡数。另取25只大鼠,按上述方法随机分对照组和不同剂量干预组,每组5只,各组大鼠在妊娠第5天取材,处理后观察子宫内膜胞饮突和LIF蛋白的表达。结果各组大鼠交配率无统计学差异(P>0.05)。与N组相比,M10组大鼠怀孕率无明显降低(P>0.05),M20、M40和M100组大鼠怀孕率明显降低(P<0.01);和N组相比,M10组大鼠胚泡着床位数无明显增加(P>0.05),M20、M40和M100组大鼠胚泡着床数明显增高(P<0.05)。和N组相比,M10大鼠子宫内膜LIF蛋白表达量无明显差异(P>0.05);M20、M40和M100组大鼠子宫内膜LIF蛋白表达量明显降低(P<0.05);M40和M100组大鼠子宫内膜LIF蛋白表达量比M20组更少,但差异无统计学意义(P>0.05)。N组大鼠在妊娠第5天子宫内膜腺上皮细胞表面胞饮突丰富;M20大鼠子宫内膜腺上皮细胞表面几乎未见明显胞饮突表达。结论M20组大鼠妊娠率较正常组明显降低,且平均胚泡数较高,胞饮突提前出现,LIF表达较正常组降低,是较为符合临床实际的理想模型。