三氧化二砷对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株细胞增殖及细胞周期的影响

目的 了解三氧化二砷对雄激素非依赖性前列腺癌PC 3细胞株细胞增殖及细胞周期的影响。方法 以不同浓度的三氧化二砷作用于PC 3细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法、流式细胞仪、相差显微镜和透射电镜观察细胞增殖状况、细胞周期变化以及细胞形态学的变化。结果 各浓度的三氧化二砷均可抑制PC 3细胞的增殖 ,具有剂量和时间累积效应 (P <0 0 1 )。三氧化二砷可使PC 3细胞生长停滞于G1 期。G1 期细胞数目随三氧化二砷的作用浓度增高而增多。其中3μmol/L、6 μmol/L、1 0 μmol/L的三氧化二砷作用 4 8小时后 ,可见PC 3细胞凋亡 ,分别为 1 1 8%,1 2 7%,2 9 6 %。透射电镜检查 3μmol/L三氧化二砷作用 4 8小时后的PC 3细胞 ,可见明显的凋亡小体。结论 三氧化二砷可抑制PC 3细胞的增殖 ,并具有剂量和时间依赖性 ;抑制细胞增殖与细胞周期阻滞于G1 期有关 ;三氧化二砷并可诱导PC 3细胞凋亡。

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞抑制效应

目的探讨姜黄素在体外对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3生物活性的影响。方法分别采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)比色法、流式细胞分析、人工基底膜穿透法分析姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。采用Western blot法检测姜黄素在体外对核因子κB(NF-κB)、蛋白激酶(Akt)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)蛋白表达的影响。结果姜黄素干预后,PC-3细胞的增殖水平和细胞迁移率下降,而凋亡率提高(P<0.01)。姜黄素能在体外抑制PC-3细胞的NF-κB、Akt、uPA蛋白的表达(P<0.01)。结论姜黄素可在体外显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3的增殖和侵袭,并诱导细胞凋亡;其机制可能通过抑制NF-κB、Akt、uPA等信号通路。

米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌LNCaPC_(4-2)和PC3细胞的作用机制

为探讨抗孕激素药米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株LNCaPC4 2 、PC3的促凋亡及生长抑制作用 ,将不同浓度的米非司酮加入到体外培养的 2株前列腺癌细胞中 ,分别在培养后 3d、5d、7d用SRB染色法检测细胞生长抑制率 ;用流式细胞仪检测加药后 2 4h、48hLNCaPC4 2 和PC3细胞凋亡情况。发现 :高浓度米非司酮 ( 2 0μmol/L)对雄激素非依赖性细胞株LNCaPC4 2 、PC3于 3d、5d、7d的细胞生长抑制率分别为 5 5 .79%、66.3 7%、71 .5 4%和 87.42 %、98.1 5 %、1 0 0 %。不同浓度米非司酮即 2 .5、5、1 0、1 5、2 0 μmol/L对LNCaPC4 2 、PC3细胞株 7d时的细胞生长抑制率分别为 1 7.0 7%、3 5 .77%、5 3 .66%、63 .41 %、71 .5 4%和 48.2 5 %、63 .42 %、82 .3 7%、95 .3 1 %、1 0 0 %。前列腺癌细胞株LNCaPC4 2 受 1 5 μmol/L米非司酮作用 2 4h和 48h细胞凋亡率分别为 1 9.3 0 %、3 0 .0 4% ;PC3受米非司酮 1 5 μmol/L作用 2 4h细胞凋亡率为 44.5 2 %。提示 :米非司酮对LNCaPC4 2 、PC3细胞株有时间和剂量依赖的生长抑制作用 ,其生长抑制作用是通过促进细胞凋亡实现的。

iNOS基因转染对雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145生长的影响

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转染对雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145生物学行为的影响。方法:将iNOS基因转染到DU145细胞并筛选出阳性细胞进行扩增,并设空载体组和对照组。观察细胞的形态变化,MTT法绘制生长曲线;流式细胞术检测细胞凋亡率;了解NOS抑制剂对转染细胞的影响。结果:转染iNOS后,DU145细胞分泌的NO[(272.50±15.82)μmol/L]显著高于空载体组[(122.00±18.93)μmol/L]和对照组[(121.00±6.98)μmol/L](P<0.05)。流式细胞术检测结果提示转染iNOS组细胞凋亡率[(42.78±2.01)%]明显高于空载体组[(30.65±1.46)%]和对照组[(28.96±1.50)%](P<0.05)。MTT测定结果提示转染组细胞生长较空载体组和对照组减慢(P<0.05),NOS抑制剂可以加快其生长,但无显著性差异(P>0.05)。结论:iNOS基因转染可以使DU145细胞分泌较高浓度的NO,诱导细胞凋亡,抑制细胞生长,为晚期雄激素非依赖性前列腺癌的基因治疗提供一个有效的靶点。

TNFα及PDTC诱导雄激素非依赖性前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨雄激素非依赖性前列腺癌治疗的新途径。方法 以含 2 0 %小牛血清的RPMI - 16 4 0为培养基 ,在 37℃、5 %CO2 培养箱中孵育雄激素非依赖性前列腺癌细胞株 (PC - 3) ,倍增至所需的细胞数后 ,行SCID鼠右腋皮下接种 ,建立雄激素非依赖性前列腺癌动物模型。待瘤体长至约 1.0cm3 大小时 ,随机分成 4组 :A组 (对照组 ) ,皮下注射生理盐水每只 0 .2ml;B组瘤体内注射TNFα(2 0 0 μg/kg体重 ) ;C组腹腔注射PDTC(2 0 0mg/kg体重 ) ;D组同时注射TNFα及PDTC(剂量同B、C组 )。隔日 1次 ,2 8d后取出瘤体 ,进行瘤体大小及细胞凋亡的检测。结果 各用药组瘤体大小及凋亡率与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ,B组抑瘤率为 70 .9% ,C组为4 5 .9% ,D组为 89.5 %。用药前后的瘤重相比 ,D组有显著性差异 (P <0 .0 1) ,B、C组无显著性差异 (P >0 .0 5 )。在治疗过程中 ,对照组死亡 1只 ,用药组无死亡。结论 TNFα、PDTC对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生长均有抑制作用 ,TNFα联合PDTC可显著缩小瘤体大小 ,其作用机制可能为 :TNFα诱导PC - 3细胞的凋亡 ,PDTC对TNFα的诱导起增强作用。

敲低前列腺癌相关基因PC-1的表达抑制前列腺癌细胞C4-2雄激素非依赖性生长

目的:研究敲低癌基因D52家族成员PC-1的表达对前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的影响。方法:利用RNA干扰技术构建PC-1稳定低表达的C4-2细胞株;利用四唑盐(MTT)比色实验检测敲低PC-1基因表达对C4-2细胞雄激素非依赖生长的影响。结果:敲低PC-1表达抑制前列腺癌C4-2细胞的生长,并降低了C4-2细胞雄激素非依赖性生长的能力。结论:PC-1基因参与了前列腺癌向雄激素非依赖阶段发展和维持的过程,为进一步研究PC-1在促进前列腺癌细胞发生发展过程中的作用奠定了基础。

蟾毒灵对人雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖及Bcl-2、Bax基因的影响

目的:研究蟾毒灵(bufalin,Bu)对人雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡相关基因Bcl-2、Bax的影响。方法:CCK-8法检测细胞抑制效应,光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测药物诱发细胞凋亡改变,Western-blot法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。结果:CCK-8法检测提示蟾毒灵处理细胞后有显著的增殖抑制作用;光学显微镜观察显示细胞增殖受到抑制并呈凋亡形态改变;流式细胞术检测结果表明,蟾毒灵诱导DU145细胞凋亡、凋亡率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Western-blot检测提示蟾毒灵可增强细胞Bax基因的表达,下调Bcl-2基因的表达。结论:蟾毒灵能抑制人前列腺癌DU145细胞增殖,其机制可能与蟾毒灵调控细胞凋亡效应有关。

雄激素非依赖性前列腺癌的发生相关的细胞信号通路研究

大多数早期的前列腺癌对去势和抗雄治疗敏感,治疗效果较好。但随后前列腺癌细胞逐渐对激素不敏感,此时再用抗雄治疗效果较差,而病人常常死于此转变。为了阐明前列腺癌非雄激素依赖性的转变机制,许多研究工作者对此不断研究并提出多条与之相关的细胞内信号通路的转变。本文主要对几条公认的、对雄激素非依赖性前列腺癌形成起关键作用的信号通路作一个简单的综述,便于了解信号通路如何改变和对肿瘤的形成所起的作用。

肿瘤坏死因子α及吡咯烷二硫代氨基甲酸酯诱导雄激素非依赖性前列腺癌细胞凋亡的观察

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)与吡咯烷二硫代氨基甲酸酯 (PDTC)诱导雄激素非依赖性前列腺癌细胞的凋亡。方法 分别及联合应用TNFα、PDTC ,治疗雄激素非依赖性前列腺癌细胞株 (PC 3)所复制的SCID鼠荷瘤模型 ,随机分成 4组 ,每组 7只 ,观察瘤体变化并检测肿瘤细胞凋亡情况。结果 TNFα及PDTC均可抑制肿瘤生长 ,TNFα与PDTC联合治疗可显著缩小瘤体 ,其凋亡率与对照组有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 TNFα可诱导PC 3细胞的凋亡 。

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌的抑制效应

目的检测抗人转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)对雄激素非依赖性前列腺癌细胞生物学行为的影响,了解抗人TfR mAb对姜黄素抗瘤作用的协同效应。方法利用杂交瘤细胞株制备抗人TfR mAb,分别采用CFSE染色、AnnexinⅤ-PI染色和PI染色法流式细胞仪检测抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。采用FITC标记的鼠抗人TfR mAb检测姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达的影响。采用流式细胞仪进一步检测抗人TfR mAb联合姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期无明显影响(均P>0.05)。姜黄素能够显著上调雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达(P<0.05)。抗人TfR mAb可显著增强姜黄素对PC-3细胞凋亡的诱导作用(P<0.05),而不影响姜黄素对PC-3细胞增殖和细胞周期的影响(均P>0.05)。结论姜黄素可导致雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达增高。抗人TfR mAb单独作用对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生物学行为无显著影响,但抗人TfR mAb可以增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的凋亡效应。

垂体肿瘤转化基因1在雄激素非依赖性前列腺癌发生过程中的表达变化

目的:探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在前列腺癌由激素依赖性转化为激素非依赖性过程中的表达变化。方法:通过在去雄激素培养条件下长期培养雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCa P,建立并验证雄激素非依赖性亚系LNCa P-AI细胞模型,用Western印迹、RT-PCR方法每2周检测在去雄激素培养过程中PTTG1的表达改变。结果:经过3个月培养,成功建立雄激素非依赖性亚系LNCa P-AI细胞模型;在LNCa P细胞中,随着去雄激素培养时间延长,PTTG1的表达水平逐渐升高,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9表达有同步升高趋势。结论:PTTG1表达在雄激素非依赖性前列腺癌发生过程中逐渐增强,可能是晚期前列腺癌基因治疗的靶标之一。

冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制。方法雄性裸小鼠20只,皮下接种DU145细胞,随机分成用药组和对照组。于癌细胞种植第2天起,对照组每天喂饲0.9%氯化钠溶液,用药组每天喂饲冬凌草甲素15mg·kg-1·d-1。记录用药第2～7周末时移植瘤的平均体积。7周后处死小鼠,取肿瘤组织,采用反转录聚合酶链反应检测细胞周期的p16基因、细胞增殖转化相关因子白细胞介素(IL)-6、免疫逃逸相关因子吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的mRNA表达水平。结果用药组裸小鼠移植瘤的生长明显受到抑制,第3周末至第7周末的移植瘤体积均显著小于对照组(P值均<0.001)。第7周结束时与对照组比较,用药组的生长抑制率达到58.12%。7周后,对照组p16mRNA的平均相对表达量为0.46,低于用药组的0.95;对照组IL-6mRNA的平均相对表达量为0.33,高于用药组的0.02;对照组IDOmRNA的平均相对表达量为0.08,而用药组均无明显条带,无法计算相对表达量。结论冬凌草甲素可以显著抑制DU145肿瘤的生长,提示该药对AIPCa有抗癌活性。冬凌草甲素可能是通过阻滞细胞周期,减少其免疫逃逸,以及下调IL-6等抑制AIPCa的生长。

雄激素非依赖性前列腺癌发生的机制

转移性前列腺癌依然是潜在的致死性肿瘤。虽然雄激素剥夺性治疗(androgen deprivation therapy,ADT)至今仍被认为是前列腺癌最为有效的治疗手段,但大多数患者会最终发展成激素非依赖性前列腺癌而死亡。众所周知,引起雄激素受体(andro-gen-independent,AR)活化的机制在激素非依赖性前列腺癌发生过程中发挥着十分重要的作用。最新研究表明,癌干细胞(canc-er stem cells,CSC)或癌细胞的上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)也会促进激素非依赖性前列腺癌的进展。鉴于前列腺癌向激素非依赖性发展途径的多样性,可以想象,在改善患者生存方面取得的真正进展必将依赖于针对各种雄激素非依赖性进展途径的联合治疗。因此,本文就前列腺癌向激素非依赖性进展的相关潜在机制作一综述。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂对前列腺癌激素非依赖型细胞株化疗敏感性的影响

目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂CCI-779对激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞株化疗敏感性的影响。方法:前列腺癌PC-3细胞培养至对数生长期,CCI-779、紫杉醇单独及联合给药,对照组中加入等体积的培养液;MTT法检测3组药物对PC-3的生长抑制作用,流式细胞术(FCM)检测细胞周期的改变和凋亡率。结果:MTT法显示,与对照组相比,各组药物均可显著抑制PC-3细胞增殖,联合用药能显著增强这种抑制效果;FCM检测发现CCI-779和紫杉醇使PC-3细胞主要阻滞在G1-S期,而联合用药使PC-3细胞主要阻滞在G0/G1期;与对照组相比,药物组PC-3细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:mTOR抑制剂CCI-779能抑制PC-3细胞增殖,增加对前列腺癌的化疗敏感性。

雄激素非依赖性前列腺癌发生机制相关的信号传导通路研究进展

几乎所有经过内分泌治疗的前列腺癌(prostate cancer,PCa)患者都会发展为雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-inde-pendent prostate cancer,AIPC),而目前对AIPC尚无有效的治疗手段,因此,探索AIPC可能的发生机制成为基础与临床研究的重点,本文就与AIPC相关的信号传导通路研究进展做一综述。

非依赖雄激素的前列腺癌细胞株中雄激素受体的表达

几乎所有建立的前列腺癌细胞株均为雄激素非依赖性的,包括常用的表达雄激素受体(AR)阳性的LNCaP株和雄激素受体阴性的Du145和PC-3细胞株。作者试图找出这些细胞株不依赖雄激素的机制。作者应用基因分析方法检查LNCaP,CWR22R,PC-3,DU145和CA7T2CL细胞株中的AR启动子功能,并用Southern印记杂交。

雄激素阻断治疗后前列腺癌组织中肿瘤干细胞比例变化

目的研究雄激素阻断治疗(androgen deprivation therapy,ADT)对前列腺癌组织中肿瘤干细胞比例的影响,探讨激素非依赖性前列腺癌形成的机制。方法实验分为ADT治疗组和无ADT治疗组,应用免疫荧光技术比较两组前列腺癌患者术前术后标本中肿瘤干细胞的比例变化。结果无ADT组术前穿刺标本和前列腺根治切除术后标本肿瘤干细胞比例差异无统计学意义[(3.56±1.33)%vs.(3.78±1.39)%,n=9,t=-0.686,P=0.512],在ADT组,接受雄激素阻断治疗3月后,与穿刺标本比较,根治切除标本中前列腺癌肿瘤干细胞比例明显升高[(3.44±1.81)%vs.(9.22±1.71)%,n=9,t=-6.353,P=0.000]。在癌旁组织,也可见ADT后干细胞标志的增加。结论雄激素可能参与前列腺和前列腺癌组织中干细胞的分化;雄激素非依赖性前列腺癌的形成可能与前列腺癌肿瘤干细胞有关。