烟草雄蕊特异表达启动子TA29的克隆及序列分析

采用SDS法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片总DNA,根据GenBank中相关序列设计并合成1对特异引物,通过PCR扩增获得一特异片段,并将其连接到pMD8-T载体上进行克隆测序。结果表明:该片段全长543 bp,与GenBank中报道的序列(AX012339)存在1个碱基的差异,同源性达99.8%;同时,采用生物软件对其进行序列分析,发现该片段含有启动子必备的核心元件:1个TATA-box、8个启动序列元件[PyPyAN(T/A)PyPy]以及1个CAAT-box、1个Cap site、1个I-box等元件,还存在与花粉特异性调控相关的AGAAA和GTGA等2个元件,推测该序列功能与雄蕊特异表达启动子TA29功能相同,从而为后期植物表达载体的构建及转基因奠定了基础。

雄蕊特异表达启动子CA55的克隆及其序列分析

为了调控目的基因仅在雄蕊中表达,本研究采用SDS法提取玉米叶片总DNA,根据雄蕊特异表达启动子的相关序列设计并合成一对引物,通过PCR扩增得到一特异片段,并连接至pMD18-T Vector上进行克隆测序。结果表明该片段全长1 179 bp,与相关序列存在5个碱基的差异,同源性达99.57%,且该片段含有该片段含有2个TATA-box,1个启动序列元件、2个CAAT-box,1个Quantitative-element,8个GTGA-box,1个TACPyAT-box,1个POLLEN1以及3个pollen-box等相关元件,已具备了该启动子所必需的所有调控元件,从而为后期雄蕊特异表达的植物载体构建及遗传转化奠定了基础。