纳米雄黄混悬液对人宫颈癌细胞RCAS1表达的影响

目的：研究RCASl在纳米雄黄混悬液诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的表达，探讨其在细胞凋亡中的作用。方法：HeLa细胞经不同浓度纳米雄黄混悬液作用一定时间后，MTT法检测细胞生长、增殖状态，光镜及透射电镜下观察细胞形态及凋亡情况，ELISA检测RCA81蛋白量的表达，并进行图像分析。结果：纳米雄黄混悬液对HeLa细胞生长增殖有时间剂量依赖性抑制作用；25～50mg·L^-1纳米雄黄混悬液作用48～72h后，HeLa细胞出现凋亡细胞的形态学改变；ELISA检测表明HeLa细胞高表达RCASl蛋白，A值为（1．47±0．05），空白对照A值（0．139±0．015）；25～50mg·L。。纳米雄黄混悬液作用48h后，RCASl蛋白的表达量A值分别降低为（0．423±0．021）和（0．146±0．018）（P〈0．01）。结论：纳米雄黄混悬液可抑制HeLa细胞的生长、增殖和诱导凋亡，并使RCAS1蛋白表达下降。

纳米雄黄混悬液诱导Siha细胞凋亡及对HPV16E6/E7表达的影响

目的：探讨纳米雄黄混悬液对人宫颈癌Siha细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用及其对HPV16E6和E7致瘤基因的影响。方法：采用微射流法制备纳米雄黄混悬液,应用不同质量浓度（6.25,12.5,25,50 mg.L^-1）的纳米雄黄混悬液作用于Siha细胞不同时间（12,24,48,72 h）,光镜和透射电镜观察实验组（不同质量浓度的纳米雄黄混悬液处理组）和对照组（不加药物的细胞）细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成;MTT比色法测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变;RT-PCR方法检测HPV16E6和E7的表达。结果：纳米雄黄混悬液25~50 mg.L-1处理Siha细胞48,72 h后,细胞存活率降低,凋亡增加,作用呈时间-剂量依赖关系。电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成;流式细胞术检测证实细胞凋亡率与纳米雄黄混悬液作用浓度呈明显相关,与对照组相比,差异有极显著意义（P〈0.01）,且细胞呈G0-G1期阻滞。RT-PCR检测显示随着纳米雄黄混悬液作用浓度的增加,HPV16E6和E7的表达不同程度地受到抑制。结论：纳米雄黄混悬液对于Siha细胞具有诱导凋亡、抑制增殖的作用,其机制可能与其抑制HPV16E6和E7致瘤基因的表达有关。

雄黄微生物浸提液稳定性研究

根据中药新药申报的要求,研究了矿物药雄黄微生物浸提液在一定的环境中放置后其色泽、溶解情况、pH值及砷含量的变化,以此表征雄黄微生物浸提液的稳定性。试验结果表明:雄黄微生物浸提液对高温、光照敏感,在高温、光照条件下雄黄微生物浸提液不稳定,应避高温、光照保存;雄黄微生物浸提液在加入抗氧剂和螯合剂后在60℃和在4 500±500 lx环境中放置10 d,色泽、溶解情况、pH值及砷含量是稳定的;试验结果为雄黄浸提液的进一步研究提供了科学依据。

雄黄微生物提取液诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的:观察雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制、并初步探寻雄黄溶解后表现药理活性的化学物种。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、Annexin V-PI双染法染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(FCM)观察K562/ADM细胞凋亡,FCM测定K562/ADM细胞Fas、Bcl-2、Caspase3的活性变化,并以H3AsO3(As2O3在该溶液中的主要存在形式)作为阳性对照。结果:雄黄微生物提取液可抑制K562/ADM细胞增殖;K562/ADM呈典型凋亡形态改变;DNA电泳可见梯状条带出现;FCM分析显示:G1期细胞比例增高,G2-M和S期阻滞;Fas蛋白表达明显上调、Bcl-2蛋白表达显著下调、Caspase-3活性明显增强。结论:雄黄微生物提取液可通过Fas/Bcl-2途径,激活Caspase-3而诱导K562/ADM细胞凋亡。砷酸(V)、甲基砷酸盐(V)可能是雄黄溶解后表现药理活性的主要化学物种。

雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞P-糖蛋白和多药耐药基因表达的影响

目的:研究雄黄微生物提取液(RBS)诱导K562/ADM细胞凋亡的作用,并探讨其对P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药基因(MDRI)表达的影响。方法:采用"微生物浸出"法制备RBS,并以H3AsO3作为阳性对照,AnnexinV-PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞P-gp表达率;逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)检测细胞MDRI mRNA表达水平。结果:RBS可诱导多药耐药白血病细胞发生典型凋亡,抑制P-gp的表达,下调MDRImRNA表达水平。在含砷量相同的条件下,RBS诱导效应明显强于H3AsO3。结论:诱导细胞凋亡、下调P-gp/MDRI蛋白的表达,可能是雄黄逆转白血病耐药的重要分子机制。

芒硝雄黄醋混悬液外敷丹毒临床观察和护理

目的:抗生素结合芒硝雄黄醋混悬液外敷治疗丹毒的效果及护理。方法:收集了2002年10月—2007年10月的下肢丹毒患者40例,随机分为治疗组和对照组,对照组单用青霉素和氨苄青霉素舒巴坦钠,治疗组则在对照组的基础上用芒硝雄黄醋混悬液外敷,并对两组治疗结果进行比较分析,配套相关护理。结果:治疗组与对照组在相同治疗时间内,治疗组的治愈率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抗生素结合芒硝雄黄醋混悬液外敷及相应的护理,疗程明显缩短,且无毒副反应。

纳米雄黄混悬液对卵巢癌SKOV3细胞抑制增殖及诱导凋亡机制探讨

目的分析使用雄黄混悬液对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和诱导凋亡机制的影响。方法体外培养的SKOV3细胞分别与不同浓度的纳米雄黄混悬液孵育24、48、72和96 h,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,采用原位末端标记法(TUNEL)对细胞凋亡形态特征进行观察,分析细胞周期变化,应用Western-blot检测SKOV3细胞Caspase-3蛋白的表达。结果不同浓度纳米雄黄混悬液对SKOV3细胞均有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性及周期特异性生长抑制作用;能明显增强Caspase-3蛋白的表达水平。结论纳米雄黄混悬液可在体外抑制SKOV3细胞增殖并诱导凋亡。其机制可能与诱导细胞发生G1期阻滞并激活Caspase途径有关。

雄黄微生物溶解液药物动力学研究

以砷酸(ATO)为对照,研究雄黄微生物溶解液(RBS)的药物动力学行为,探索雄黄溶解后,其中砷在大鼠体内吸收和分布的变化规律。以砷酸(腹腔注射,含砷量0.3mg·kg?1)为对照组,雄黄微生物溶解液(腹腔注射,含砷量0.3mg·kg?1)为给药组,测定药物中砷在大鼠血液中的浓度及在心、肝、脾、肺、肾和脑等组织中的浓度,并研究药代动力学参数的变化。RBS组药代动力学参数与ATO组接近,其中砷在大鼠各组织中蓄积量大幅度降低,与对照组相比具有显著差异。雄黄经生物溶解后,以无机砷或有机砷的形式存在,与对照组相比,砷的形态成分发生明显变化,药物生物利用度明显提高,砷在组织中几乎没有蓄积。这一结果可能为微生物技术在研究、开发雄黄的应用提供有力依据。

雄黄微生物转化液RTS在新型牛黄解毒片中的减毒增效作用研究

将雄黄微生物转化液RTS替代牛黄解毒片中的雄黄,制成新型牛黄解毒片,并研究新型牛黄解毒片的药效及毒性作用。采用嗜酸性氧化亚铁硫杆菌At. f BY3对雄黄进行生物浸出,制备雄黄微生物转化液RTS并测定砷含量;按照《中国药典》制备由RTS替代雄黄的新型牛黄解毒片进行后续研究;采用灌胃的方法研究新型牛黄解毒片的急性毒性和亚急性毒性,并采用对其解热、抗炎、镇痛药理作用进行对比研究; MTT测定两种复方药物对RAW264. 7细胞的增殖抑制作用和对TNF-α炎性因子的抑制作用。雄黄微生物转化液RTS可对牛黄解毒片中的雄黄进行替换,并使药物达到减毒增效的效果。

中药砷剂治疗BCR-ABL阳性慢性髓系白血病研究进展

BCR-ABL融合蛋白是慢性髓系白血病(CML)的生物标志物,也是目前针对CML进行药物开发设计的重要靶点。中药砷剂砒霜(As2O3)和雄黄(As4S4)在治疗CML方面具有良好的效果,可通过多种途径诱导细胞凋亡或分化,但砒霜的高毒性和雄黄的难溶性对其临床使用带来极大的困难。本文对目前中药砷剂及新型砷剂雄黄微生物转化液治疗CML的研究和作用机制进行综述,为中药砷剂特别是雄黄的二次开发和应用提供参考。