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题名聚乙二醇定点修饰集成干扰素突变体Ⅱ
被引量:5
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作者
牛晓霞
周敏毅
刘金毅
孙超
钟茜
吴晓东
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机构
中国科学院研究生院
北京三元基因工程有限公司
中国药科大学药学院
中国药科大学中药学院
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出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期17-20,共4页
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基金
北京市科技计划重大专项(D0205001040321)资助项目
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文摘
目的:用聚乙二醇(PEG)修饰集成干扰素突变体Ⅱ(IFN-Con-m2,IIFNm2),通过纯化获得新型修饰分子并对该分子进行抗胰蛋白酶水解稳定性及初步药代动力学研究。方法:将mPEG20000定点偶联到IIFNm2的第86位Cys残基上,修饰后的产物经CM层析后,以SDS-PAGE考察其纯度,用WISH-VSV系统进行生物活性测定;在0.1%胰蛋白酶条件下考察体外抗酶解稳定性;并以SD大鼠进行初步药代动力学研究,绘制血药浓度-时间曲线。采用3P87软件进行数据拟合,分析药物动力学参数。结果:干扰素修饰率约为50%,且绝大多数以单修饰体(mono-PEG-IIFNm2)形式存在;提纯后mono-PEG-IIFNm2的纯度大于98%,比活性约为修饰前IIFNm2的1%。抗胰蛋白酶水解试验表明:30min后,IIFNm2抗病毒活性残留为8%,mono-PEG-IIFNm2为41%。初步药代动力学研究显示:IIFNm的消除半衰期为(1.57±0.34)h,mono-PEG-IIFNm2为(18.0±4.0)h。结论:成功地偶联了PEG和IIFNm2,建立了mono-PEG-IIFNm2的纯化工艺,PEG修饰能增加IIFNm2的体外抗胰蛋白酶水解稳定性,并显著延长体内半衰期。
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关键词
集成干扰素突变体
定点聚乙二醇修饰
药代动力学
半衰期
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Keywords
Consensus interferon mutant Site-Specific Pegylated Phannacokinetic Circulating half-life
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分类号
Q503
[生物学—生物化学]
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题名集成干扰素突变体Ⅱ的分子构建、表达及提纯
被引量:4
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作者
牛晓霞
刘金毅
杨轶
吴晓东
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机构
中国科学院研究生院
北京三元基因工程有限公司
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出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第12期1-5,共5页
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基金
北京市科技计划重大专项(D0205001040321)
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文摘
目的:通过定点突变,构建集成干扰素突变体Ⅱ(IFN-Con-m2),以期获得兼具高效作用和可定点聚乙二醇(PEG)修饰的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素突变体Ⅰ(IFN-Con-m1)基因的第86位密码子由TAC突变为TGC。将扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导后,表达的IFN-Con-m2经包涵体变复性、疏水层析、DEAE层析和凝胶过滤层析等纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定。结果:IFN-Con-m2以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,IFN-Con-m2的纯度大于95%,比活性大于5.0×108IU/mg。结论:构建了IFN-Con-m2的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子IFN-Con-m2,建立了IFN-Con-m2的纯化工艺。
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关键词
集成干扰素突变体
定点突变
构建
表达
纯化
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Keywords
Consensus interferon mutant Site-directed mutagenesis Construction Expression Purification
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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