广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1基因的克隆及生物信息学分析

目的对广州管同线虫雌性成虫肌蛋白-1（Ac-fmp1）基因的开放渎码框进行克隆，分析序列结构、功能特征及编码蛋白的理化性质，并构建体外表达载体。方法采用逆转录聚合酶链反应和，TA克隆方法克隆Ac—fmp—l基因的开放读码框全长；运用NCBI网站和ExPaSy等七物信息学在线工具分析Ac—fmp-1基因编码序列及其编码氨基酸的理化性质、结构及功能；采用基因克隆技术定向克隆至原核表达载体pET一30ac（＋），构建Acfmp一1基因重组表达质粒。结果扩增和克隆了广州管网线虫Acfmp1基因开放读码框序列，此序列大小为1251bp，勺GenBank数据库中AcImp-1基因的编码序列同源性为99．6％，编码417个氨基酸。ProtParam预测陔基因编码蛋白在溶液中不稳定、保守性差，未发现跨膜区域。PHD法二级结构预测该蛋白质分子为a螺旋型，于氨基酸残基346～404位点处含有一个锌指结构，SignalP软件预测该蛋白分子无信号肽序列，具有较强的亲水性。该基因编码蛋白的氨基酸序列中，含有16个潜在的B细胞抗原表位。构建的原核表达载体pET—Acfmp1成功定向插入了Acfmp-1基因。结论成功扩增和克隆了广州管圆线虫Ac—fmp-1基因，编码蛋白可能是广州管圆线虫的重要抗原成分，可作为广州管网线虫病的疫苗候选分子和药物靶标。构建了用于体外表达的原核表达载体，为进行Acfmp-1功能研究奠定了基础。