人工诱导泥鳅雌核发育的细胞学研究和诱导参数优化

为培育泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)全雌品种,研究通过细胞荧光染色后进行细胞学观察确定人工诱导泥鳅雌核发育的热休克起始时间,并进一步利用核型和流式细胞分析等方法对人工诱导雌核发育泥鳅进行鉴定。结果显示,二倍体泥鳅受到灭活的鲤(Cyprinus carpio)精子刺激后,第二极体与卵核分开的时间在人工授精后3—5min;卵子在人工授精后3.5min后再热休克2min的诱导孵化率达到10.26%。通过分析野生型泥鳅胚胎、人工诱导雌核发育泥鳅胚胎、泥鳅×鲤杂交胚胎和单倍体泥鳅胚胎的发育,发现部分雌核发育的胚胎可以正常发育,而杂交胚胎和单倍体胚胎会出现明显的发育障碍。核型和流式细胞检测分析表明利用本研究获得的热休克参数进行处理可得到二倍体雌核发育子代,二倍率达64.71%。研究从细胞学层面获得泥鳅雌核发育的诱导参数,可为利用人工诱导雌核发育开展全雌泥鳅育种提供指导。

黄鳝减数分裂雌核发育及子代遗传纯合度分析

为了培育性状优良、遗传稳定的黄鳝(Monopterus albus)群体,研究探索了人工诱导黄鳝减数分裂雌核发育方法。针对养殖性状优良的深黄大斑鳝进行种质纯合,创制出3个深黄大斑鳝雌核发育群体。流式细胞术和染色体计数分析表明雌核发育黄鳝的细胞DNA含量、染色体数目均与野生型相同。性腺组织学切片观察表明雌核发育黄鳝卵巢发育正常。微卫星多样性分析表明雌核发育黄鳝群体的有效等位基因(Ne)、平均香农指数(I)、平均多态信息指数(PIC)、平均观测杂合度(Ho)及平均期望杂合度(He)等参数均极显著低于野生群体,雌核发育群体的遗传纯合度显著提高。雌核发育群体之间的遗传距离增大,遗传相似系数变小。深黄大斑鳝雌核发育群体为培育性状优良的黄鳝养殖品种提供了育种材料。

葫芦科作物离体雌核发育技术研究进展

单倍体或双单倍体对作物改良、遗传育种具有重要意义,对提高单倍体的诱导频率、建立高效稳定的离体雌核诱导体系至关重要。而常规育种周期长、工作量大,且遗传性状存在不稳定性。在葫芦科作物中通常通过未授粉子房、胚珠离体培养的途径产生单倍体或双单倍体植株,从而获得纯合的自交系,使基因快速纯合,极大地缩短育种年限。对葫芦科作物离体雌核发育技术进行了综述,影响离体雌核发育结果的主要因素有供体植株的基因型、培养基及添加的外源激素、黑暗热激与预冷处理方式、播种季节、子房发育时期等。同时也概括了再生植株的倍性与加倍方法,为后续葫芦科作物离体雌核发育的研究提供参考依据。

鳡和翘嘴鲌精子诱导彭泽鲫雌核发育子代的异精效应研究

为探究鳡和翘嘴鲌精子在诱导彭泽鲫雌核发育子代中的异精效应,实验分别以鳡和翘嘴鲌精子激活彭泽鲫卵的胚胎发育获得子二代(F_(2))群体:P×G(彭泽鲫♀×鳡♂)和P×Q(彭泽鲫♀×翘嘴鲌♂),以P×P(彭泽鲫♀×彭泽鲫♂)F_(2)为对照,比较各群体的染色体核型、DNA含量、形态学特征以及生长等。结果显示,P×G、P×Q和P×P的核型分别为3n=150=45m+66sm+27st+12t、3n=150=54m+51sm+39st+6t和3n=150=51m+48sm+45st+6t,与父本鳡的核型(2n=48=10m+24sm+12st+2t)和翘嘴鲌的核型(2n=48=16m+26sm+6st)明显不同;P×G和P×Q的DNA含量与P×P比值在95%的置信区间内(均为0.97);上述结果表明,P×G和P×Q的F_(2)群体均为雌核发育子代。基于形态学参数的主成分分析显示,P×G和P×Q与P×P散点分布区域基本无重叠;P×G和P×Q与P×P间能通过判别函数进行初步判别(准确率达97.8%),即存在显著的形态学差异;这表明P×Q和P×G子代存在异精效应。与P×P相比,P×G和P×Q的F_(2)群体各日龄的平均体重、平均体长、增重率和增长率均表现出优势,且P×G优势显著。综上所述,鳡和翘嘴鲌精子均能诱导彭泽鲫卵的雌核发育,且不同的精子源诱导对雌核发育子代的影响不同,存在典型的“异精效应”。

条石鲷(Oplegnathus fasciatus)雌核发育的人工诱导与鉴定

条石鲷(Oplegnathus fasciatus)是我国重要的经济鱼类,具有复性染色体性别决定型(X_1X_1X_2X_2/X_1X_2Y)。利用紫外线(UV)灭活的同源精子通过冷休克方法诱导了条石鲷的雌核发育,筛选精子紫外灭活剂量并优化冷休克相关参数。结果表明:条石鲷精子最适的灭活剂量为80 mJ/cm2雌核发育的最适条件为授精后2 min在3~4℃水温下处理10 min。条石鲷雌核发育子代经形态学和流式细胞仪鉴定为二倍体,进一步利用微卫星分析表明雌核发育后代的等位基因完全来自于母本没有父本基因参与。对子代的性比和生长进行了比较,结果表明条石鲷雌核发育后代均为雌性,15月龄后雌核发育后代比普通条石鲷具有更快的生长速度。研究结果为条石鲷单性苗种的培育及其性别决定机制的深入研究提供基础。

牙鲆减数分裂与有丝分裂雌核发育的遗传差异

利用同一尾牙鲆亲鱼的同一批卵子诱导减数分裂雌核发育二倍体和有丝分裂雌核发育二倍体,同时用牙鲆精子做人工授精制备普通二倍体,作为对照组。利用10对微卫星引物对普通二倍体和两种雌核发育二倍体进行遗传分析。结果表明,母本基因型在8个位点为杂合,2个位点为纯合。普通二倍体有6种基因型,等位基因均来自父母本的随机结合,类型丰富;母本与子代、子代个体之间的遗传相似系数分别为0.4528和0.5603,接近随机交配群体的遗传相似度。减数分裂雌核发育二倍体有3种基因型,除在1个位点出现异于母本的纯合基因型外,其他所有位点的基因型与母本完全一致;母本与子代、子代个体之间遗传相似系数分别为0.9766和0.9595,接近近交系的遗传相似度。有丝分裂雌核发育二倍体有2种基因型,且全部为纯合型;母本与子代、子代个体之间遗传相似系数分别为0.8062和0.7425,有丝分裂雌核发育二倍体全部为纯合个体。减数分裂雌核发育二倍体具有高度的遗传相似性,适于固定母本性状;有丝分裂雌核发育二倍体纯合度高,适于作为制备克隆的亲本;两者具有明显不同的遗传特性,均可作为特征不同的育种材料。

海洋贝类雌核发育研究进展和展望

The paper summarized the progresses and achievements of the studies on the gynogenesis of the marine mollusks at home and abroad in recent years,and pointed out the study direction on gynogenetic shellfishes and 6-DMAP used as an ideal medicine for raising the induced rate of marine shellfish gynogenesis.

雌核发育银鲫的遗传多样性及其育种意义

雌核发育银鲫的遗传多样性及其育种意义桂建芳朱蓝菲魏雪虹樊连春周莉杨仲安杨书婷梁绍昌魏丽华（中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室，武汉４３００７２）ＧｅｎｅｔｉｃＤｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇＩｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＧ...

普安银鲫异精雌核发育子代稻田养殖试验

普安银鲫〔Carassius auratus（Linnaeus）〕属鲤形目、鲤科、鲃亚科、鲫鱼属,俗称鲫壳鱼,系贵州省普安县青山镇一带独特的高原自然环境条件下形成的一个鲫鱼地方种,1991年经上海市水产研究所鉴定为营天然雌核发育的鱼类。兴国红鲤是江西省兴国县自然环境的长期影响下逐渐形成的一个鲤鱼地方种,

异精激发彭泽鲫雌核发育后代的比较研究

比较不同精子刺激彭泽鲫所产生的子代生长效应：看到异源精子刺激产生的后代生 长快。其中，尖鳍鲤精子刺激产生的后代生长显著地快于白鲫精子刺激产生的后代。证实了 异精雌核发育存在，发育的子代应称为“异育彭泽鲫”，具有潜在的推广前景。

微卫星评价牙鲆雌核发育二倍体纯合性

采用8个微卫星座位分别对牙鲆减数雌核发育二倍体家系和卵裂雌核发育二倍体家系的纯合性进行检验。卵裂雌核发育二倍体在所有检测座位全部纯合。减数雌核发育二倍体在部分座位发生纯合,但未发现在所有座位全部纯合的个体,在Poli9TUF、Poli9-8TUF、Poli11TUF、Poli13TUF、Poli23TUF、Poli30TUF、Poli123TUF和Poli130TUF座位,杂合子比例分别为1·0000、1·0000、0·1944、0·9459、0·8611、1·0000、0·7778和0·8000,平均杂合子比例为0·8224。由此表明,牙鲆除了Poli11TUF外,在其余7个座位均具有很高的重组率。研究结果显示,牙鲆卵裂雌核发育二倍体一代即可形成纯合子;而减数雌核发育二倍体由于具有较高的重组率,使其与母本的遗传同质性较高。

真鲷精子诱导牙鲆减数分裂雌核发育

采用真鲷精子激活牙鲆卵子,经(0±0.5)℃冷休克处理,诱导了牙鲆减数分裂雌核发育。灭活真鲷精子,紫外线照射剂量3.4mJ/cm2时孵化率最低;随着照射剂量的增加,孵化率恢复,照射剂量73mJ/cm2时,孵化率最高,呈现典型的Hertwig效应。用流式细胞仪检测倍性,未经冷休克处理的胚胎全部为单倍体,经冷休克处理的均为二倍体,表明精子灭活有效。冷休克实验结果表明,冷休克起始时间2～5min均有效,以3min为最好;冷休克持续时间30～90min均有效,以45min为最好。综合两项因素,授精3min后,休克时间持续45min组的授精率和孵化率均为最高,与其他处理组差异显著(P<0.05)。RAPD分析结果显示,异源精子的遗传信息未在雌核发育二倍体的电泳图中出现,表明其遗传信息没有传递给子代。

大黄鱼人工诱导雌核发育后代的微卫星标记分析

通过冷休克法和静水压法诱导2组大黄鱼雌核发育,并采用6对微卫星标记引物(LYC0002、LYC0003、LYC0013、LYC0012、LYC0004、LYC0006)对雌核发育家系G1、G2中各24尾鱼苗、双亲及对照组20尾鱼苗进行PCR扩增,进行微卫星标记比较分析。结果表明:冷休克诱导效果明显好于静水压法,获得了35.3%的孵化率和45日龄9.9%的成活率;有4对引物可扩增出清晰的亲本差异条带,其中引物LYC0012、LYC0006扩增结果显示G1子代中均未出现雄鱼基因,全部为雌核发育产物,LYC0013和LYC0004扩增结果显示G2子代中有3尾出现了雄鱼基因,属正常受精个体,两家系后代的基因纯合率分别达87.5%和76.2%,平均为81.9%,而其对照组家系为0,雌核发育使基因的纯合率提高了81.9%。研究表明雌核发育是促进基因纯合的一个有效途径,微卫星标记技术是是鱼类雌核发育鉴定和遗传分析的有效方法。

锦鲤4个人工雌核发育家系的微卫星标记研究

利用Crooijmansetal (1997)分离的包含CA重复单元的普通鲤鱼 (CyprinuscarpioL .)的 8个微卫星DNA标记 ,对从锦鲤 (CyprinuscarpioL .)的红白、大正和昭和 3个不同品系中所获得的 4个不同人工雌核发育家系的 2 0尾个体进行PCR扩增。电泳结果表明 ,8对引物在 2 0尾个体中均能重复稳定地扩增出相应的同源序列。随引物不同 ,各等位基因数为 1～ 11个 ,大小在 6 8～ 2 6 4bp。在MFW 4、MFW7、MFW 19、MFW 2 0、MFW 2 3和MFW 2 4 6个微卫星的扩增结果中 ,2 0尾个体的扩增图谱呈现了高度的遗传多态性 ,不同雌核发育家系内个体的遗传异质性也较大。其中大正 (TaS)和红白 1(RW1)的个体不仅花色分化显著 ,而且个体间的平均遗传距离分别高达 0 2 8。通过对微卫星等位基因和基因型分析发现 ,由于锦鲤品系中的每一个体是通过不断地杂交选育而获得 ,基因组来源复杂 ,基因高度杂合。因此 ,只进行 1代的人工雌核发育 ,其家系内仅部分个体的部分座位出现纯合。所获得的人工雌核发育锦鲤为后续的色素遗传调控机制研究提供了必要的实验材料 ;同时 ,所鉴定的微卫星分子标记为进行锦鲤的分子标记育种和基因组作图提供了理想的工具。

牙鲆单倍体、三倍体、雌核发育二倍体和普通二倍体胚胎发育的比较

在水温为（16．0±0．5）℃、pH为8．0～8．3、盐度为30．2的条件下，对牙鲆Paralichthys olivaceus单倍体、三倍体和雌核发育二倍体胚胎发育的过程与普通二倍体牙鲆的发育进行了比较。结果表明：单倍体胚胎脊柱弯曲，器官分化不全，受精率低，畸形率高，出膜率低；三倍体和雌核发育二倍体胚胎与普通二倍体牙鲆的发育时序基本相同，受精卵经过卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、卵黄栓胚、克氏囊胚、尾芽胚、心跳胚、出膜期等阶段孵化出膜，各阶段除发育时间不同外，发育特征与发育分期没有明显差别；普通二倍体胚胎约61h孵化出膜，而三倍体和雌核发育二倍体分别经66 h 30 min和67 h 50 min孵化出膜，孵化时间比普通二倍体牙鲆长约10％。其中，卵裂期三倍体和雌核发育二倍体在细胞分裂阶段发育特别缓慢，发育时间比普通二倍体长约25％。单倍体出膜率为（16．5±2．2）％，畸形率为（97．2±1．6）％；雌核发育二倍体出膜率为（85．6±3．0）％，畸形率为（13．2±2．3）％；三倍体出膜率为（82．3±3．1）％，畸形率为（16．3±2．5）％。与普通二倍体牙鲆相比，三倍体和雌核发育二倍体胚胎出膜率低，仔鱼畸形率高。

人工诱导雌核发育牙鲆的染色体及核型证明

于1994-1996年，分别在威海海洋渔业捕捞公司（石岛）和鸿洋实业总公司龙须岛育苗场采集人工培育的3－5龄牙鲆亲鱼，采用紫外线照射法使牙鲆精子遗传物质失活，并用冷休克法抑制受精卵第二极体释放，从而获得雌核发育二倍体牙好。原肠期采用空气干燥法、Giemsa染色，得到雌核发育二倍体、正常二倍体及单倍体的染色体制片，进行染色体和核型的分析。结果表明，牙鲆的雌核发育二倍体和正常二倍体的染色体数均为2n=48，核型为48t，即48条端部着色点染色体，臂数NF=48，两者的核型设有明显差异；单倍体为24条端部着丝点染色体；在3个组别中，第一号染色体上都有一明显的次缢痕。雌核发育二倍体牙鲆的诱导率为98％。

团头鲂良种雌核发育群体的建立及其遗传变异

为了巩固经 15年选育而成的团头鲂良种—浦江一号的成果 ,并建立纯系以供进一步研究和开发 ,1999年和 2 0 0 0年 ,先后对团头鲂选育系三龄鱼 (F5)和二龄鱼 (F6)进行了雌核发育 (抑制第二次成熟分裂 )研究。利用UV照射遗传失活的鲤鱼精子诱导 ,采用冷休克方法 ,抑制团头鲂第二极体排出 ;探索了适合团头鲂二龄及三龄鱼卵的休克温度、起始时间和持续时间 ,结果发现 :二龄鱼和三龄鱼诱导起始时间均在受精后 3min效果最好 ,而在休克温度和持续时间上稍有差异 ,其中三龄鱼在 0～ 2℃冷休克处理 30min、二龄鱼在 4～ 6℃冷休克处理 2 0min效果较佳。 2年期间 ,建立了源于选育系 3尾雌亲鱼的 3个雌核发育群体 ,共获得正常的雌核发育鱼后代 10 0 0余尾。RAPD分析发现 ,选育系群体具有引物S8扩增的 110 0bp条带 ,而雌核发育群体具有引物S18扩增的 86 0bp条带 ;雌核发育群体内遗传相似度显著高于选育系群体 ,其遗传距离仅为选育系群体内遗传距离的 5 4%。

微卫星标记对牙鲆有丝分裂雌核发育家系的亲子鉴定

利用18个微卫星标记,对6个家系的26尾有丝分裂雌核发育牙鲆进行亲子鉴定,PCR扩增产物经8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果表明:1个座位在母本中表现为相同的基因型,视为单态座位,其他17个座位为多态;多态座位在亲子鉴定中的累计排除概率和累计个体识别概率分别为0.9985、0.9999;根据被测个体在17个微卫星座位的基因型,最后确认26尾子代的母本,其中7尾子代在某些座位表现出与其母本不完全匹配的基因型。利用微卫星标记可确定雌核发育后代的亲子关系,从而构建牙鲆雌核发育家系系谱,对牙鲆雌核发育的深入研究具有重要意义。