雌激素及雌激素受体α减轻谷氨酸对神经细胞的损伤

目的:建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型,观察雌激素及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的作用。方法:原代培养小鼠大脑皮层神经细胞,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫组化染色鉴定神经元的纯度。建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型。用前期实验中已构建成功的ERα重组慢病毒(V-ERα-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞。实时荧光定量PCR和Western blotting检测ERαmRNA和蛋白表达水平。实验分为3组:(1)对照组:用空慢病毒(V-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞;(2)雌激素组:用雌激素干预经谷氨酸诱导的神经细胞;(3)慢病毒组:用V-ERα-RFP-flag感染经谷氨酸诱导的神经细胞。流式细胞术检测各组神经细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及免疫荧光染色检测各组神经细胞中N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸转运体蛋白1(vesicular glutamate transporter protein 1,VGLUT1)的变化。结果:成功原代培养神经细胞,经NSE免疫组化方法鉴定神经元纯度大于90%。成功建立经谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型。MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神经细胞72 h后,在荧光显微镜观察下可见到红色荧光表达,与对照病毒相比,能增加神经细胞中ERαmRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。与对照组相比,雌激素组和慢病毒组细胞凋亡率降低(P<0.05),且实时荧光定量PCR结果显示,雌激素组和慢病毒组的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表达降低(P<0.05),免疫荧光实验结果提示NMDAR1和VGLUT1阳性的细胞数减少(P<0.01)。结论:雌激素和ERα能减轻谷氨酸对神经细胞的损伤效应,该保护作用可能通过抑制NMDAR1和VGLUT1的表达来实现。

ESR1基因多态性与绝经期女性抑郁症状数量性状关联分析

目的本研究旨在探索ESR1基因多态性与汉族绝经期女性严重抑郁症状的发生是否存在关联。方法从前来上海三所医院妇科门诊就诊的45~55岁围绝经期及绝经后期妇女中纳入432人。对其雌激素α受体基因上的PvuII(rs2234693)和Xba I(rs9340799)多态位点进行基因型检测。同时使用Beck抑郁量表对其抑郁症状进行评估。同时收集研究对象的一般社会人口学及相关妇产科个人史资料。使用Kupperman绝经指数量表及焦虑自评量表对其绝经期症状及焦虑症状进行评估。结果XbaI位点多态性与抑郁症状数量性状存在关联,携带XX基因型的女性较Xx及xx基因型者存在更严重抑郁症状(Add value=1.85,95%CI=0.21~3.48)。而PvuII位点多态性与抑郁症状数量性状无关联。结论 ESR1基因多态性与汉族围绝经期及绝经后期女性严重抑郁症状的发生可能存在关联。