新型雌激素受体ERα36在张氏肝细胞和人肝癌细胞中的表达比较分析

研究新型雌激素受体ERα36在人肝细胞和肝癌细胞系中的差异表达具有重要的意义.以张氏肝(Chang Liv-er)、Caveolin-1基因沉默细胞株CAV7、人肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2为实验材料,通过免疫印迹杂交法观察了不同细胞内ERα36蛋白的表达情况,并与典型雌激素受体亚型ERα66蛋白的表达进行了比较.结果发现:(1)几种细胞中均有ERα36蛋白的表达;(2)与张氏肝细胞相比,Caveolin-1基因沉默时ERα36表达明显增加(P<0.01);(3)ERα36在SMMC-7721中表达水平较低,而在HepG2细胞中表达水平较高,与ERα66和Caveolin-1的表达水平相关.提示新型雌激素受体ERα36可能参与Caveolin-1介导的雌激素信号转导,而在肝细胞的恶性增殖过程中发挥一定的作用.

新型雌激素受体ERα36与窖蛋白-1在皮肤组织细胞中的表达和分布特征

采用蛋白免疫印迹杂交和免疫细胞荧光等方法首次研究了新型雌激素受体ERα36和窖蛋白-1(Caveolin-1)在大鼠皮肤组织中以及角质细胞系中的表达,探讨了二者的表达关系和分布特征.结果发现:(1)大鼠皮肤中有ERα36的表达,其表达的量与Caveolin-1的表达量呈负相关,且存在性别差异和部位差异;(2)表皮角质细胞中有ERα36的表达,主要分布在细胞膜上,且与Caveolin-1共定位.提示新型雌激素受体ERα36存在于皮肤细胞中,且可能参与Caveolin-1介导的雌激素信号转导,在雌激素治疗皮肤疾病过程中发挥一定作用.

雌激素受体ERα与PI3K/Akt细胞信号通路

雌激素直接与核内雌激素受体ERα或ERβ结合,活化靶基因的转录,这是经典的雌激素受体信号转导途径。近年来大量实验证实,雌激素受体ERα能够通过雌激素依赖或不依赖的方式激活,并与细胞质内的磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)细胞信号传导通路相互作用,发挥重要的生物学效应,如参与人类雌激素相关肿瘤的发病、调节靶细胞的增殖和分化。此外,实验研究还提示,ERα和PI3K/Akt信号通路在哺乳动物植入前胚的发育过程中也起着重要调节作用。

电针命门穴对去势骨质疏松模型大鼠肾上腺雌激素受体ERαmRNA表达的影响

目的研究电针命门穴对去卵巢骨质疏松模型(OVX)大鼠肾上腺功能的影响。方法造模成功的雌性SD大鼠18只,随机分为假手术组、模型组、电针组,每组6只。大鼠处死后,用放免法测各组大鼠血清中雌二醇(estradiol,E2)水平,荧光定量PCR(探针法)检测各组大鼠肾上腺ERαmRNA表达。结果模型组与假手术组比较,血清E2水平明显下降,有显著性差异(P<0.05),电针组血清E2水平有一定升高,与模型组比较,无统计学意义(P>0.05);模型组肾上腺ERαmRNA表达强于假手术组,有统计学意义(P<0.05),电针组肾上腺ERαmRNA表达降低,与模型组相比,有显著性差异(P<0.05)。结论去卵巢后,大鼠肾上腺可起代偿作用,电针能提高去卵巢骨质疏松大鼠血清雌激素水平,并影响大鼠ERα在肾上腺的表达。

ERα在雌激素调控颏舌肌功能中的作用研究

目的:探索ERα在雌激素调控SD大鼠颏舌肌功能中的作用。方法:将30只8周龄雌性SD大鼠(250±25)g,随机分为假手术组(SHAM组),去卵巢+雌二醇组(OVX+E2组),去卵巢+雌二醇+ERα拮抗剂MPP组(OVX+E2+MPP组)(n=10)。通过卵巢切除与雌激素回补,在外周血建立稳定的雌激素水平大鼠模型;使用玻璃微电极检测SD大鼠舌下神经核团放电频率,BL-420E+生物机能实验系统检测颏舌肌肌电频率及幅值。结果:(1)舌下神经核放电频率:OVX+E2+MPP组明显弱于OVX+E2组(P<0.05)。(2)颏舌肌电频率及幅值:OVX+E2+MPP组明显弱于OVX+E2组(P<0.05)。结论:雌激素可能通过与ERα受体结合,影响舌下神经核放电,进而改变颏舌肌肌电功能。

米非司酮下调不全流产患者蜕膜雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)表达

目的了解不同剂量米非司酮对人工流产术后不全流产残留物中绒毛膜促性腺激素-β(β-human chorionic gonadotrophin,β-hCG)及雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)表达的影响。方法 60例2009年1至9月自愿在复旦大学附属妇产科医院计划生育门诊就诊的早孕人工流产术后不全流产妇女,随机分为4组:A、B、C组术前分别服用米非司酮1 400 mg(100mg,bid×7d)、700 mg(50mg,bid×7d)、350 mg(25 mg,bid×7d),D组为对照组,每组各1 5例。除D组直接行清宫术,其他组于停药后行清宫术。应用免疫组织化学EnVision法染色,半定量测定残留物中β-hCG及ER、PR水平。结果 4组β-hCG在绒毛滋养叶细胞胞质的表达差异无统计学意义(P>0.05)。ER、PR在蜕膜上皮细胞和间质细胞核中的表达,实验组较对照组表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。经两两秩和检验(修正α=0.05):ER在蜕膜上皮细胞核中的表达为A组较C、D组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);ER在蜕膜间质细胞核中的表达为A组较其他组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);A、B、C组较D组表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。PR在蜕膜上皮细胞核中,A、B、C组较D组表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。PR在蜕膜间质细胞核中的表达A组较其他组表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);B组较C、D组表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同剂量的米非司酮对人工流产术后不全流产残留物中β-hCG的表达影响不明显。对蜕膜细胞中的ER、PR表达有抑制作用,此抑制作用可能是米非司酮治疗不全流产的作用机制之一。1 400 mg米非司酮治疗效果最显著。

分析雌激素受体(ER)与IP3R在子宫肌瘤细胞中的表达价值

目的分析雌激素受体(ER)与IP3R在子宫肌瘤细胞中的表达价值。方法选择2012年12月至2013年5月于我院治疗的40例子宫肌瘤患者为实验组,并以同期于我院治疗的40例非子宫肌瘤患者作对照组进行观察。比较两组患者治疗前后的雌激素受体(ER)和IP3R水平。结果治疗前对照组患者体内雌激素受体(ER)、IP3R水平明显优于实验组组(P<0.05);手术治疗后实验组患者雌激素受体(ER)、IP3R水平有所好转,但仍比对照组差(P<0.05)。结论子宫肌瘤细胞中雌激素受体(ER)与IP3R在子宫肌瘤的临床中具有特异型,值得临床进一步研究。

雌激素受体ERα36基因沉默对PC12细胞生长相关蛋白表达的影响

目的 通过检测新型雌激素受体（ERα36）基因沉默后PC12高分化细胞中生长相关蛋白的表达,探讨ERα36对PC12细胞生长增殖的影响.方法 利用ERα36-shRNA质粒转染细胞建立ERα36基因沉默细胞模型（PC12-36L1,PC12-36L2）,免疫细胞荧光法检测ERα36的表达,Western blot检测PC12细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）等生长相关蛋白的表达变化.结果 ①三个细胞株PC12-36C1（转染空质粒）、PC 12-36L1和PC12-36L2中均有ERα36表达;与PC12-36C1、PC12-36L2细胞相比（OD值分别为：0.95±0.05,0.78±0.10）,PC12-36L1细胞内ERα36表达显著降低（OD值：0.47±0.12,P＜0.01）.②与PC12和PC12-36C1细胞相比,PC12-36L1细胞中PCNA、CyclinD1和p-MAPK的表达都显著升高（P＜0.01）[PCNA、CyclinD1和p-MAPK的OD值：PC12细胞分别为（1.00±0.05,1.00± 0.11,1.00±0.05）,PC12-36C1细胞分别为（1.09±0.15,0.92±0.23,1.12±0.08）,PC12-36L1细胞分别为（1.74±0.12,2.20±0.25,1.77±0.06）].结论 ERα36基因沉默可促进PC12细胞的生长增殖.结果提示ERα36低表达可能与脑瘤等神经系统疾病有关.

大豆苷原(DA)对成骨细胞雌激素受体(ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调节作用及其受雌激素的影响(英文)

目的研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2%FBS)培养,分别用0.1和10μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10μmol/L的DA分别下调ERα蛋白水平44%和38%(P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31%(P<0.05),上调PPARγ74%和78%(P<0.05)。ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβmRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。

补肾中药对雄性大鼠神经系统雌激素受体β的影响

目的通过检测服用补肾阳中药和补肾阴中药后的雄性大鼠杏仁核和皮质顶叶雌激素受体(ERβ)mRNA及蛋白,从分子水平探讨补肾中药对雄性大鼠神经系统雌激素受体的影响。方法SD雄性大鼠,分为A、B、C3组,A、B分别给予补肾阳中药淫羊藿和补肾阴中药女贞子持续灌胃14d,C组作为空白对照,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测雌激素受体ERβmRNA表达量,免疫组化染色检测ERβ蛋白的分布及表达。结果A、B组杏仁核、皮质顶叶雌激素受体ERβmRNA表达量均显著高于C组(P<0.01,0.05),A组ERβmRNA表达量增高显著高于B组(P<0.01);A组和B组ERβ蛋白免疫组化阳性细胞均显著高于C组(P<0.01,0.05),A组皮质顶叶ERβ蛋白阳性细胞高于B组(P<0.01)。结论补肾中药对ERβ基因及蛋白具有调节作用。

雌激素受体Arg548/Cys548基因突变导致受体的高敏感性

目的:研究雌激素受体新突变Arg548/Cys548对受体介导的下游基因表达调控的影响,并探讨其机理和在女孩性早熟中的作用。方法:利用已构建的雌激素受体反应元件报道质粒pGL3-promoter-ERE,分别与野生型ESR1表达质粒PSG5-wtER和定点突变受体表达质粒PSG5-mutER共转染CMF-7和MDA-MB-231细胞,转染后加入雌激素、类似物和拮抗物处理,检测转染细胞的荧光素酶活性值。结果:转染突变型受体的CMF-7和MDA-MB-231细胞的荧光素酶活性值明显升高,在生理浓度雌激素及类似物植物类雌激素异黄酮刺激下,Cys548突变型受体基因转染比野生型受体转染的CMF-7和MDA 231细胞均表现出显著强烈的增加萤火虫荧光素酶的活性,表现高敏感的特性;单独加入TAM后荧光素酶活性值没有变化,而同时加入E2和TAM后荧光素酶活性值比加入E2的荧光素酶活性值则明显下降。结论:Cys548突变受体在体外具有较高的敏感性,对药物雌二醇及类似物反应敏感,拮抗剂TAM对受体的活性没有抑制作用,却能竞争性降低雌激素及类似物的作用。

乳消胶囊及其加减方对乳腺增生模型大鼠雌激素及雌激素受体mRNA表达的影响

目的:研究乳消胶囊及其加减方对乳腺增生模型大鼠雌激素(E2)及雌激素受体(ER)mRNA表达水平的调节作用。方法:采用雌、孕激素联合造模制成大鼠乳腺增生模型,以乳康片作对照,检测各组动物E2及ER mRNA表达。结果:模型1组、模型2组E2及ER mRNA表达高于空白对照组(P<0.01)。乳消胶囊组、乳消A组与模型1组、模型2组、乳消B组、乳消C组、治疗对照组比较E2降低(P<0.05,或P<0.01)。乳消B组、乳消C组、治疗对照组与模型1组比较E2降低(P<0.05);与空白对照组比较E2升高(P<0.05)。各治疗组及治疗对照组与模型1组、模型2组,各中药治疗组与治疗对照组比较,ER mRNA表达均显著降低(P<0.01)。结论:乳消胶囊及乳消A方能有效降低模型动物的E2及ER mRNA表达,使乳腺组织对E2的敏感性降低而达到治疗作用。

绝经后雌激素变化对乳腺癌组织中雌激素及其受体表达的影响

目的探讨绝经前后乳腺癌组织中雌激素及其受体(ER)的表达情况及二者相关性。方法随机选取绝经前后乳腺癌患者各37例,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清、癌组织及癌旁正常乳腺组织中雌二醇(E2)含量;采用免疫组化(SABC)法检测癌组织中ER表达。结果绝经后组外周血清中E2含量显著低于绝经前组(P<0.001),癌组织E2的表达水平与绝经前后无关(P>0.05),两组癌组织中E2的表达水平均显著高于癌旁正常乳腺组织(P<0.001);SABC法结果可见,绝经前、后组分别有18例(48.6%)、20例(54.1%)癌组织中ER表达阳性,无显著差异(P>0.05);ER表达水平均与E2含量呈正相关(P<0.05)。结论乳腺癌组织中雌激素含量变化不受外周血清中雌激素变化影响而保持较高含量水平,而外周血清中E2的含量变化与绝经前期和后期变化相关;ER阳性表达与绝经前期和后期变化无相关性。

雌激素受体β表达对于乳腺癌细胞生长特性及内分泌治疗的影响

目的通过脂质体转染技术,将ERβ转染给ERα+的MCF-7细胞和ERα-的MDA-MB-231细胞,研究在ERα+和ERα-的不同条件下ERβ的功能。方法利用脂质体转染试剂Lipofectmine LTX将质粒pReveicer-M72-ERβ对MCF-7细胞和MDA-MB-231进行转染,并将细胞分为MCF-7组(ERα+ERβ-)、MCF-7ERβ组(ERα+ERβ+)、MCF-7空组(ERα+ERβ-)、MDA-MB-231组(ERα-ERβ-)、MDA-MB-231 ERβ组(ERα-ERβ+)、MDA-MB-231空组(ERα-ERβ-),对各组细胞进行雌二醇、他莫昔芬处理,并同时设置未处理组作为对照。用MTT法绘制各组细胞在不同处理因子作用下的生长曲线。结果①与MDA-MB-231组和MDA-MB-231空组相比,MDA-MB-231 ERβ组细胞生长速度加快(P<0.05),三组细胞对于雌二醇、他莫昔芬的反应差异无显著性;②与MCF-7组和MCF-7空组对比,MCF-7ERβ组细胞生长速度减慢(P<0.05);在雌二醇的作用下,MCF-7ERβ组细胞的生长速度比其他两组细胞减慢(P<0.05),三组细胞对于他莫昔芬的反应差异无显著性。结论①在ERα表达的条件下,ERβ的表达能够抑制细胞的生长,并且能够使细胞对于雌激素的敏感性下降;②在无ERα表达的条件下,ERβ的表达能够促进细胞的生长。

植物雌激素木黄酮对HSC-T6细胞增殖及雌激素受体表达的影响

目的研究植物雌激素木黄酮对体外培养的肝星状细胞(HSC-T6)的增殖、活化、胶原合成以及对雌激素受体(ER)表达的影响,探讨木黄酮抑制肝纤维化的作用机制。方法选择细胞系HSC-T6为体外细胞模型,随机分为4组,分别加入不同浓度的木黄酮(0.5、5、50μmol/L),同时设未加任何药物的空白对照组。作用24 h后采用MTT法检测HSC-T6细胞的增殖情况,放射免疫法测定细胞上清液Ⅲ型胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)的含量;免疫组化法观察木黄酮对各组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)及ER表达的影响。结果木黄酮各剂量组均不同程度地抑制HSC-T6细胞的增殖,降低其-αSMA的表达,减少PCⅢ及HA的分泌,且其抑制作用呈剂量依赖性;给予木黄酮后,HSC-T6细胞的ER表达增强,也呈剂量-效应关系。结论木黄酮可抑制体外培养的HSC-T6细胞的活化与增殖,减少细胞外基质的产生,抑制肝纤维化的形成。其作用机制可能与木黄酮增加HSC的ER表达有关。

雌激素受体α基因多态性与女孩性早熟关系的研究

目的探讨雌激素受体-α(ERα)基因多态性与江西地区女孩性早熟的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,检测90例江西地区性早熟女孩和70例江西地区健康体检女孩ERα基因内含子1 Pvu Ⅱ T/C和XbaI A/G酶切位点基因多态性,并观察基因型对血清E2的影响。结果病例组ERα基因XbaⅠ基因型和等位基因频率分布与对照组相比差异有显著性(P<0.05),其中等位基因X使女孩性早熟发病风险提高了2.26倍(95%CI:1.35-3.78);纯合子基因型(XX)、杂合子基因型(Xx)与野生型基因型(xx)相比,患性早熟的危险度分别为1.32倍(95%CI:0.46-3.81)和2.51倍(95%CI:1.27-4.97)。E2增高组ERα基因XbaⅠ基因型分布与E2正常组相比差异有显著性(P<0.05);Pvu Ⅱ基因型和等位基因频率分布在病例组与对照组、E2增高组与E2正常组相比差异均无显著性。结论 ERα基因XbaⅠ位点多态性与女孩性早熟有关,突变基因增加了女孩性早熟的发病风险,Xx基因型最易患病。

雌激素受体基因多态性与男性骨密度关系

目的研究雌激素受体(ER)α基因多态性与中国男性骨密度关系。方法采用双能X线吸收仪对339名男性研究对象进行腰椎及股骨扫描,应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测ER-α基因PvuⅡ和XbaⅠ两多态位点基因型,用广义线性模型分析两位点多态性与腰椎及股骨骨密度关系。结果在调整环境危险因素后,显示ER基因的XX基因型与股骨柄、股骨三角区的骨密度增高呈显著相关,差异有统计学意义(P值分别为0.004和0.036);Pp基因型与股骨柄骨密度增高有相关趋势,但差异无统计学意义(P=0.064);XP单倍型与股骨柄骨密度增高有相关的趋势,但差异无统计学意义(P=0.053)。结论ER-α基因XbaⅠ位点多态性与男性股骨骨密度相关。PvuⅡ位点多态性和XP单倍型与股骨骨密度关系还需进一步扩大样本量研究。

原因不明月经过少雌激素受体α基因多态性及其表达的研究

目的:探讨原因不明月经过少雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)基因多态性及其与表达的关系。方法:选择100名原因不明月经过少患者为实验组,100名月经正常人群为对照组。应用分子生物学的方法分析ERa基因PvuⅡ,XbaⅠ限制性片段长度多态性。通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法分析ERα表达。结果:P基因型频率实验组为47.5%,对照组为30.5%,OR=2.062。X基因型频率实验组为20.5%,对照组为30.5%,OR=0.588。PvuⅡ和XbaⅠ限制性片段长度多态性在两组中均呈多态性分布。实验组ERα的mRNA和蛋白质表达均比对照组低(P<0.05)。结论:ERα基因多态性与原因不明月经过少有关,P等位基因可能是其危险因素,X等位基因可能是其保护因素。ERα在子宫内膜中原因不明月经过少中的表达低于月经量正常子宫内膜,且可能与月经量多少有关。

二恶英对雌激素受体的干扰作用

核受体相关的肿瘤,如乳腺癌和前列腺癌的发生、发展主要依赖于性激素的分泌。环境内分泌干扰物如二恶英,可作为雌激素受体的诱导配体,直接或间接地与转录因子相互作用,从而干扰基因的转录。此外,二恶英还能使雌激素受体发生泛素化修饰,促进它的降解,并使雌激素依赖性的基因转录受到抑制,成为内分泌干扰因子。本文综述了二恶英的类雌激素效应、致癌性以及激素信号干扰的最新研究进展。

垂体腺瘤中激素受体ER、PR和生长因子VEGF、bFGF表达与肿瘤分型、侵袭性关系的研究

目的分析激素受体ER,PR及生长因子VEGF,bFGF在垂体腺瘤中的表达,探讨ER,PR,VEGF,bFGF与垂体腺瘤分型及侵袭性之间的关系。方法取经手术切除且病理诊断为垂体腺瘤、具有完整内分泌资料的患者80例,根据Hardy-Wilson及Knosp分级、分期标准,结合病理活检判断其肿瘤侵袭性,将肿瘤的侵袭程度分为0、1、2、3级,分别为10例、11例、30例和29例。用免疫组化方法分别检测每例肿瘤ER,PR,VEGF和bFGF的表达水平,用RT-PCR检测VEGF和bFGF mRNA的表达。结果 80例患者中ER,PR表达的阳性率分别为62.5%(50/80)和60%(48/80);PRL腺瘤与无功能腺瘤之间ER蛋白表达阳性率的呈显著性差异(P<0.05),PR表达水平与垂体腺瘤分型相关性不显著(P>0.05)。随肿瘤侵袭性程度的增加,VEGF和bFGFmR NA的表达和免疫组化阳性率及分级相应增加。结论 ER的表达水平与PR L型垂体腺瘤有关,其表达水平有可能作为判断PR L型垂体腺瘤发生和预后的指标。生长因子VEGF和bFGF mR NA、蛋白的表达也与垂体腺瘤侵袭性密切相关,有可能作为抑制垂体腺瘤侵袭性的治疗靶标。