非基因型雌激素膜性受体GPR30在生后雌性大鼠海马内的发育学表达与亚细胞水平定位研究

为了研究非基因型雌激素膜性受体GPR30对海马的结构和功能的调节作用,应用硫酸镍铵增强显色的免疫组化技术以及酶标免疫电镜技术,观察了生后雌性大鼠海马内GPR30表达的变化及其免疫阳性产物在神经元亚细胞水平的定位情况.结果显示,GPR30免疫阳性产物主要位于海马CA区的锥体层神经元与齿状回颗粒层的神经元内,其表达水平随发育呈增加趋势.P0时在雌性大鼠海马未发现明显GPR30免疫阳性反应,P7后免疫阳性物质开始在CA2出现,P14时见于CA1、CA2和齿状回,P30和P60主要见于CA1、CA2、CA3和齿状回.在光镜下,GPR30免疫阳性产物位于细胞核外的胞浆中,细胞核未见免疫阳性反应.在透射电镜下可见其位于神经元的胞浆内,可能主要是粗面内质网,也可见于线粒体和细胞膜.以上结果证实,GPR30是一种位于细胞核外的、非基因型作用的雌激素受体,可能参与了雌激素对海马锥体神经元突触可塑性和学习记忆等功能的调节,还可能参与了对齿状回成年神经干细胞某些活动的调节.

雌激素膜受体GPR30在子宫内膜癌的表达及意义

目的:探讨雌激素膜受体GPR30在子宫内膜癌的表达及意义。方法:RT-PCR和免疫组织化学法检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中GPR30mRNA和蛋白的表达,分析GPR30表达与临床病理的联系;免疫细胞化学分析GPR30蛋白在子宫内膜癌细胞系RL95-2(ER+)和KLE(ER-)的表达。结果:子宫内膜癌组织GPR30mRNA的表达水平显著高于正常子宫内膜组织(P<0.05);子宫内膜癌组织GPR30蛋白表达阳性率(21/30,70%)显著高于正常子宫内膜组织(5/17,29.41%)(χ2=7.232,P=0.007);肿瘤组织学分级越高,GPR30表达阳性率越高(P=0.003),GPR30表达与内膜癌分期、肌层浸润深度和腹水转移无关(P>0.05);ERα阳性的子宫内膜癌细胞系RL95-2和ERα阴性的细胞系KLE均表达GPR30。结论:雌激素膜受体GPR30于子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞系均有表达,与肿瘤组织学高分级相关,提示GPR30可能在子宫内膜癌中发挥重要的作用。

雌激素膜受体非基因组效应的研究进展

雌激素受体分布于哺乳动物的许多组织中,介导了大部分已知的雌激素效应。细胞膜存在雌激素受体的非基因组效应。膜受体非基因组效应参与骨骼、神经和血管及凋亡等调节作用。笔者就雌激素膜受体介导的非基因组效应进行综述。

雌激素膜受体GPR30的研究进展

雌激素膜受体GPR30作为一个独立的雌激素受体,介导了雌激素众多的生理功能,该文就GPR30的结构、定位、信号通路和生物学效应作一综述。

雌激素膜性受体GPR30/GPER的研究现状

雌激素对女性生理变化或病理改变都起到重大的作用。传统理论认为,雌激素通过经典受体ERα/β调控转录反应或介导细胞信号转导。G蛋白耦联受体30(GPR30),又称G蛋白耦联雌激素受体(GPER),是一种新型的雌激素受体,能与雌激素或其衍生物、拮抗剂特异性结合并发挥生物学效应。近期发现在恶性肿瘤,如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌中有GPR30过表达。研究GPR30与恶性肿瘤发生发展的关系,以期在雌激素相关疾病尤其是肿瘤中寻找新的治疗靶点。

雌激素膜受体-α信号通路与乳腺癌的相关性

雌激素受体α和β是一类转录因子，产生多种生理功能，雌激素受体α和β调控靶基因转录是配体依赖性的，然而，近来研究表明雌激素受体仅还存在另外一条信号途径，也称作非基因组或膜启动途径，能够快速地被雌激素激活，这种雌激素受体α位于细胞膜，因此也称作膜雌激素受体α，已经报道膜雌激素受体α与多种肿瘤的发生相关，本文阐述了近年来雌激素受体α的研究成果以及与乳腺癌的相关性。

雌激素膜受体ER-α36及其在人脑胶质瘤中的作用

脑胶质瘤是最为常见的颅内恶性肿瘤,表现为浸润性生长,对放化疗的敏感性低,复发率高,发病具有男女差异,但是雌激素受体的表达并没有明显的性别差异等特点,目前尚缺乏有效的应对策略。2005年首次发现并克隆的新型雌激素受体ER-α36,在多种男女高发恶性肿瘤细胞中高表达,并通过激活MAPK、PI3K/AKT非基因组雌激素信号通路刺激细胞恶性增殖,并能同时介导雌激素和抗雌激素的促生长作用。本文综述ER-α36与脑胶质瘤患者发生发展的相关性,也为临床以ER-α36为靶点治疗恶性胶质瘤提供新思路和科学依据。

雌激素膜受体GPR30在雌激素相关性肿瘤中的研究进展

雌激素在人体内需要通过与受体结合才能发挥作用,其中与雌激素核受体结合后发挥的基因组效应是雌激素发挥作用的主要方式。此外,雌激素还可通过与雌激素膜受体结合后发挥非基因组效应而发挥作用。G蛋白偶联雌激素受体(GPER/GPR30)作为一种雌激素膜受体,其化学结构、细胞定位、作用方式等与传统的雌激素受体α、β均有显著区别。GPR30广泛参与雌激素介导的多种病理生理反应,并且作为雌激素膜受体参与了雌激素相关性肿瘤的发生、发展。

小鼠肠道Cajal间质细胞膜雌激素受体的检测和分析

目的:检测并分析体外培养的小鼠肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of cajal,ICC)膜雌激素受体(Membrane estrogen receptor,mER)。方法:利用原代培养小鼠ICC,采用免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜技术分析ICC细胞膜雌激素结合位点;采用密度梯度离心法分离ICC细胞膜,采用同位素法、放射性配体结合分析法对mER的最大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(kD)进行分析。结果:免疫组化结果证实体外成功分离培养小鼠肠道ICC;激光共聚焦观察显示,ICC细胞膜上存在雌激素作用位点;放射性配体结合分析及Scatchard分析证实ICC细胞膜雌激素受体的的受体最大容量(Bmax)为45.75fmol/mg protein,平衡解离常数(kD)为0.7173nmol/L。结论:ICC表达mER,该受体可能介导雌激素对ICC的快速非基因组作用。

胞膜雌激素受体信号通路与乳腺癌的关系

雌激素通过分布于细胞膜的雌激素结合蛋白,激活细胞内信号级联放大反应,从而改变胞内蛋白功能和调控基因表达,此为雌激素非基因组作用模式或称膜启动的雌激素应答。雌激素基因组与非基因组作用的交叉对话在调控转录中有重要意义。在人类乳腺癌的发生、发展和转化过程中,除由雌激素诱导的核内事件外,膜启动的雌激素应答同样影响细胞的增殖与凋亡机制。

高效氟氯氰菊酯基于雌激素膜受体通路干扰小鼠海马神经发育的体外研究

目的 探讨高效氟氯氰菊酯(lambda-cyhalothrin, LCT)是否通过雌激素膜受体影响小鼠海马神经发育及其相关机制。方法 使用原代小鼠海马神经细胞和HT22细胞系,以雌激素(Estrogen, E2,1 nmol/L)作为阳性对照,分别使用LCT(1μmol/L)、雌激素膜受体激动剂G1(1 nmol/L)和雌激素膜受体抑制剂G15(1 nmol/L)处理24 h,观察原代神经细胞突起、突触后致密蛋白95(post-synaptic density protein 95,PSD95)表达,并检测HT22细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)通路的活化。结果 LCT、E2和G1均促进神经突起发育和PSD95表达(P<0.05),LCT和G1可以上调JNK磷酸化水平(P<0.05),G15抑制该促进作用(P<0.05);E2上调了ERK磷酸化水平(P<0.05)。结论 LCT可以产生类似G1的作用影响神经发育,且与E2促神经发育的机制并不完全一致。

膜雌激素受体介导一氧化氮合酶活性增高的快速非基因效应

实验利用新生小牛胸主动脉内皮细胞 (BAECs)作为模型 ,观察 17β 雌二醇 (E2 )、E2 BSA对BAECs中内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的快速激活作用 ,并探讨了丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)信号通路在其中的作用。结果显示 ,不同浓度的E2 ( 0 0 0 1- 1μmol/L)作用于BAECs 15min均能快速激活eNOS ;0 0 1μmol/L浓度的E2 作用于BAECs ,5min即能激活eNOS ,15min达到最大效应 ,随后eNOS快速失活 ;E2 BSA ( 17 5ng/ml)作用于BAECs ,15min同样可激活eNOS。E2 、E2 BSA激活eNOS的作用均能被雌激素受体 (ER)拮抗剂tamoxifen ( 0 1μmol/L)或MAPK激酶特异抑制剂PD980 5 9( 5 0 μmol/L)所阻断。放线菌素D ( 2 5 μg/ml)不能阻断E2 、E2 BSA对eNOS的激活作用。E2 ( 0 0 1μmol/L)、E2 BSA ( 17 5ng/ml)作用于BAECs 15min后可明显促进 p42 /p44磷酸化MAPK蛋白表达 ,而对 p42 / p44MAPK总蛋白表达无影响。Tamoxifen可部分阻断E2 、E2 BSA激活 p42 / p44磷酸化MAPK的作用。这些结果提示 ,BAECs膜上可能存在膜雌激素受体 (membraneestrogenreceptor,mER) ,E2 、E2

膜雌激素受体介导的NO途径对EPCs增殖和凋亡的影响

【目的】观察一氧化氮(NO)信号途径在膜雌激素受体介导的内皮祖细胞(EPCs)增殖和凋亡中的作用。【方法】在培养的EPCs上,分别使用E2-BSA、或加雌激素受体阻断剂ICI182,780、PI3K抑制剂LY294002和NOS抑制剂l-NAME,利用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性(10组,n=9),利用化学比色法测定NO的含量(6组,n=6),Hoechst33258染色观察EPCs凋亡(8组,n=5)以及免疫印迹法检测EPCs磷酸化eNOS蛋白表达的情况(4组,n=4)。【结果】与对照组相比,E2-BSA可以促进EPCs的增殖,ICI182,780可以抑制其增殖作用,表明膜雌激素受体介导的信号通路参与雌激素对EPCs的增殖作用;NO合成和细胞凋亡结果显示,E2-BSA可以促进一氧化氮的合成和抑制血清撤退诱导的凋亡,PI3K抑制剂LY294002、NOS抑制剂l-NAME以及和ICI182,780可以抑制上述作用;免疫印迹结果显示,E2-BSA可以促使eNOS的磷酸化,而LY294002可抑制上述作用。【结论】膜雌激素受体可通过PI3K/Akt/eNOS信号途径抑制EPCs的凋亡从而促进其增殖。

脑内膜雌激素受体信号转导与窖蛋白

雌激素受体在脑内分布十分广泛,对脑功能具有重要作用。雌激素可以通过膜雌激素受体启动的信号转导通路(非基因组效应)作用于中枢神经系统的很多部位,而窖蛋白(caveolin)可以通过不同方式参与膜雌激素受体介导的脑功能调节。简要综述了脑内膜雌激素受体介导的信号转导通路与窖蛋白相关的研究进展。

壬基酚对人结肠癌SW480细胞活性及跨膜G蛋白偶联雌激素膜受体30表达的影响

目的分析壬基酚对人结肠癌SW480细胞活性及跨膜G蛋白偶联雌激素膜受体30(GPR30)表达的影响。方法采用实验研究方法。通过体外培养人结肠癌SW480细胞,采用细胞增殖、周期及凋亡检测以及基因和蛋白检测实验,分析壬基酚影响人结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期、凋亡以及GPR30表达的情况。细胞分组:SW480细胞加入培养基设为对照组,加入培养基+1×10^(‒8) mol/L雌二醇设为雌二醇组,加入培养基+1×10^(-8) mol/L壬基酚设为壬基酚组,加入培养基+1×10^(-8) mol/L壬基酚+1×10^(-7) mol/L GPR30特异性拮抗剂G15设为壬基酚+G15组。观察指标:(1)4组人结肠癌SW480细胞增殖指数。(2)4组人结肠癌SW480细胞的周期占比。(3)4组人结肠癌SW480细胞的凋亡指数。(4)4组人结肠癌SW480细胞GPR30信使RNA(mRNA)表达情况。(5)4组人结肠癌SW480细胞GPR30蛋白表达情况。正态分布的计量资料以x±s表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用最小显著差异法检验。结果(1)4组人结肠癌SW480细胞增殖指数。细胞增殖实验结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞的增殖指数分别为100.00±0.00、89.19±4.86、148.96±6.04、120.40±3.39,4组比较,差异有统计学意义(F=21.45,P<0.05);壬基酚组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);雌二醇组、壬基酚+G15组分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)4组人结肠癌SW480细胞的周期占比。细胞周期实验结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞的S期细胞占比分别为39.96%±2.02%、36.67%±0.62%、43.85%±1.02%、38.29%±1.42%,4组比较,差异有统计学意义(F=10.08,P<0.05);雌二醇组、壬基酚组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);壬基酚+G15组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)4组人结肠癌SW480细胞的凋亡指数。细胞凋亡实验结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞的凋亡指数分别为1.67±0.18、4.80±0.31、0.75±0.11、2.20±0.19,4组比较,差异有统计学意义(F=136.79,P<0.05);雌二醇组、壬基酚组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);壬基酚+G15组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)4组人结肠癌SW480细胞GPR30 mRNA表达情况。实时荧光定量聚合酶链式反应检测结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞GPR30 mRNA相对表达率分别为1.00±0.00、0.86±0.05、1.89±0.27、0.64±0.12,4组比较,差异有统计学意义(F=26.61,P<0.05);壬基酚组、壬基酚+G15组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);雌二醇组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(5)4组人结肠癌SW480细胞GPR30蛋白表达情况。Western blot检测结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞GPR30蛋白相对表达率分别为1.83±0.16、1.68±0.15、3.10±0.30、1.26±0.11,4组比较,差异有统计学意义(F=34.05,P<0.05);壬基酚组、壬基酚+G15组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);雌二醇组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论低剂量壬基酚可增加人结肠癌SW480细胞增殖指数与S期细胞占比,降低细胞凋亡指数,并促进GPR30 mRNA和蛋白表达。

雌激素膜受体对良性乳腺结构不良性疾病痛觉过敏微环境的影响

目的以雌激素膜受体、痛觉过敏微环境及其相互关系为靶点,探讨良性乳腺结构不良发生的可能机制。方法选择2016年6月至12月经病理及彩超同时证实为良性乳腺结构不良的患者44例,光镜HE染色观察病理变化,Western blot方法检测雌激素核受体α(ERα)、雌激素膜受体(G蛋白偶联雌激素受体1,GPER1)、细胞外信号调节激酶(ERK)通路相关蛋白及痛觉过敏微环境中促炎因子的表达水平。结果良性乳腺结构不良患者疼痛总发生率为63. 64%,其中纤维瘤疼痛发生率为66. 67%,纤维囊性变疼痛发生率为16. 67%,合并两种及以上病变疼痛发生率为90. 0%。纤维瘤与纤维囊性变的疼痛发生率比较有统计学差异(P <0. 017),合并两种及以上病变与纤维囊性变的疼痛发生率比较有统计学差异(P <0. 017),纤维瘤与合并两种及以上病变的疼痛发生率比较无统计学差异(P> 0. 017)。疼痛组ERK的表达高于无疼痛组(P <0. 05),其余炎症相关因子[白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、神经生长因子(NGF)]组间比较无统计学差异(P> 0. 05)。痛觉过敏微环境中,炎症因子IL-1β与TNF-α存在显著相关性(r=0. 825,P=0. 002),NGF与TNF-α有相关性(r=0. 658,P=0. 028)。两组间ERα表达无统计学差异(P> 0. 05)。GPER1表达在疼痛组低于无疼痛组(P <0. 05)。ERα/GPER1比值在疼痛组高于无疼痛组(P <0. 05)。结论良性乳腺结构不良患者疼痛的发生与病变性质相关。GPER1表达下调导致炎症抑制作用减弱、促炎微环境使外周致敏化是疼痛发生的重要机制。

清宫汤对大鼠药物流产后子宫内膜雌激素受体及孕激素受体的影响

目前,药物流产(简称药流)已经广泛地应用于计划生育临床,取得较好疗效。但尚有7%～10%的不全流产率和失败率。因此,减缓药流过程中因少量绒毛和(或)蜕膜残留所致的流血量多和流血时间延长的副反应,减少清宫率,是药物流产研究过程中值得探索的问题。本实验对上述问题,从子宫内膜雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)水平探讨清宫汤治疗药流后出血的作用机理。材料和方法1 材料1.1 动物选用同济医科大学实验动物中心提供的纯种SD 大鼠,体重(250±20)g。1.2 实验用药米非司酮由北京第三制药厂生产,25 mg/

雌激素诱导小鼠肠道Cajal间质细胞内ERK快速活化的研究

目的研究17-β雌二醇(E2)对小鼠肠道Cajal间质细胞(ICC)中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的活化作用。方法利用原代培养小鼠ICC,采用Western blot分析E2诱导ICC内ERK1/2磷酸化的变化。结果E2作用于ICC,5 min即能诱导ERK1/2磷酸化,15 min后磷酸化ERK1/2蛋白表达达到最高,并从此逐渐降低;雌激素受体拮抗剂ICI182780可以阻断E2活化ERK1/2的作用。结论E2可以通过雌激素膜受体诱导ICC内ERK1/2的快速活化。

雌激素受体介导的快速信号通路的研究进展

除了经典的基因组效应以外,雌激素还可以通过细胞内信号转导途径在几分钟甚至是几秒钟内产生快速生物学效应,被称为雌激素的非基因组效应。这种雌激素的非基因组效应与基因组效应一样,也存在着组织、细胞的特异性。本文将对雌激素膜受体存在的依据、以膜ER为核心的多分子复合物的特性及其介导的信号通路以及雌激素快速生物学效应的组织/细胞特异性作一综述。