壬基酚对人结肠癌SW480细胞活性及跨膜G蛋白偶联雌激素膜受体30表达的影响

目的分析壬基酚对人结肠癌SW480细胞活性及跨膜G蛋白偶联雌激素膜受体30(GPR30)表达的影响。方法采用实验研究方法。通过体外培养人结肠癌SW480细胞,采用细胞增殖、周期及凋亡检测以及基因和蛋白检测实验,分析壬基酚影响人结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期、凋亡以及GPR30表达的情况。细胞分组:SW480细胞加入培养基设为对照组,加入培养基+1×10^(‒8) mol/L雌二醇设为雌二醇组,加入培养基+1×10^(-8) mol/L壬基酚设为壬基酚组,加入培养基+1×10^(-8) mol/L壬基酚+1×10^(-7) mol/L GPR30特异性拮抗剂G15设为壬基酚+G15组。观察指标:(1)4组人结肠癌SW480细胞增殖指数。(2)4组人结肠癌SW480细胞的周期占比。(3)4组人结肠癌SW480细胞的凋亡指数。(4)4组人结肠癌SW480细胞GPR30信使RNA(mRNA)表达情况。(5)4组人结肠癌SW480细胞GPR30蛋白表达情况。正态分布的计量资料以x±s表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用最小显著差异法检验。结果(1)4组人结肠癌SW480细胞增殖指数。细胞增殖实验结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞的增殖指数分别为100.00±0.00、89.19±4.86、148.96±6.04、120.40±3.39,4组比较,差异有统计学意义(F=21.45,P<0.05);壬基酚组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);雌二醇组、壬基酚+G15组分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)4组人结肠癌SW480细胞的周期占比。细胞周期实验结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞的S期细胞占比分别为39.96%±2.02%、36.67%±0.62%、43.85%±1.02%、38.29%±1.42%,4组比较,差异有统计学意义(F=10.08,P<0.05);雌二醇组、壬基酚组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);壬基酚+G15组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)4组人结肠癌SW480细胞的凋亡指数。细胞凋亡实验结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞的凋亡指数分别为1.67±0.18、4.80±0.31、0.75±0.11、2.20±0.19,4组比较,差异有统计学意义(F=136.79,P<0.05);雌二醇组、壬基酚组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);壬基酚+G15组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)4组人结肠癌SW480细胞GPR30 mRNA表达情况。实时荧光定量聚合酶链式反应检测结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞GPR30 mRNA相对表达率分别为1.00±0.00、0.86±0.05、1.89±0.27、0.64±0.12,4组比较,差异有统计学意义(F=26.61,P<0.05);壬基酚组、壬基酚+G15组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);雌二醇组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(5)4组人结肠癌SW480细胞GPR30蛋白表达情况。Western blot检测结果显示:对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞GPR30蛋白相对表达率分别为1.83±0.16、1.68±0.15、3.10±0.30、1.26±0.11,4组比较,差异有统计学意义(F=34.05,P<0.05);壬基酚组、壬基酚+G15组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);雌二醇组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论低剂量壬基酚可增加人结肠癌SW480细胞增殖指数与S期细胞占比,降低细胞凋亡指数,并促进GPR30 mRNA和蛋白表达。

甘加型藏羊血浆E_2动态变化及其受体GPR30在HPO轴的表达及定位研究

[目的]旨在探讨雌二醇(E_(2))与其膜受体(GPR30)对甘加型藏羊(Ovis arise)生殖活动的调控作用,以期为甘加型藏羊生殖生理活动规律提供研究依据。[方法]以甘加型藏羊为试验材料,采用酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR法、免疫印迹法和免疫组织化学染色法分别检测甘加型藏羊繁殖季节不同发情阶段(发情前期、发情期、发情后期和间情期)与非繁殖季节的乏情期血浆中E_2含量的动态变化、GPR30 mRNA及其蛋白在HPO轴的表达水平和分布情况。[结果]繁殖季节不同发情阶段与非繁殖季节乏情期血浆中E_(2)浓度呈波动式变化,波峰出现在发情后10,24,36 h和发情前期的第16天早晨,波谷出现在发情后22,39,60 h、第5天早晨和发情前期的第14天早晨,E_(2)平均浓度在发情期最高[(73.269±0.241) pg/mL],间情期最低[(57.919±0.547) pg/mL],除发情后期外,且与其他各时期差异显著(P<0.05);下丘脑和卵巢中GPR30 mRNA和蛋白的最高表达量均出现在其发情后期(P<0.05),但垂体中GPR30 mRNA表达量在间情期最高,蛋白表达量在发情前期最高(P<0.05);GPR30免疫阳性细胞主要在下丘脑大神经元胞体、胞核及轴突、神经胶质细胞胞浆,垂体嗜酸性和嗜碱性细胞胞浆以及卵巢卵泡颗粒层细胞、卵泡膜细胞和黄体细胞胞浆上表达。[结论]甘加型藏羊发情周期血浆E_(2)浓度在发情期最高,间情期最低;发情周期各时期GPR30 mRNA、GPR30蛋白及其免疫阳性细胞在下丘脑、垂体和卵巢中均有差异性表达,其中下丘脑和卵巢中GPR30 mRNA和蛋白的表达呈正相关,垂体中呈负相关,表明E_(2)通过与分布在HPO轴上的GPR30受体结合,调节甘加型藏羊周期性发情和生殖器官功能活动。