饲料中乙烯雌酚含量的检测方法研究

本研究旨在开发一种高效、经济的方法,利用高效能液相层析仪(HPLC)配合光二极管侦测器(PDA),对饲料中乙烯雌酚含量进行分析。为了避免在低浓度情况下的误判,同时采用高效液相层析质谱仪(HPLC/MS)进行了再确认。在实验中,饲料样品以甲醇为萃取液,经过振荡、离心、浓缩上清液,残渣用70%甲醇溶解,通过Oasis■HLB卡匣去除干扰物质,最后用甲醇进行冲提,冲提液经高效液相层析仪检测。实验结果表明,对于饲料添加0.5、1、3、5 ppm的情况,回收率在80.8%到107.5%。仅采用光二极管侦测器检测时,最低检测限为0.03 ppm;而采用质谱侦测器检测时,最低检测限可达0.005 ppm。研究结果表明,所开发的高效液相层析仪饲料中乙烯雌酚检测方法具有便捷、经济、可行的特点,可作为饲料中乙烯雌酚检验的一种有效方法。

高效液相色谱分离牛奶中己烯雌酚、己烷雌酚和双烯雌酚

采用基质固相分散技术，对牛奶中己烯雌酚（DES）、己烷雌酚（HEX）和双烯雌酚（DS）残留进行提取和净化处理，并通过高效液相色谱进行分离。研究雌激素在C18,Florisil和N-丙基乙二胺（PSA）填料的保留行为，并研究不同流动相和色谱柱对3种雌激素的分离。实验结果表明，流动相为20mmol／L磷酸／乙腈（42／58，V／V），流速1．0mL／min，紫外波长230nm。Xterra C18柱对3种雌激素分离最好。3种雌激素的平均回收率为84．1％～93．5％，相对标准偏差为3．5％～7．8％。DES、HEX和DS的检出限（LOD）分别为0．004，0．004和0．006mg／kg，定量限（LOQ）分别为0．01、0．01和0．02mg／kg；本方法可对样品进行灵敏、准确的定性定量分析。

水产品中己烷雌酚、己烯雌酚与双烯雌酚残留的毛细管电泳测定

建立了毛细管电泳-紫外检测法测定水产品中己烷雌酚（HXS）、己烯雌酚（DES）及双烯雌酚（DIES）残留的新方法。研究了缓冲体系的酸度、浓度、添加剂、分离电压、进样时间及温度等对组分分离的影响。在检测波长为200 nm,分离电压为20 kV,运行缓冲液为50 mmol/L硼砂-25 mmol/L氢氧化纳（pH12.3,含30%的N,N-二甲基甲酰胺）的条件下,3种目标组分在14 min内达到基线分离。HXS、DES与DIES的质量浓度与峰面积分别在2.0~120、1.0~100、1.0~100 mg/L范围内呈良好线性,相关系数（r2）分别为0.9998、0.9992、0.9994,检出限为0.3~0.9 mg/L。将该方法用于鲫鱼中3种雌酚类激素的检测,结果令人满意。

分子印迹固相萃取搅拌棒的制备及对复杂样品中双烯雌酚和己烷雌酚的萃取性能(英文)

以己烯雌酚为替代模板,利用整体材料的"原位"合成技术制备了分子印迹聚合物,并将其作为固相萃取搅拌棒的涂层(MIP-SBSE)制备了新的搅拌棒。详细考察了分子印迹聚合物制备条件中模板分子及功能单体用量对MIP-SBSE选择性萃取性能的影响,同时利用元素分析、扫描电镜和红外光谱对聚合物进行表征。以双烯雌酚(DS)和己烷雌酚(HS)为目标化合物,将MIP-SBSE与高效液相色谱-二极管阵列检测器联用,建立起复杂样品中DS和HS的分离分析方法。考察了吸附和解吸时间、解吸溶剂、离子强度和样品pH值等萃取条件对MIP-SBSE选择性萃取性能的影响。结果表明,在最佳萃取条件下,MIP-SBSE对DS和HS具有较高的选择性萃取性能,线性范围分别为1.0～400.0μg/L和5.0～400.0μg/L,利用氮吹再定容的方法,对DS和HS的检出限(S/N=3)分别可低至0.04和0.14μg/L。在对实际污水、蜂蜜和牛尿样品的分析中取得了良好的加标回收率,其值为61.3%～120%。所建方法具有简便、高选择性和灵敏等特点,可用于复杂样品中双烯雌酚和己烷雌酚的分析监测。

毛细管电泳-化学发光法测定牛奶中己烷雌酚、己烯雌酚和双烯雌酚

结合毛细管电泳高分离效能和化学发光高灵敏度优势,建立了一种灵敏可靠的测定牛奶中己烷雌酚、己烯雌酚和双烯雌酚的毛细管电泳-化学发光新方法.结果表明:己烷雌酚、己烯雌酚及双烯雌酚能显著抑制Ag(Ⅲ)-鲁米诺化学发光体系的化学发光,且发光强度与样品浓度在一定范围内呈良好的线性关系.在优化实验条件下,己烷雌酚、己烯雌酚及双烯雌酚在15 min内完成分离.己烷雌酚、己烯雌酚及双烯雌酚的浓度分别在0.6~60、0.5~40、1~60 mg/L范围内与化学发光信号峰高呈良好线性关系,检出限分别为:0.57、0.35、0.80 mg/L.RSD分别为:2.38%、1.90%、1.3%.对实际样品进行加标检测,结果令人满意.

环境水样中己烯雌酚与双烯雌酚的离子液体分散液-液微萃取/高效液相色谱法测定

以离子液体（[Omim][PF6]）为萃取剂,采用冷诱导分散液-液微萃取对环境水样中的己烯雌酚和双烯雌酚残留进行富集。优化后的萃取条件：在pH3.0的条件下,以50μL离子液体为萃取剂,0.8 mL甲醇为分散剂,采用反相Extend-C18柱（5μm,250 mm×4.6 mm）,流动相为水-甲醇（体积比40∶60）,流速：1.0 mL/min,柱温：35℃,检测波长：245 nm。在优化的萃取条件下,己烯雌酚和双烯雌酚的线性范围均为2.5-200μg/L,检出限（S/N=3）为80 ng/L。应用于环境水样中己烯雌酚和双烯雌酚的检测,加标回收率为93%-98%,相对标准偏差为3.0%-5.4%,建立的方法简单、环保。

β-氯乙基-3-O-雌酚酮醚合成方法改进

采用1，2-二氯乙烷既作溶剂，又作烃化剂，50％NaOH作碱，经相转移反应，一步制得定量收率产物，产品纯度高，无需重结晶。

新型雌激素哌嗪雌酚酮对雌激素受体表达的影响及其对靶基因的转录激活作用

目的探讨哌嗪雌酚酮对雌激素受体表达的影响及其对靶基因ERE的转录激活作用。方法小鼠去卵巢后,每天灌服不同剂量的哌嗪雌酚酮(0.5、1、2mg.kg-1)以及雌酚酮(0.71mg.kg-1),连续42d,采用免疫组织化学的方法观察哌嗪雌酚酮对去卵巢小鼠子宫中两种雌激素受体(ERα和ERβ)蛋白表达的影响;采用Tfx-50脂质体共转染目的基因和报告基因于MCF-7细胞株,探讨哌嗪雌酚酮对ERE的转录激活作用。结果与去卵巢模型组比较,哌嗪雌酚酮各剂量组能够上调子宫组织中两种雌激素受体亚型的表达(有剂量依赖性),对ERα亚型作用明显于ERβ;哌嗪雌酚酮能够激活雌激素受体的经典信号途径,与等摩尔剂量的雌酚酮相比仅表现出弱雌激素活性。结论哌嗪雌酚酮能够上调子宫组织中ERs的表达;与雌酚酮比较,其对靶基因ERE的转录激活作用非常微弱。

2-羟基脱氧雌酚酮的合成

The synthesis of oestradiol compounds,which plays a very important role in biochemical test,is described in this paper.2-Hydroxide-17-deoxy-oestrone was synthesized from oestrone dy a three-step procedure:Wolff-Kishner reduction,acetylation and Dakin oxidation.(1) WolffKishner reduction: the yield of 17-deoxyestrone was 86.0%.(2)acetylation:the yield of 2-acetyl-deoxyestrone was 81.9%.(3) Dakin oxidation: the yield of 2hydroxied-17deoxy-oestrone was 91.2%

液相色谱-串联质谱法测定猪肝中痕量己烯雌酚、己烷雌酚和双烯雌酚

建立了液相色谱-串联质谱法测定猪肝中痕量己烯雌酚、己烷雌酚和双烯雌酚。以氟化铵为流动相添加剂,目标物响应值平均提高约10倍,向样品中加入1%(V/V)乙酸乙腈超声提取,提取液经分散固相萃取净化、水稀释后,采用Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱,以0.1 mmol/L氟化铵和乙腈为流动相,梯度洗脱分离,电喷雾电离源负离子模式和多反应监测模式检测,外标法定量。在0.4、0.8、4.0μg/kg添加水平下,3种目标物的加标回收率为89.5%~109.4%,相对标准偏差(RSD)为2.2%~7.8%,方法定量限为0.4μg/kg。本方法前处理过程无需浓缩,操作简便、灵敏度高、重现性好、环保节约,适用于猪肝中痕量己烯雌酚、己烷雌酚和双烯雌酚的定性与定量分析。

HPLC法测定己烯雌酚软膏中己烯雌酚的含量

目的：建立测定己烯雌酚软膏中己烯雌酚（DES）含量的高效液相色谱（HPLC）检验方法.方法：采用Nova-PaKC18色谱柱（150mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-水（75：25）,流速为1.0mL/min,检测波长为254nm.结果：己烯雌酚在10.08～80.64pg/ml范围内含量与峰面积比呈现良好的线性关系y=2×106×-5433.4（r=0.9999）,平均回收率为98.67%,RSD为0.3%.结论：本法能准确检测已烯雌酚软膏中的己烯雌酚含量,因此可作为已烯雌酚质量控制的有效测量方法.

新型雌激素哌嗪雌酚酮对去卵巢小鼠骨代谢及骨生物力学的影响

目的研究哌嗪雌酚酮(piperazinyl estrone,PE)对去卵巢小鼠骨代谢及骨生物力学的影响,并探讨其作用机制。方法70只昆明种雌性小鼠,随机分为7组,Basal组,Ovx组,Ovx+PE 0.5mg.kg-1.d-1组,Ovx+PE 1.0 mg.kg-1.d-1,Ovx+PE 2.0 mg.kg-1.d-1,Ovx+E 0.71mg.kg-1.d-1灌胃给药共42 d,处死小鼠,采用骨形态计量学、骨生物力学测定哌嗪雌酚酮对去卵巢小鼠的骨量及力学指标的影响。结果去卵巢小鼠骨小梁面积明显减少63%,小鼠股骨结构力学和材料力学指标均呈现显著性降低,表现出骨吸收大于骨形成的高转换型骨质疏松;而哌嗪雌酚酮各剂量组的骨量均有不同程度增加,小鼠股骨的力学参数有不同程度提高;雌酚酮通过明显抑制骨吸收,轻度抑制骨形成增加骨量。结论哌嗪雌酚酮中剂量组(1.0 mg.kg-1.d-1)轻度抑制骨转换增加去卵巢小鼠的骨量,改善去卵巢小鼠股骨的生物力学特性。

氟苯咪唑、炔雌醇和己烯雌酚诱发多倍体畸变的研究

我们在30种中西药品致突变的系列研究中,发现九种新的突变原和/或致癌原。其中三种突变原和/或致癌原,在哺乳动物细胞遗传试验中诱发了明显的多倍体畸变。氟苯咪唑(Flubendazole,FBD)、炔雌醇(Estinylestradiol,EST)和己烷雌酚(Hext-sterol,HEX)

外用己烯雌酚治疗阴道残端肉芽25例分析

我院妇科门诊1985～1990年7月用乙烯雌酚治疗子宫切除后阴道残端肉芽组织25例总结如下; 临床资料: 1.发病年龄:本组38～40岁3例、41～50岁16例、51～57岁6例,最大年龄5岁,最小年龄38岁,平均年龄46.7岁,均为子宫切除术后患者。

哌嗪雌酚酮对去卵巢大鼠骨代谢的作用

目的 研究哌嗪雌酚酮 (一种新合成雌激素哌嗪类衍生物 )对去卵巢大鼠骨代谢及子宫的作用。方法雌酚酮 (E) 0 75mg·kg- 1 ·d- 1 ,哌嗪雌酚酮 (P E) 1和 10mg·kg- 1 ·d- 1 ,ig共 90d ,骨形态计量学测量。结果 去卵巢大鼠子宫萎缩 ,血清胆固醇升高 ,骨量减少伴骨高转化的改变。E组与去卵巢组比 ,子宫重量增加 ,血清胆固醇降低 ,骨高转化降低。P E(1mg)组与去卵巢组比 ,子宫重量轻微增加 ,骨量增加 ,骨形成和骨吸收均维持在去卵巢组的高水平。P E(10mg)组比低剂量组增加更多的骨量 ,但其作用机理与雌酚酮相同 ,明显地降低骨转化。结论 哌嗪雌酚酮可预防去卵巢大鼠所致的骨丢失。低剂量 (1mg)

大豆异黄酮的重要代谢产物——马雌酚

目的介绍大豆异黄酮的重要代谢产物马雌酚的产生及其重要性。方法参阅近年发表的相关文献，对其进行分析、整理和归纳。结果摄入大豆异黄酮后，其中的大豆苷或大豆黄素在肠道微生物茵群的作用下可产生具有更高药理活性的代谢产物马雌酚。鉴于肠道微生物茵群的多样性，仅有1／3—1／2的个体能将大豆黄素代谢为马雌酚，并从中获得最佳的临床效果。结论马雌酚是大豆异黄酮极其重要的代谢产物，富含大豆苷的大豆胚轴是高活性马雌酚的最佳来源。

香豆雌酚对膝骨关节炎患者软骨细胞OPG/RANKL及MMP-1、MMP-3表达的影响

目的:研究香豆雌酚(coumestrol)对膝骨关节炎患者软骨细胞OPG/RANKL及MMP-1、MMP-3表达的影响,初步探讨其对骨关节炎的治疗机制。方法:分离、培养因膝骨关节炎行膝关节置换患者的膝关节软骨细胞,运用Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定。用不同浓度(10-9、10-8、10-7mol·L-1)香豆雌酚干预第3代细胞,并设0浓度为空白对照组,分别于培养后3、7 d用real-time PCR法测定细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)和基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)mRNA的表达。结果:干预3 d,10-8mol·L-1组OPG及RANKL mRNA表达均增加,其OPG/RANKL相对表达是空白对照组的2.59倍(P<0.05);干预7 d,10-9和10-8mol·L-1组OPG mRNA表达均增加,10-7mol·L-1组RANKL mRNA表达增加,10-8mol·L-1组OPG/RANKL相对表达是空白对照组的3.85倍(P<0.05)。干预3 d,10-8mol·L-1组MMP-1 mRNA表达减少(P<0.05);干预7 d,10-8mol·L-1组MMP-1和MMP-3 mRNA表达均减少(P<0.05)。结论:香豆雌酚能增加膝骨关节炎患者关节软骨细胞OPG表达及OPG/RANKL值,减少其MMP-1、MMP-3表达,具有一定的软骨保护作用。

双烯雌酚人工抗原的合成及特异性抗体的制备

目的制备抗双烯雌酚(DIEN)特异性抗体,为进一步研制DIEN免疫检测试剂盒打基础。方法采用4-溴丁酸乙酯对DIEN进行活化,以活泼酯法与BSA偶联制备免疫原(DIEN-CP-BSA);经紫外扫描和飞行时间质谱扫描鉴定偶联情况;以DIEN-CP-BSA免疫Balb/c小鼠制备特异性抗体,间接(竞争)ELISA评价抗血清效价及特异性。结果本试验获得较高效价的DIEN抗血清,其效价达1∶64 000,双烯雌酚半抑制浓度(IC50)为62 ng/ml;抗血清与结构类似物己烷雌酚的交叉反应率仅为0.34%,与己烯雌酚和17-β雌二醇无交叉反应;利用该抗体建立的间接竞争ELISA检测法,双烯雌酚在10～300 ng/ml呈线性关系。结论本研究制备了抗双烯雌酚(DIEN)特异性抗体,为研究畜产品中DIEN残留及开发DIEN免疫检测试剂盒奠定了基础。