LncRNA-LUCAT1对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞凋亡和周期的作用和机制研究

目的探索LncRNA-LUCAT1对雨蛙素诱导的急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)腺泡细胞功能的影响。方法在大鼠胰腺腺泡细胞AR42J中敲低或过表达LUCAT1,利用CCK8检测细胞活性;Elisa检测IL-6、IL-1β、TNF-α、TAP和淀粉酶水平;流式细胞术检测细胞凋亡和周期;western blot检测凋亡和周期表达蛋白。结果CCK8检测结果显示,雨蛙素处理后AR42J细胞OD值显著下降,与对照组相比,LUCAT1过表达后OD值下降显著,而LUCAT1敲低后细胞OD值显著升高(P<0.05)。雨蛙素处理的AR42J细胞中淀粉酶和TAP含量升高,敲低LUCAT1可以使淀粉酶和TAP含量显著下降(P<0.05)。LUCAT1还能够上调炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平(P<0.05),加重雨蛙素诱导的腺泡细胞炎症反应。LUCAT1能够引起胰腺腺泡细胞过度凋亡和细胞周期阻滞,敲低LUCAT1则能够缓解雨蛙素诱导的细胞凋亡和细胞周期阻滞。LUCAT1促进了凋亡因子Bax、Cleaved-Caspase7和Cleaved-Caspase3水平,并下调了凋亡抑制因子Bcl-2表达,同时LUCAT1还抑制了周期蛋白Cyclin D1的表达。敲低LUCAT1则呈现相反的趋势。结论LUCAT1敲低能够有效抑制雨蛙素诱导的腺泡细胞凋亡和细胞周期阻滞,是AP治疗的潜在靶点。

吲哚美辛通过恢复自噬流减轻雨蛙素诱导的小鼠急性胰腺炎

目的探究吲哚美辛对雨蛙素诱导的小鼠急性胰腺炎(AP)的影响。方法将28只C57BL/6小鼠随机分为对照组、吲哚美辛组、雨蛙素组、雨蛙素+吲哚美辛组,通过雨蛙素(50μg/kg)腹腔注射法建立小鼠AP模型,雨蛙素+吲哚美辛组在第一次雨蛙素注射前6 h和0.5 h给予2次吲哚美辛(8 mg/kg)腹腔注射。HE染色观察小鼠胰腺组织形态学改变并进行组织病理学评分;检测血清淀粉酶与脂肪酶水平;免疫组化检测髓过氧化物酶阳性(MPO+)细胞数;qPCR检测炎症因子mRNA表达;电镜检测各组自噬空泡数量;Western blotting检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ与P62的表达。结果与对照组相比,雨蛙素组组织病理学评分增加(P<0.05);血清淀粉酶与脂肪酶明显升高(P<0.05);MPO+细胞数及炎症因子mRNA的表达水平升高(P<0.05);自噬空泡增多,LC3-Ⅱ与P62蛋白表达升高(P<0.05)。与雨蛙素组相比,雨蛙素+吲哚美辛组胰腺组织炎症样变减轻,组织病理学评分降低(P<0.05);血清淀粉酶与脂肪酶水平明显降低(P<0.05);MPO+细胞数及炎症因子mRNA的表达水平降低(P<0.05);异常堆积的自噬空泡减少,LC3-Ⅱ与P62蛋白的表达也下降(P<0.05)。结论本研究发现吲哚美辛可以减轻雨蛙素诱导的小鼠胰腺组织损伤并改善AP时受损的自噬流,提示吲哚美辛可能通过恢复受损的自噬流发挥其对小鼠AP的保护作用。

CLDN4对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型凋亡和自噬的影响及其机制研究

目的本研究目的在于探究CLDN4在急性胰腺炎中的作用及其作用机制。方法使用雨蛙素分别处理大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)0、2、4、6、8、10 h建立急性胰腺炎细胞模型;本研究将AR42J细胞按随机数字表法分为5组:对照组:正常培养的AR42J细胞;雨蛙素组:经雨蛙素处理的AR42J细胞;si-control组:经雨蛙素处理且转染si-control的AR42J细胞;si-CLDN4组:经雨蛙素处理且转染CLDN4 siRNA的AR42J细胞;NF-κB组:经雨蛙素处理、转染CLDN4 siRNA且使用NF-κB激活剂的AR42J细胞。使用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6的含量;使用流式细胞仪检测细胞凋亡水平;使用蛋白质印迹法分别检测CLDN4、LC3-I、LC3-II、t-p65、p-p65、p62和Beclin-1的表达水平。结果在AR42J细胞被雨蛙素分别处理0、2、4、6、8、10 h后CLDN4表达水平分别为1.00±0.07、1.63±0.14、2.34±0.18、2.91±0.25、3.66±0.35和3.18±0.32,雨蛙素处理显著增高了CLDN4的表达水平,且在处理8 h后达到峰值。经过雨蛙素处理后,AR42J细胞上清液中TNF-α和IL-6的表达水平显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。经过雨蛙素处理后,AR42J细胞凋亡率升高,LC3-II/LC3-I比值和Beclin-1表达水平显著上升,以及p62表达水平显著下调。敲低CLDN4减弱了雨蛙素的效果并抑制了NF-κB信号通路的激活;而增强NF-κB信号通路的活性逆转了敲低CLDN4带来的一系列影响。结论CLDN4能够通过激活NF-κB信号通路诱导急性胰腺炎细胞模型中细胞的凋亡和自噬。

雨蛙素诱导大鼠急性胰腺炎高相关性肠道共生菌的变化

目的探讨雨蛙素诱导的大鼠急性胰腺炎肠道菌群的影响,挖掘与其发生高度相关的肠道共生菌。方法将雄性Sprague Dawley大鼠随机分为造模组(AP组)和对照组(Control组)。通过腹腔注射雨蛙素构建大鼠急性胰腺炎模型,收集血清标本检测血清淀粉酶、脂肪酶。收集胰腺组织,采用HE染色法观察胰腺组织病理变化。收集大鼠粪便,借助16S rRNA测序技术研究两组大鼠肠道微生物菌群的变化,并通过与大鼠生理指标表型进行关联分析进而挖掘肠道共生菌。结果雨蛙素诱导的急性胰腺炎可显著升高大鼠血清淀粉酶和脂肪酶活力(P<0.01),降低胰腺干湿比(P<0.01),造成胰腺组织结构弥漫性破坏;16S rRNA测序结果显示,两组间肠道菌群存在差异,其中急性胰腺炎组肠道菌群多样性显著降低,属水平上以埃希氏-志贺氏菌属、拟杆菌属和肠球菌属为主要优势属。结论雨蛙素诱导的大鼠急性胰腺炎引起肠道菌群的多样性、丰富度和均匀度降低及物种组成发生显著改变。

雨蛙素腹腔注射法建立小鼠急性坏死性胰腺炎模型的实验研究

目的 建立一种稳定的急性坏死性胰腺炎模型。方法 36只雄性ICR小鼠用查随机数字表的方法随机分为对照组 (n =6 )和实验组 (n =30 )。实验组予以雨蛙素腹腔注射 ( 5 0 μg/kg) ,每小时注射 1次 ,共 7次 ,并分别于首次注射后 9h、18h、2 4h、4 8h和 72h各处死 6只 ;对照组予以腹腔注射等量的生理盐水 ,于注射后 18h处死。比较两组动物的血淀粉酶值、胰腺重量及胰腺组织学评分分值。结果 腹腔注射雨蛙素后 9h ,小鼠血淀粉酶值升高 ,胰腺重量增加 ,18h达峰值 ,2 4h后逐渐下降。二者与胰腺病理损害程度相一致。 18h胰腺间质炎性细胞浸润和腺泡细胞坏死明显 ,胰腺组织学评分值达到最大值 (P<0 .0 5 )。结论 大剂量雨蛙素腹腔注射能诱导ICR小鼠产生急性坏死性胰腺炎。该模型制备方法简单 ,无创伤性 ,模型稳定 。

雨蛙素联合脂多糖致小鼠重症急性胰腺炎模型

目的建立一种快速、简便、无创伤性的小鼠重症急性胰腺炎模型。方法运用雨蛙素联合脂多糖小鼠腹腔内给药;血淀粉酶和胰腺含水量测定;胰腺和胰外器官病理学检查。结果雨蛙素联合脂多糖组血淀粉酶和胰腺含水量均增高,胰腺间质水肿、实质出血坏死、炎症细胞浸润,胃、回肠、脾和肺均受到不同程度的损害;雨蛙素组胰腺无明显出血坏死,胰外器官正常。讨论雨蛙素联合脂多糖致小鼠重症急性胰腺炎模型具有人类重症急性胰腺炎的病理改变,为非创伤性,操作简单,成模快速稳定,重复性好。

雨蛙素诱发的急性胰腺炎动物模型

雨蛙素是一类十肽物质 ,为胆囊收缩素类似物 ,其化学结构与之相似 ,具有多种生物活性。雨蛙素作用于胰腺腺泡细胞 ,可引起分泌大量的消化酶和胰液 ,从而导致可复性的、以高淀粉酶血症、间质水肿、腺泡细胞胞质内空泡形成及白细胞浸润为特征的急性水肿性胰腺炎。雨蛙素诱发的急性胰腺炎模型具有非侵入性、方便、快捷、与人类急性胰腺炎相似等多种优点 。

雨蛙素及脂多糖在小鼠急性胰腺炎建模中的应用

目的:利用雨蛙素(caerulein,CAE)及脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)复制典型的轻重型急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)模型.方法:C57小鼠50只,随机分为5组:正常对照组(CON组)、CAE 7次组(CAE 7组)、CAE 7次加LPS组(CAE 7+LPS组)、CAE 13次组(CAE 13组)及CAE 13次加LPS组(CAE 13+LPS组),检测血淀粉酶、脂肪酶水平,组织病理学及透射电镜观察.结果:各实验组酶学水平及病理评分明显高于对照组(淀粉酶含量最低的CAE 7组:27020U/dL±3443 U/dL vs CON组:2696 U/dL±400 U/dL,P<0.01;脂肪酶含量最低的CAE 7组:1379 U/L±283 U/L vs CON组:33 U/L±13 U/L,P<0.01;病理评分最低的CAE 7组:5.8±0.9 vs CON组:0.1±0.3,P<0.01);与CAE 7组相比,CAE 13+LPS组酶学水平及病理评分升高更明显(CAE 13+LPS组淀粉酶:46969U/dL±11852 U/dL vs CAE 7组淀粉酶:27020U/dL±3443 U/dL,P<0.01;CAE 13+LPS组脂肪酶:1962 U/dL±496 U/dL vs CAE 7组脂肪酶:1379 U/dL±283 U/dL,P<0.05;CAE13+LPS组病理评分:11.1±1.1 vs CAE 7组病理评分:5.8±0.9,P<0.05);CAE 13+LPS组较CAE 13组病理评分改变更明显(CAE 13+LPS组:11.1±1.1 vs CAE 13组:10.1±0.99,P<0.05);电镜示CAE 7组细胞线粒体和粗面内质网扩张水肿,CAE 13+LPS组细胞坏死、间质结构破坏.结论:单纯CAE腹腔注射7次可制典型急性水肿型胰腺炎模型,CAE 13次加末次LPS腹腔注射可制典型急性坏死型胰腺炎模型,是研究不同程度AP较理想的模型.

雨蛙素腹腔注射致小鼠慢性胰腺纤维化病理组织学观察

目的:采用雨蛙素反复腹腔注射诱导小鼠慢性胰腺炎,评估胰腺发生纤维化的程度及病变特点。方法:健康雄性C57BL/6小鼠20只,随机分为两组,模型组反复腹腔注射雨蛙素,对照组腹腔注射与模型组等体积的生理盐水,于第7周第1 d留取胰腺组织,光镜下进行胰腺腺泡细胞萎缩、炎性细胞浸润、间质纤维组织增生评分;另一部分行苦味酸-天狼星红染色,偏振光显微镜下观察胰腺间质胶原增生情况;第三部分行免疫组织化学染色,观察α-SMA表达情况。结果:模型组小鼠胰腺HE染色显示明显腺泡细胞萎缩、炎性细胞浸润及纤维化;苦味酸-天狼星红染色显示显著胰腺间质胶原增生,评分明显升高;免疫组织化学染色显示星状细胞活化标志物α-SMA表达明显增强。结论:雨蛙素反复多次腹腔注射可诱导小鼠产生明显的胰腺纤维化病变,纤维化发生机制可能与胰腺星状细胞活化分泌过多细胞外间质有关。

雨蛙素联合脂多糖致小鼠重症急性胰腺炎模型的建立及其机理的探讨

为建立一种快速、简便、无创伤性的小鼠重症急性胰腺炎模型。本实验运用雨蛙素联合脂多糖小鼠腹腔内给药;血淀粉酶和胰腺湿重测定;胰腺和胰外器官病理学检查;腺泡细胞透射电镜观察;血清NO浓度测定;胰腺组织SOD和MDA测定。结果发现,雨蛙素联合脂多糖组血淀粉酶、NO浓度和胰腺湿重均增高,SOD活力降低,MDA含量升高,胰腺间质水肿、实质出血坏死、炎症细胞浸润,腺泡细胞受损严重,胰外多器官受到不同程度的损害;雨蛙素组胰腺无明显出血坏死,胰外器官正常;脂多糖组胰腺基本正常,胰外器官轻微炎症浸润。由本实验结果显示,雨蛙素联合脂多糖致小鼠重症急性胰腺炎模型具有人类重症急性胰腺炎的病理特征,为非创伤性,成模快速稳定,重复性好;脂多糖促使雨蛙素诱导的急性水肿型胰腺炎重症化的机理与自由基释放-清除机制和氧化-抗氧化机制紊乱有关。

清胰Ⅱ号对雨蛙素诱导的急性胰腺炎小鼠Nrf2相关基因水平的影响

目的研究清胰Ⅱ号对雨蛙素所致小鼠急性胰腺炎的保护作用及其机制。方法雄性昆明种小鼠32只,随机分为空白对照组、模型组、清胰Ⅱ号低剂量组(10 g/kg)及清胰Ⅱ号高剂量组(20 g/kg),每组8只。给药7 d后,采用雨蛙素制模。观察清胰Ⅱ对胰腺指数、血清胰淀粉酶含量、胰腺组织的形态学变化及胰腺组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶(HO-1)、谷胱甘肽合成的限速酶(Gclc)基因的mRNA水平的影响。结果与空白组比较,模型组胰腺指数及血清胰淀粉酶水平显著升高(P<0.05),胰腺组织出现明显水肿及坏死,同时胰腺组织中Nrf2、Nqo1基因的mRNA水平显著增高(P<0.05)。与模型组比较,清胰Ⅱ号给药组胰腺指数及血清中胰淀粉酶水平显著降低(P<0.05),胰腺组织水肿和坏死明显减轻,胰腺组织中Nrf2、Keap1、Nqo1、HO-1、Gclc基因的mRNA水平较模型组显著增高(P<0.05)。结论清胰Ⅱ号对蛙素诱导的小鼠急性胰腺炎有预防保护作用,其机制可能与进一步上调胰腺组织中Nrf2、Keap1、Nqo1、HO-1、Gclc的水平有关。

雨蛙素诱发的大鼠急性胰腺炎胰腺毛细血管透射电镜观察

目的：了解实验性急性胰腺炎时胰腺毛细血管超微结构的改变并探讨其与急性胰腺炎的关系。方法：采用皮下注射雨蛙素建立大鼠急性水肿性胰腺炎模型，用透射电镜观察胰腺毛细血管形态结构的变化。结果：毛细血管腔内表面不规则，毛细血管内皮细胞核增大、线粒体肿胀，内皮细胞向腔内的突起增加，内皮细胞胞质内吞饮小泡及“窗孔”数量均明显增加。结论：急性胰腺炎早期即存在胰腺毛细血管内皮细胞的损伤。推测其与胰腺微血管通透性增高有关，并导致胰腺局部区域血液灌流不同，最终引起组织缺血，加速病变的发展。

雨蛙素诱导小鼠急性胰腺炎与细胞因子作用有关

1977年Lampel首次报道应用雨蛙素(ceru-lein)诱导大鼠急性胰腺炎,表现为胰腺组织水肿、胰酶分泌增多、溶酶体酶被激活。Adler(1985)报道在雨蛙素注射后,大鼠胰腺组织中酶原颗粒与溶酶体发生膜性融合现象。雨蛙素为一重要的胃肠激素,其功能与CCK类似。

雨蛙素诱发的大鼠急性水肿性胰腺炎动物模型

采用皮下注射超大剂量的雨蛙素建立大鼠急性水肿性胰腺炎模型，用光镜和电镜观察了胰腺腺泡细胞的组织病理学改变。该模型以胰腺的显著水肿，组织学改变（包括腺泡细胞胞质内空泡形成，间质水肿及白细胞浸润）以及血清淀粉酶水平升高为特征。此模型具有简便，产生损伤迅速，非侵入性，在病理形态、时间进程与人类胰腺炎相似等多种优点，是研究急性胰腺炎早期发病机理的理想动物模型。

雨蛙素及脂多糖诱导小鼠急性胰腺炎效果分析

目的观察雨蛙素(CAE)诱导小鼠急性胰腺炎模型中胰腺及肺组织损伤时间变化规律;对比雨蛙素及脂多糖(LPS)不同给药方案诱导的小鼠急性胰腺炎模型效果。方法雨蛙素不同给药频次以及雨蛙素联合脂多糖诱导小鼠急性胰腺炎模型,收集小鼠血浆以淀粉-碘比色法检测淀粉酶活性;取胰腺及肺组织行HE染色观察组织损伤严重程度。结果 CAE7组小鼠胰腺及肺组织损伤在4 h达高峰,24 h开始修复,5 d基本恢复正常;造模后4 h,CAE7组和CAE9组小鼠血淀粉酶活性较对照组升高[(6 461±1 078)U/dl比(3 093±331)U/dl;(6 821±495)U/dl比(3 093±331)U/dl,P<0.001],且CAE7+LPS组较CAE9组更高[(8 912±465)U/dl比(6 821±495)U/dl,P<0.001],CAE7组和CAE9组小鼠胰腺组织病理评分较对照组升高(4.750±0.524比0±0;4.917±0.664比0±0,P<0.001),且CAE7+LPS组较CAE9组更高(7.167±0.258比4.917±0.664,P<0.001)。结论雨蛙素50μg/kg连续7次给药可诱导出小鼠急性胰腺炎模型,增加给药频次未见胰腺组织损伤加重,而联用脂多糖可加重急性胰腺炎模型严重程度。

miR-539靶向GPD1L对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型凋亡和自噬的影响

目的研究miR-539对雨蛙素(Cerulein)诱导的急性胰腺炎(AP)细胞模型凋亡和自噬的影响及分子机制。方法用15 nmol/L Cerulein处理胰腺腺泡A42J细胞4、8、12、24 h,建立AP模型。淀粉酶试剂盒检测细胞上清中淀粉酶(AMY)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-539和甘油3-磷酸脱氢酶1样蛋白(GPD1L)mRNA的水平,Western印迹检测GPD1L、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、膜型LC3(LC3Ⅰ)、胞浆型LC3(LC3Ⅱ)、Beclin1和p62的表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-539与GPD1L间的调控关系。结果与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-539含量显著升高(P<0.05),GPD1L mRNA和GPD1L蛋白含量显著降低(P<0.05),与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-539含量和细胞凋亡率Bax、LC3-ⅡCerulein均显著升高,Bcl-2、p62含量显著降低(P<0.05);与Cerulein+anti-miR-con组相比,Cerulein+anti-miR-539组结果相反(P<0.05)。与miR-con组相比,过表达miR-539的Cerulein处理组细胞中GPD1L mRNA和蛋白含量均显著降低(P<0.05);抑制miR-539组的Cerulein处理组细胞中GPD1LmRNA和蛋白含量均显著升高(P<0.05)。与Cerulein+pcDNA-NC组相比,Cerulein+GPD1L组的AR42J细胞中GPD1L Bcl-2、p62水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1含量均显著降低(P<0.05)。与Cerulein+anti-miR-539+si-con组相比,Cerulein+anti-miR-539+si-GPD1L组AR42J细胞中GPD1L、Bcl-2、p62、细胞凋亡率均显著下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1、Bax显著升高(P<0.05)。结论miR-539通过靶向GPD1L调控Cerulein诱导的胰腺AR42J细胞凋亡和自噬。

NR5A2减弱雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞的炎性反应

目的探讨NR5A2对大鼠胰腺腺泡细胞系AR42J炎性反应的影响。方法用雨蛙素刺激AR42J细胞,建立胰腺炎细胞模型。分别用慢病毒和sh-RNA感染AR42J细胞,上调和下调细胞内的NR5A2,用Western blot检测NR5A2的含量。在此基础上,用流式细胞计量术检测细胞凋亡率,用ELISA检测细胞培养上清中炎性因子IL-1、TNF-α的水平。结果用100 nmol/L雨蛙素刺激AR42J细胞,成功诱导炎性反应和细胞凋亡,刺激6 h凋亡率达到峰值;刺激24 h NR5A2含量降到最低点,刺激48 h基本恢复至正常水平。用慢病毒载体过表达NR5A2,再用雨蛙素刺激,过表达组的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05);IL-1和TNF-α在过表达组均显著降低(P<0.01,P<0.05)。用shRNA沉默NR5A2,雨蛙素刺激后沉默组的细胞凋亡率显著低于对照组(P<0.05);IL-1和TNF-α在沉默组均显著升高(P<0.05,P<0.01)。在过表达NR5A2基础上沉默β-catenin,与对照组相比,凋亡率降低(P<0.05),IL-1和TNF-α显著增高(P<0.05,P<0.01)。结论 NR5A2能够促进炎性反应条件下胰腺腺泡细胞的凋亡,抑制炎性反应。β-catenin参与NR5A2在腺泡细胞炎性反应应激条件下的调节作用。

IRF9基因沉默对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响

目的探讨干扰素调节因子IRF9基因沉默对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响,阐述IRF9在急性胰腺炎(AP)发生发展中的作用。方法 AR42J细胞培养至对数期,分为空白对照组、阴性对照组及IRF9沉默组。成功转染siRNA后应用雨蛙素诱导AR42J细胞构建体外急性胰腺炎模型。采用qRT-PCR和Western blot方法检测AR42J细胞中IRF9基因、Caspase 3及Caspase 9的mRNA及蛋白的表达水平;流式细胞术检测AR42J细胞凋亡率。结果①雨蛙素诱导24 h后,各组中的IRF9基因的mRNA及蛋白水平均较雨蛙素诱导前升高,Caspase 3及Caspase 9的mRNA及蛋白的表达水平亦明显升高,说明发生AP时IRF9及凋亡相关基因的表达水平均上调。②与空白对照组相比,雨蛙素诱导后IRF9沉默组AR42J细胞的凋亡率有明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论发生AP时IRF9、Caspase 3及Caspase 9的表达水平均上调,细胞凋亡率增加,IRF9基因沉默降低了雨蛙素诱导的体外AP细胞模型的细胞凋亡。

干扰CDH1基因对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型凋亡和自噬的影响

目的探讨干扰上皮钙粘素(CDH1)基因对雨蛙素(Caerulein)诱导的大鼠急性胰腺腺泡细胞AR42J凋亡和自噬的影响及可能的机制.方法体外培养大鼠急性胰腺腺泡细胞AR42J,将CDH1特异性siRNA转染至AR42J细胞,成功干扰CDH1表达后以雨蛙素干预构建急性胰腺炎细胞模型,实验分为空白对照(Mock)组、雨蛙素(Cae)组、雨蛙素+转染对照(Cae+si-NC)组和雨蛙素+转染(Cae+si-CDH1)组,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测CDH1的表达变化,噻唑蓝(MTT)分析细胞增殖能力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎性介质肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot分析凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),自噬标记物Beclin-1、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ以及β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和其下游靶分子c-Myc和cyc-lin D1的表达.结果与Mock组相比,Cae组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中CDH1、Bax、Beclin-1、LC3-Ⅱ、TNF-α和IL-1β、β-catenin、c-Myc和cyclin D1的表达上调,LC3-Ⅰ和Bcl-2的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);与Cae组相比,Cae+si-CDH1组干扰CDH1能够逆转以上各指标,差异有统计学意义(P<0.05).结论干扰CDH1基因可减轻雨蛙素诱导的AR42J细胞凋亡和自噬,其作用机制可能与阻断β-catenin信号通路的激活有关.

AR42J细胞自分泌Shh信号参与雨蛙素诱导的急性胰腺炎

目的:观察Hedgehog信号在急性胰腺炎(AP)体外模型中的表达变化。方法:不同浓度的雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J,构建AP体外细胞模型,重组Shh作用于AR42J细胞。采用RT-PCR、Western-blot分别检测细胞Shh信号分子表达;ELISA检测上清Shh水平。结果:与对照组相比,雨蛙素诱导组Shh的m RNA和蛋白水平表达明显升高,细胞自分泌Shh水平也明显升高,呈雨蛙素浓度依赖性。重组Shh刺激后,Shh相关信号Shh、Gli1和Ptch1表达呈浓度依赖性地升高。结论:在雨蛙素诱导的AR42J细胞,自分泌的Shh信号参与急性胰腺炎的发病机制。