线粒体钙单向转运体相关钙超载调控钙调蛋白对雨蛙肽诱导胰腺导管上皮细胞微丝骨架的影响

目的 通过体外细胞研究探讨线粒体钙单向转运体(MCU)相关钙超载通过调控钙调蛋白(CaM)对雨蛙肽诱导的胰腺导管上皮细胞微丝骨架的影响。方法 使用10^(-7)mol/L雨蛙肽及10^(-5)mol/L MCU抑制剂钌红(RR)干预人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7)24 h,将细胞分为:Control组、雨蛙肽组、RR组、雨蛙肽+RR组。Western blot法检测细胞内MCU及CaM蛋白表达,荧光探针法检测细胞内游离Ca^(2+),免疫荧光双标法检测细胞内线粒体Ca^(2+),微丝染色法观察细胞微丝骨架结构。结果 雨蛙肽组与Control组比较,MCU及CaM蛋白表达、细胞质及线粒体内Ca^(2+)含量升高(P<0.05),细胞微丝骨架破坏;雨蛙肽+RR组与雨蛙肽组比较,MCU及CaM蛋白表达、胞质Ca^(2+)及线粒体内Ca^(2+)含量降低(P<0.05),细胞微丝骨架破坏减轻。结论 MCU相关钙超载可能通过激活CaM促进雨蛙肽诱导的胰腺导管上皮细胞微丝骨架的破坏。

雨蛙肽联合脂多糖诱导重度急性胰腺炎体外细胞模型钙通道的变化

目的应用雨蛙肽联合脂多糖诱导AR42J细胞构建重度急性胰腺炎体外细胞模型,研究该模型构建前后细胞内钙通道的变化。方法体外培养大鼠AR42J细胞,实验分组设对照组、雨蛙肽处理组、雨蛙肽+脂多糖处理组。采用RT-PCR检测细胞Cav1.3、Cav2.1、Cav2.2、Cav3.1、Cav3.2 mRNA表达;Western blotting检测细胞Cav1.3、Cav2.1、Cav3.1蛋白表达水平;以荧光探针Fluo-4-AM标记细胞内游离钙,激光共聚焦扫描显微镜观察[Ca2+]i的变化。结果药物处理组Cav1.3、Cav2.1、Cav3.1 mRNA及蛋白表达水平较对照组均明显增高(mRNA:F=23.392,46.85,61.338;蛋白:F=33.798,43.588,79.467;P<0.01),雨蛙肽+脂多糖处理组与雨蛙肽处理组相比较上述检测指标的mRNA表达量也显著增高(P<0.01);药物处理组与对照组Cav2.2、Cav3.2mRNA表达水平无明显差异(F=0.175、0.316;P>0.05);激光共聚焦显微镜观察结果显示药物处理组比对照组[Ca2+]i升高(F=638.984,P<0.01),雨蛙肽+脂多糖处理组较雨蛙肽处理组[Ca2+]i也显著升高(P<0.01)。结论胰腺腺泡细胞内钙超载在雨蛙肽联合脂多糖诱导的重度AP细胞模型发生发展的机制中具有重要作用。

PIAS1基因沉默对雨蛙肽诱导胰腺腺泡细胞凋亡的影响

活化STAT蛋白抑制物（PIAS）1基因沉默可增强雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞炎症反应.目的：探讨PIAS1基因沉默对雨蛙肽刺激胰腺腺泡细胞凋亡的影响.方法：AR42J胰腺腺泡细胞在LipofectamineTM 2000介导下转染PIAS1-siRNA和阴性siRNA.将细胞分为PIAS1-siRNA＋雨蛙肽组、阴性siRNA＋雨蛙肽组、脂质体＋雨蛙肽组、PBS＋雨蛙肽组和对照组.以DNA Ladder、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR和蛋白质印迹法检测p53、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白表达.结果：与其余各组相比,PIAS1-siRNA＋雨蛙肽组DNA梯度裂解条带明显增加,荧光着色阳性细胞数增多;G1期细胞数增多,S期细胞数减少,细胞凋亡率增加;p53、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调（P均〈0.05）.结论：PIAS1基因沉默可增强雨蛙肽活化的caspase-3凋亡途径诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,为通过调控PIAS1表达治疗急性胰腺炎提供新的理论依据.

p38 MAPK抑制剂SB203580对雨蛙肽诱导的小鼠胰腺组织损伤的影响

目的:探讨p38 MAPK抑制剂SB203580(SB)对雨蛙肽(caerulein,CAE)诱导的小鼠离体胰腺组织损伤的影响,并探讨其可能的机制。方法:分离小鼠离体胰腺组织后培养4 h,用CAE(10-5mol/L)刺激,加用或不加用SB(10-5mol/L)进行干预,以生理盐水(NS)作为对照。在刺激1 h和4 h后测定胰腺组织活力(MTT)、培养上清液中淀粉酶和脂肪酶活性(生化法)以及白细胞介素6(IL-6)和细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子1(CINC-1)的水平(ELISA法);同时测定胰腺组织中热休克蛋白60(HSP60)和HSP70蛋白水平(ELISA法),并用Westernblotting测定胰腺组织p38及磷酸化p38(p-p38)MAPK蛋白的表达。结果:CAE刺激后胰腺组织活力与NS组比较有所下降,尤其在刺激后4 h明显降低(P<0.05);CAE刺激后1 h,离体胰腺组织培养上清液中淀粉酶、脂肪酶、IL-6和CINC-1水平较NS组均明显升高(P<0.05);胰腺组织中HSP60、HSP70、p38及p-p38 MAPK蛋白的表达较NS组有所升高(P<0.05),而SB可不同程度干预CAE引起的这些指标的改变。结论:CAE对离体胰腺组织具有损伤作用,SB可减轻CAE造成的胰腺组织的损伤,其机制可能与其对p38 MAPK抑制进而使炎症反应受到抑制有关;HSP60和HSP70的变化是因为炎症反应减轻而使细胞应激程度降低所致,还是失去了p38 MAPK的调控作用所致,还有待进一步研究。

葡萄多酚对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎胰腺组织的保护作用

目的:研究葡萄多酚对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎(AP)的保护作用。方法:2月龄ICR雌鼠共21只,随机分为正常对照组(NC组)、AP模型组(AP组)和药物处理AP组,每组7只。造模前,药物处理AP组小鼠连续7 d胃内灌注葡萄多酚(1.5 g/kg)水溶液,NC组和AP组小鼠则以同法给予生理盐水作为对照。第7天开始造模。AP组以及药物处理AP组小鼠予以腹腔注射雨蛙肽(50μg/kg)造模,每小时1次,共注射7次;NC组小鼠同法注射等量生理盐水。于24 h处死小鼠取其胰腺及肺组织。测量各组胰腺组织的相对重量、病理形态学改变、巨噬细胞的浸润情况及炎症因子、氧化应激分子的表达水平;检测肺脏组织的髓过氧化物酶(MPO)活性以考察远隔器官的炎症。结果:与AP组小鼠相比,药物处理AP组小鼠胰腺组织的水肿、炎症以及空泡的评分明显降低(P<0.05),但坏死和病理总评分没有明显变化;巨噬细胞的浸润明显减少;肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平也明显降低(P<0.05);超氧化物歧化酶1(SOD-1)、SOD-2和NADPH氧化酶2(NOX-2)的表达水平也明显降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。此外,药物处理AP组小鼠肺组织的MPO活性显著降低(P<0.01),提示中性粒细胞的浸润减少。结论:葡萄多酚对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎胰腺组织具有明显保护作用,机制与下调炎症因子和氧化应激分子的表达有关。

棕榈酸对雨蛙肽诱导的大鼠胰腺腺泡细胞炎症早期基因表达谱的影响

背景：高三酰甘油血症是急性胰腺炎的发病原因之一。血浆中增多的游离脂肪酸(FFA)可损伤多种细胞,导致细胞功能障碍,可能在高三酰甘油血症性急性胰腺炎的发生、发展中起重要作用。目的：探讨饮食中的主要FFA棕榈酸对雨蛙肽诱导的大鼠胰腺腺泡细胞炎症早期基因表达谱的影响。方法：以胶原酶消化法分离大鼠胰腺腺泡细胞,将细胞分为3组,雨蛙肽组加入终浓度为100 nmol/L的雨蛙肽．雨蛙肽+棕榈酸组加入相同剂量的雨蛙肽和终浓度为1 mmol/L的棕榈酸,正常对照组不予处理。培养3h后提取细胞总RNA,应用含15000余条大鼠基因的大鼠Affymetrix 230A基因芯片检测基因表达谱的变化。结果：雨蛙肽+棕榈酸组较雨蛙肽组出现30条上调基因和15条下调基因,其功能涉及细胞信号转导、转录、脂质代谢、蛋白修饰等不同层次。结论：棕榈酸可能通过影响大鼠炎症胰腺腺泡细胞多种结构和功能基因的表达而加重其损伤。

miR-181a-5p靶向PIAS1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)引起的急性炎症对人们健康的危害性极大,严重时会危及生命.其发病机制复杂,尚未完全清楚,研究发现miRNA参与了AP的发病过程.研究发现miR-181a-5p可抑制癌细胞迁移、侵袭和血管生成;miR-181a-5p还能抑制胃癌细胞增殖、侵袭,转移和上皮间充质转化.抑制miR-181a-5p表达可通过负向靶向INPP5A抑制细胞增殖和侵袭,增强宫颈癌细胞凋亡.miR-181a可抑制胰腺癌细胞系的生长、减少迁移,增加凋亡.但miR-181a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-181a-5p对AP腺泡细胞损伤的影响及潜在的作用机制.方法用100 nmol/L的雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡AR42J和MPC-83构建AP模型,设置Con组、Caerulein组、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-181a-5p组(转染miR-181a-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Caerulein+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p后进行Caerulein处)、Caerulein+pcDNA组(转染pcDNA后进行Caerulein处理)、Caerulein+pcDNA-PIAS1组(转染pcDNA-PIAS1后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+si-NC组(anti-miR-181a-5p和si-NC共转染后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+si-PIAS1组(anti-miR-181a-5p和si-PIAS1共转染后进行Caerulein处理),用脂质体法转染至AR42J和MPC-83细胞.酶联免疫吸附试验法检测雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的TNF-α和IL-6的表达;qRT-PCR检测AR42J和MPC-83细胞中miR-181a-5p、PIAS1 mRNA的表达水平;Western Blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞后,TNF-α和IL-6的表达显著升高;miR-181a-5p的表达水平显著升高;PIAS1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低.miR-181a-5p抑制表达和PIAS1过表达抑制TNF-α和IL-6的表达,抑制细胞凋亡.miR-181a-5p靶向负调控PIAS1;抑制PIAS1表达逆转了抑制miR-181a-5p对雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的凋亡抑制作用.结论抑制miR-181a-5p表达可以抑制雨蛙肽诱导的AP腺泡细胞损伤,其机制可能与靶向调控PIAS1有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.

热休克蛋白A5对雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞损伤的作用研究

目的探讨热休克蛋白A5(HSPA5)对雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞损伤的作用。方法分别用高浓度(1×10^-5 mol/L)、低浓度(1×10^-11 mol/L)的雨蛙肽建立胰腺腺泡细胞损伤模型。分别将pcDNA3.1-HSPA5、pcDNA3.1、shHSPA5和shCon以脂质体法转染胰腺腺泡AR42J细胞,用qRT-PCR法检测细胞中HSPA5 mRNA的表达,MTT法检测细胞活力,Western blot检测细胞中HSPA5的蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,高浓度和低浓度的雨蛙肽均能造成胰腺腺泡细胞损伤,且HSPA5在其中高表达。敲减HSPA5可加重胰腺腺泡细胞的损伤,过表达HSPA5可减轻胰腺腺泡细胞损伤,还可以逆转雨蛙肽对胰腺腺泡细胞的损伤作用。结论 HSPA5可修复雨蛙肽对胰腺腺泡细胞的损伤,这将为胰腺炎的治疗提供新方向。

β-Catenin在雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞凋亡中的作用

目的:研究β-连环蛋白(β-catenin)在雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞凋亡中的作用及机制。方法:用雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,real-time PCR和Western blot检测细胞中β-catenin的mRNA和蛋白表达变化。在AR42J细胞中转染β-catenin过表达载体,用雨蛙肽处理后,用real-time PCR和Western blot测定过表达效果,MTT法测定细胞活力的变化,二硝基苯肼法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,碘-淀粉比色法检测淀粉酶(AMY)漏出率,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot检测细胞中内质网应激相关蛋白CHOP和cleaved caspase-12的蛋白水平。结果:AR42J细胞经雨蛙肽处理后细胞中β-catenin的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05)。β-Catenin过表达载体转染可明显提高雨蛙肽作用下胰腺腺泡细胞中β-catenin的表达水平。雨蛙肽处理后的AR42J细胞活力降低,LDH和AMY漏出率升高,细胞凋亡率及细胞中CHOP和cleaved caspase-12的蛋白水平升高(P<0.05)。过表达β-catenin可以提高雨蛙肽处理后的AR42J细胞活力,降低LDH和AMY漏出率,减少细胞凋亡,降低细胞中CHOP和cleaved caspase-12的蛋白水平(P<0.05)。结论:β-Catenin可明显抑制雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,作用机制与减少内质网应激有关。

迷走神经在雨蛙肽抑制胃电和胃运动中的作用

用乌拉坦麻醉的大鼠,研究了迷走神经在雨蛙肽抑制胃电和胃运动中的作用。结果发现,(1)雨蛙肽抑制在体胃电和胃运动,这些效应被切断双侧迷走神经所消除。(2)雨蛙肽使迷走神经胃前枝的传出冲动减少。(3)雨蛙肽可使离体胃电和胃运动亢进。结果提示,雨蛙肽对在体胃电和胃运动有兴奋和抑制二种作用,后者处于优势,其抑制效应是通过迷走神经出现的。

皮下注射雨蛙肽对大鼠应激性胃粘膜损伤的影响

探讨皮下注射雨蛙肽对束缚-浸水引起的大鼠应激性胃粘膜损伤的影响及其机理。结果:①皮下注射雨蛙肽,可明显地减轻大鼠应激性胃粘膜损伤,并在一定的剂量范围内呈现量效关系;②预先皮下注射消炎痛(5mg/kg),可阻断雨蛙肽的抗胃粘膜损伤作用;③皮下注射雨蛙肽,可降低应激大鼠胃粘膜中丙二醛的含量;④电镜观察结果,皮下注射雨蛙肽能抑制应激大鼠胃粘膜壁细胞胃酸分泌的增加。结果表明,雨蛙肽的抗胃粘膜损伤作用可能由内源性前列腺素所中介,并与其清除自由基有关,还通过抑制应激大鼠的胃酸分泌而实现。

小鼠对雨蛙肽诱发急性胰腺炎易感性的品系差异

目的:小鼠是常用于胰腺炎研究的模式动物。然而不同品系的小鼠似乎对胰腺炎有着不同的易感性,但缺乏系统的对比研究。我们因此比较了C57BL/6J、BALB/c和ICR小鼠对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎易感性的差异。方法:2月龄C57BL/6J、BALB/c和ICR雌鼠各12只,随机分为实验组(n=6)和对照组(n=6)。实验组予以腹腔注射雨蛙肽(50μg/kg),每小时1次,共注射7次;对照组同法注射等量生理盐水。分别于第1次注射后的0、3、6、9、12、24 h取小鼠血浆,并于24 h处死小鼠取其胰腺组织。测定各组小鼠的血浆淀粉酶和脂肪酶活性;观察其胰腺组织的病理形态学改变程度及炎症因子表达水平。结果:雨蛙肽诱导胰腺炎后,BALB/c和ICR小鼠的血浆淀粉酶和脂肪酶水平较C57BL/6J小鼠升高更为显著;C57BL/6J小鼠与其它2种品系的小鼠相比,其胰腺病理形态学改变程度较轻,胰腺组织炎症因子表达水平也较低。结论:BALB/c和ICR小鼠对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎的敏感性比C57BL/6J小鼠高。这一结果对急性胰腺炎研究中小鼠品系的合理选择具有指导意义。

表皮生长因子对雨蛙肽联合应激诱导的大鼠急性出血性胰腺炎的保护作用

表皮生长因子(EGF)是参与细胞增殖、成熟和再生的主要因子。目前已证实其对胃肠道黏膜具有保护作用,能促进溃疡愈合,但是罕见关于EGF在急性出血性胰腺炎中作用的报道。目的:观察外源性EGF对雨蛙肽联合应激诱导的大鼠急性出血性胰腺炎的保护作用。方法:予雄性Sprague鄄Dawley大鼠腹腔内注射雨蛙肽(40μg/kg,两次注射间隔1h)联合水浸束缚应激(第一次注射雨蛙肽后开始,持续5h)诱导急性出血性胰腺炎。EGF治疗组第一次注射雨蛙肽之前0.5h和之后2.5h,分别皮下注射EGF1、10或30μg/kg。观察各组动物胰腺炎生化、病理学等指标的变化。结果:制模开始后12h,对照组的胰腺湿重为4.24g/kg±0.68g/kg,血清淀粉酶含量为4325U/L±822U/L,胰腺组织DNA和淀粉酶含量分别为1577μg/g±433μg/g和21.39U/mg蛋白±6.83U/mg蛋白,各病理学指标评分均为0。胰腺炎组的胰腺湿重(10.49g/kg±1.87g/kg)和血清淀粉酶含量(24433U/L±16751U/L)较对照组显著增高(P<0.01),胰腺组织DNA(561μg/g±278μg/g)和淀粉酶含量(16.95U/mg蛋白±5.01U/mg蛋白)则降低,病理学评分显著增高(P<0.01)。10μg/kgEGF能显著降低胰腺湿重(6.47g/kg±2.64g/kg,P<0.01)和血清淀粉酶含量(9010U/L±3983U/L,P<0.05),提高胰腺组织淀粉酶含量(23.92U/mg蛋白±8.

lncRNA GAS5对雨蛙肽体外诱导急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响及机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)生长阻滞特异性转录因子5(GAS5)对雨蛙肽(caerulein)诱导的急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响及机制。方法取对数生长期胰腺腺泡细胞AR42J,分为Control组(正常培养)、Caerulein组(caerulein诱导)、Caerulein+Vector组(转染阴性对照载体,caerulein诱导)及Caerulein+GAS5组(转染GAS5过表达对照载体,caerulein诱导),Caerulein+GAS5+miR-NC组(转染GAS5过表达对照载体、mimics control,caerulein诱导)及Caerulein+GAS5+miR-135a组(转染GAS5过表达对照载体、miR-135a mimics,caerulein诱导),分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验、实时聚合酶链反应(Realtime PCR)、流式细胞术及Western blot检测各组细胞增殖、miR-135a表达、细胞凋亡水平及剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(C-Caspase-3)、C-Caspase-9表达;将miR-135a mimics(miR-135a组)、mimics control(miR-NC组)和含GAS5结合位点的野生型萤光素酶报告载体(WT,WT组)、含突变以后GAS5结合位点的突变型萤光素酶报告载体(MUT,MUT组)共转染至胰腺腺泡细胞,采用萤光素酶活性测定试剂盒分析各组胰腺炎腺泡细胞萤光素酶活性变化。结果与Control组比较,Caerulein组胰腺腺泡细胞存活率降低、凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与Caerulein+Vector组比较,Caerulein+GAS5组caerulein诱导的胰腺腺泡细胞的存活率升高、凋亡率降低,C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与Caerulein+GAS5+miR-NC组比较,Caerulein+GAS5+miR-135a组胰腺腺泡细胞存活率降低、凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.001);与miR-NC+WT组比较,miR-135a+WT组细胞萤光素酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-NC+MUT组比较,miR-135a+MUT组细胞萤光素酶活性无变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达lncRNA GAS5可减少caerulein诱导的急性胰腺炎腺泡细胞凋亡,其机制可能与下调miR-135a表达有关。

亚低温对雨蛙肽致大鼠胰腺腺泡细胞损伤的保护作用

目的观察亚低温对雨蛙肽刺激大鼠胰腺腺泡细胞的保护作用,并探讨其机制。方法取大鼠胰腺组织块,分为常温对照组、亚低温对照组、常温雨蛙肽组和亚低温雨蛙肽组。分别测定不同时间点(15、30、60、90min)上清液中淀粉酶、脂肪酶和组织匀浆液中胰蛋白酶活性、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率及胰腺腺泡细胞内钙离子([Ca^(2+)]i)浓度,并测定1、3、5 h的胰腺细胞存活率。结果与常温雨蛙肽组比较,30、60和90 min时亚低温雨蛙肽组的淀粉酶和脂肪酶均显著降低(P值分别<0.05、0.01),15和30 min时胰蛋白酶活性显著降低(P值分别<0.05、0.01),60和90 min时LDH漏出率显著降低(P值分别<0.05、0.01),30、60和90 min时胰腺腺泡细胞内[Ca^(2+)]i浓度显著降低(P值分别<0.05、0.01),3和5 h时胰腺细胞存活率显著升高(P值均<0.05)。结论亚低温对雨蛙肽刺激的胰腺腺泡细胞具有保护作用,其机制可能与抑制胰蛋白酶原激活、减轻细胞内钙超载有关。

miR-423-5p靶向水通道蛋白1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎AR42J细胞损伤的影响

目的:研究miR-423-5p对雨蛙肽诱导的胰腺AR42J细胞损伤的影响及其分子作用机制。方法:通过雨蛙肽处理AR42J细胞建立胰腺炎损伤模型,qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-423-5p的表达,Western blot检测水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达,ELISA法检测培养上清中IL-6和TNF-α的分泌水平,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-423-5p与AQP1间的调控关系。结果:在雨蛙肽诱导的AR42J细胞中miR-423-5p表达上调,AQP1表达下调;抑制miR-423-5p和过表达AQP1均可减轻雨蛙肽诱导的AR42J细胞损伤,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示miR-423-5p靶向负调控AQP1的表达;抑制AQP1逆转了抑制miR-423-5p对雨蛙肽诱导的胰腺AR42J细胞损伤的作用。结论:miR-423-5p通过靶向AQP1减轻雨蛙肽诱导的胰腺AR42J细胞损伤,抑制细胞凋亡。

侧脑室注射雨蛙肽对应激性胃粘膜损伤的影响

本工作研究了向侧脑室注射雨蛙肽对束缚四肢再浸水引起大鼠应激性胃粘膜损伤的影响及机制。侧脑室注射雨蛙肽(1.0ng/rat)可显著减轻胃粘膜损伤,抑制胃酸分泌,促进胃壁结合粘液分泌并使胃液中PGE_2含量增加。电镜观察可见胃壁细胞分泌增强。预先侧脑室注射纳洛酮或皮下注射消炎痛可消除雨蛙肽抗胃粘膜损伤和抑制胃酸分泌的效应,但对胃壁结合粘液分泌无影响。侧脑室注射阿托品、酚妥拉明、心得安不影响雨蛙肽的抗损伤作用。上述结果提示:注射到侧脑室的雨蛙肽的抗胃粘膜损伤作用,部分是通过中枢的吗啡受体和促进内源性PGE_2合成而实现的。

侧脑室微量注射雨蛙肽对大鼠应激性胃粘膜损伤的影响

观察了向大鼠侧脑室微量注射雨蛙肽对由束缚浸水引起的大鼠应激性胃粘膜损伤的影响,并初步探讨了其作用机理。结果表明,侧脑室注射一定剂量的雨蛙肽(1.0～4.0ng)有明显的抗应激性胃粘膜损伤作用,这种作用可被预先侧脑室注射纳络酮所阻断,而预先侧脑室注射酚妥拉明、心得安及阿托品对雨蛙肽的作用无影响。提示,在雨蛙肽的抗应激性胃粘膜损伤作用中有中枢的吗啡受体参与。

侧脑室内微量注射雨蛙肽对大鼠胃液分泌及胃液中前列腺素E_2含量的影响

观察了向侧脑室内注射雨蛙肤(1ng/鼠)对大鼠胃液分泌及胃液中前列腺素(PG)E_2含量的影响。实验结果表明:(1)侧脑室内注射雨蛙肽,明显地抑制大鼠胃酸的分泌,同时促进胃壁结合粘液的分泌,而对胃蛋白酶的活性则无明显影响;(2)雨蛙肽在中枢抑制胃酸分泌的作用,可被预先侧脑室内注射纳络酮所阻断,而雨蛙肽促进胃壁结合粘液分泌的作用则不受纳络酮影响;(3)侧脑室内注射雨蛙肽可明显增加胃液中PGE_2的含量。结果提示,雨蛙肽在中枢可能通过吗啡受体抑制胃酸分泌。雨蛙肽促进胃壁结合粘液分泌的作用则与吗啡受体关系不大。

吡格列酮预处理对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡的影响

目的 研究吡格列酮预处理对雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞（AR42J细胞）凋亡的影响.方法 AR42J细胞分为空白对照组（常规培养）、吡格列酮组（40 μmol/L）、雨蛙肽组（1×10-8 mol/L）、吡格列酮＋雨蛙肽组（40 μmol/L吡格列酮＋1×10-8 mol/L雨蛙肽）、吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组（40 μmol/L吡格列酮＋5 μmol/L GW9662＋1×10-8 mol/L雨蛙肽）.吡格列酮、GW9662早于雨蛙肽30 min加入.在实验的3、6、12和24 h采用MTT法检测各组细胞的增殖率,采用异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞凋亡率,脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸（dUTP）缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡,检测各组半胱天冬酶（caspase）-3、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9的活性,采用JC-1染色流式细胞术检测细胞的线粒体膜电位.采用单因素方差分析和LSD检验分析数据.结果 作用6、12、24 h时吡格列酮组和吡格列酮＋雨蛙肽组细胞的增殖活性分别为0.19±0.02、0.22±0.02、0.36±0.02和0.20±0.04、0.23±0.02、0.38±0.02,分别明显低于空白对照组（0.25±0.04、0.28±0.03、0.46±0.02,t=-3.16、-4.61、-6.25）和雨蛙肽组（0.23±0.02、0.29±0.01、0.46±0.05,t=-1.58、-4.61、-6.15,P均＜0.05）,吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组细胞增殖活性（0.23±0.02、0.27±0.02、0.45±0.01）高于吡格列酮＋雨蛙肽组（t=2.25、3.87、4.56,P均＜0.05）.作用6、12、24 h后,异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶染色流式细胞术发现吡格列酮组和吡格列酮＋雨蛙肽组细胞的凋亡率分别为（11.80±0.47）％、（9.62±2.63）％、（14.92±2.52）％和（8.78±0.47）％、（11.89±2.80）％、（14.25±2.67）％,两组间差异均无统计学意义（P均＞0.05）,但这两组分别明显高于空白对照组的（5.52±0.64）％、（5.30±0.97）％、（5.47±0.88）％和雨蛙肽组的（5.98±1.21）％、（7.47±0.58）％、（8.11±1.32）％,差异均有统计学意义（t照组=9.81、4.45、10.74,t蛙肽组=4.38、7.62、6.98,P均＜0.05）;吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组细胞的凋亡率[（5.82±0.26）％、（6.05±0.83）％、（9.23±0.90）％]与雨蛙肽组无明显差异,与吡格列酮＋雨蛙肽组相比明显降低（t=-4.63、-10.07、-5.70,P均＜0.05）.作用12h时TUNEL染色发现,吡格列酮组的凋亡率[（3.93±0.40）％]明显高于空白对照组[（2.73±0.68）％],吡格列酮＋雨蛙肽组细胞凋亡率[（8.43±1.65）％]明显高于雨蛙肽组[（2.80±0.56）％],吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组细胞凋亡率[（3.87±0.35）％]低于吡格列酮＋雨蛙肽组（t=7.93、8.92、-5.35,P均＜0.05）.作用24 h时吡格列酮＋雨蛙肽组细胞的半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9活性（1.28±0.05、1.38±0.04、1.53±0.09）与雨蛙肽组（1.12±0.88、1.22±0.02、0.53±0.07）相比显著升高（t=3.20、8.62、1.29,P均＜0.05）,经GW9662干预后,半胱天冬酶类的活性部分恢复.吡格列酮组、吡格列酮＋雨蛙肽组线粒体膜电位改变细胞数目明显多于雨蛙肽处理组[（28.50±0.91）％、（28.20±2.56）％比（15.00±3.67）％,t=8.10、10.02,P均＜0.05],而加入GW9662可使膜电位部分恢复[（20.67±2.20）％].结论 吡格列酮可能通过激活半胱天冬酶的活性,改变细胞膜电位促进AR42J细胞的凋亡,而其拮抗剂GW9662能部分抑制吡格列酮的促凋亡功能.