HPLC法测定雪地茶中鳞片衣酸和羊角衣酸的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定雪地茶中2种缩酚酸(鳞片衣酸、羊角衣酸)含量的方法。方法:采用Eclipse XDB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈(A)-0.075%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~40 min,35%A→55%A;40~41 min,55%A→100%A;41~49 min,100%A;49~60 min,100%A→35%A),流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长213 nm,柱温40℃,进样量10μL。结果:鳞片衣酸在0.15~0.55 mg·mL^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=1),方法的平均回收率为94.15%,RSD为0.21%(n=6)。羊角衣酸在0.05~0.55 mg·mL^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=0.9997),方法的平均回收率为97.83%,RSD为0.16%(n=6)。结论:建立的该含量测定方法结果准确,重复性和分离度好,可用于同时测定雪地茶中两种缩酚酸的含量,为雪地茶药材的质量控制提供了科学依据,对其质量标准的建立具有一定的参考意义。

雪地茶内生真菌Apiospora malaysiana体外抑菌活性及稳定性研究

为探究雪地茶内生真菌Apiospora malaysiana抗菌药物开发潜力,本研究在对比6种常用体外抑菌活性测定方法效果后,进一步确定Apiospora malaysiana对常见致病微生物的抗菌谱。以敏感性最强的金黄色葡萄球菌为指示菌,探究保存时间、温度、紫外照射时长、pH等因素对Apiospora malaysiana体外抑菌活性稳定性的影响。结果表明,使用三种抑制细菌检测方法(平板打孔法、滤纸片法和牛津杯法)对Apiospora malaysiana体外抑菌活性检测结果并的影响无显著性差异(P>0.05),但三种抑制真菌方法的结果显示,菌丝生长速率法最优(抑制率100%),平板对峙法的效果远低于前者(抑制率只有24.0%),而滤纸圆片扩散法则无抑制效果。体外抑菌试验结果表明Apiospora malaysiana对多种革兰氏阳性菌和致病真菌有较强的抑制作用,其中金黄色葡萄球菌对其敏感性最强(抑菌圈直径18.3 mm,高度敏感),此外,Apiospora malaysiana对致病真菌如耐药型白色念珠菌(高度敏感)、灰葡萄孢、立枯丝核菌(抑制率100%)也具有较强的抑菌活性。抑菌稳定性试验结果表明,不同保存时间、温度、紫外照射时间对Apiospora malaysiana的体外抑菌活性均无显著影响(P>0.05),但pH对其抑菌活性影响较大(P<0.05),当pH低于其提取物本底pH(5.5)时,抑菌圈直径降低,当pH调整至高于其提取物本底pH时,Apiospora malaysiana体外抑菌活性消失。本试验结果表明雪地茶内生真菌Apiospora malaysiana具有广泛、良好的抑菌活性,且在常规条件下其体外抑菌稳定性较强,有进一步开发为抗生素及食品保鲜剂的潜力。

雪地茶成分清除氧自由基作用的测定

采用邻苯三酚自氧化法，对雪地茶提取物清除Ｏ２作用进行测定。结果表明：水提液对Ｏ２有较强的清除能力，乙醇及氯仿提取物的清除能力与对照品芦丁相当，雪地茶多糖精品无清除能力。

雪地茶甲醇提取物体外抑菌活性及其稳定性研究

为初步探究雪地茶体外抑菌活性及其稳定性,采用平板打孔法测定雪地茶甲醇提取物对常见致病菌的体外抑菌活性,以金黄色葡萄球菌作为指示菌,测定不同温度、pH、紫外照射时间等因素对抑菌稳定性的影响,使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分级萃取甲醇提取物,确定其抑菌活性物质的极性,并测定其松萝酸含量。结果表明雪地茶甲醇提取物对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、斯氏李斯特菌、表面葡萄球菌、伊氏李斯特氏菌,革兰氏阴性菌如甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌以及致病真菌白色念珠菌等具有良好的抑菌效果。其中,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为0.625、10 mg/mL;抑菌稳定性实验结果表明,温度对雪地茶甲醇提取物的抑菌活性无显著影响(P>0.05),100℃处理30 min后仍具有较高的抑菌活性;紫外光照射40 min及50 min的处理组抑菌活性显著下降(P<0.05),但抑菌率仍保持在90%以上;pH对雪地茶甲醇提取物的抑菌稳定性影响最大,当pH接近生理中性时(pH=6.0),其抑菌活性与对照组(pH=4.83)无显著差异(P>0.05),表现出较高抑菌活性,当pH较高(8.0、10.0)或较低(2.0、4.0)时,处理组的抑菌活性极显著下降(P<0.05),且随着pH的升高或降低而降低;雪地茶甲醇提取物中松萝酸含量为0.8613%,乙酸乙酯萃取物中松萝酸含量为0.9379%。本实验结果证实雪地茶甲醇提取物具有一定的广谱抑菌效果且作用浓度较低,稳定性较好,可用于天然食品防腐剂和植源性抑菌药物的开发利用。

HPLC法测定雪地茶中松萝酸

目的测定雪地茶中松萝酸的量,为雪地茶的质量标准建立提供参考。方法采用高效液相色谱分析,Sepax Sapphire C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);甲醇-(50mmol磷酸二氢钾-三乙胺缓冲液500:1)(70:30)为流动相,检测波长285nm。结果测定了5批雪地茶中松萝酸的量,质量分数0.74%～0.91%。松萝酸在3.23～103.20μg/mL呈良好线性关系,r=0.9998;3个质量浓度平均回收率分别为95.98%、96.37%和100.30%;RSD分别为1.9%、1.1%、1.1%。结论本方法操作简便,结果稳定可靠,可用于雪地茶的质量评价。