雪松松针多糖的醇沉、脱蛋白工艺及抗氧化活性研究

对雪松松针多糖的醇沉、脱蛋白工艺及其体外抗氧化活性进行研究。在单因素试验基础上,利用Box-Behnken模型对提取液浓缩比、乙醇体积分数和醇沉时间进行优化,比较多糖得率确定最佳雪松松针多糖醇沉工艺条件。以蛋白质清除率和多糖损失率为指标,比较了Sevage法和三氯醋酸(TCA)法的脱蛋白效果,并对试剂用量、脱蛋白次数进行了考察,然后利用DPPH和ABTS自由基法对纯化后多糖的抗氧化活性进行评价。研究结果表明:优化的雪松松针多糖一级醇沉条件为粗提液体积和松针干质量的比例(浓缩比)为3∶1(mL∶g,下同),乙醇体积分数为71%,醇沉温度为40℃,醇沉时间为10 h,在此条件下,雪松松针多糖得率为3.81%,结果与预测值接近。收集多糖后的上清液再按浓缩比1∶1浓缩,筛选得到二级醇沉的乙醇体积分数为80%。Sevage法脱蛋白效率优于TCA法,其最佳条件为Sevage试剂与多糖溶液的体积比为1∶1,脱除蛋白次数为3次,经UV法测得脱蛋白后的一级、二级醇沉多糖(以葡萄糖折算)质量分数分别为35.36%和36.62%。清除DPPH与ABTS自由基能力依次为Vc>二级醇沉多糖>BHT>一级醇沉多糖,纯化后的雪松松针80%醇沉多糖表现出良好的抗氧化活性。

雪松松针化学成分研究

目的:研究雪松松针的化学成分。方法:利用硅胶柱色谱及Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离、纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果:从雪松松针石油醚和正丁醇萃取部位分离得到8个化合物,分别为:9-羟基-十二烷酸(Ⅰ)、十二烷酸乙酯(Ⅱ)、十八烷酸乙酯(Ⅲ)、3β-羟基-齐墩果酸甲酯(Ⅳ)、β-谷甾醇(Ⅴ)、莽草酸(Ⅵ)、甲基松柏苷(Ⅶ)、阿魏酸-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅷ)。结论:化合物Ⅰ～Ⅳ、Ⅵ～Ⅷ为首次从该属植物中分离得到,化合物Ⅴ为首次从该植物针叶中分离得到。

水提法提取雪松松针多糖

对水提法提取雪松松针多糖的提取条件进行研究。以雪松松针为原料,雪松多糖提取得率为指标,分别从对它有影响的4个单因素(提取温度、料液比、提取时间、pH)进行探讨;然后对上述4个因素采用L(934)正交试验进行优化,得出结论雪松松针多糖提取的最佳提取条件为:提取时间、料液比、温度和pH值分别为4h、1∶30、90℃和6.0,在此条件下的得率为4.907%。而正交试验的方差分析表明最佳组合为A3B3C3D1,即最佳提取时间为4h,料液比为1∶30,温度为100℃,pH为6.0。

雪松松针二氯甲烷提取物的化学成分研究

目的:研究雪松Cedrus deodara松针二氯甲烷提取物的化学成分。方法:采用硅胶和Sephadex LH-20等柱色谱方法对其化学成分进行分离和纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定结构。结果:从雪松松针95%乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位分离得到9个化合物,分别鉴定为:豆甾醇(1)、齐墩果酸(2)、对羟基苯甲醛(3)、β-谷甾醇(4)、丁香脂素(5)、胡萝卜苷(6)、对羟基苯甲酸(7)、没食子酸甲酯(8)、没食子酸(9)。结论:除了化合物4外,其余8个化合物均为首次从该属植物针叶中分离得到。

雪松松针化学成分研究(Ⅱ)

目的:研究雪松松针的化学成分。方法:利用硅胶柱层析及Sephadex LH-20凝胶等色谱技术分离、纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果:从雪松松针95%乙醇提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为:二十九烷醇-10(1)、邻苯二甲酸二丁酯(2)、原儿茶酸(3)、邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯(4)、(E)-1-O-对香豆酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、5-p-trans-coumaroylguinic acid(6)。结论:化合物1～6均为首次从该属植物中分离得到。

雪松松针总皂苷的超声提取工艺优选及体外抗肿瘤活性研究

目的:优选雪松松针总皂苷的超声提取工艺,并考察其体外抗肿瘤活性。方法:采用紫外分光光度法测定雪松松针总皂苷的含量。在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、液料比、提取时间为因素,根据Box-Behnken设计进行试验,以雪松松针总皂苷含量为响应值进行响应面分析,对雪松松针总皂苷的超声提取工艺进行优化。考察所制雪松松针总皂苷对人肺癌A549细胞、人肝癌Hep G2细胞和人胃癌MKN45细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果:优选工艺为乙醇体积分数73%,液料比13∶1,提取2次、每次65 min;以此工艺所得雪松松针总皂苷平均含量为6.693 mg/g,与预测值6.508 mg/g的相对误差为2.84%。雪松松针总皂苷对A549、Hep G2、MKN45细胞的增殖均有抑制作用,且呈明显的浓度依赖性,IC_(50)分别为(63.98±6.79)、(154.91±10.20)、(176.32±14.26)μg/ml。结论:优选的雪松松针总皂苷的超声提取工艺合理、可行;其对A549、Hep G2、MKN45细胞增殖均有一定的抑制作用,其中对A549细胞作用最为明显。

雪松松针的化学成分及药理作用研究概述

松针（Pine needle）系松科（Pinaceae）松属（Pinus）植物的叶,别名猪鬃松叶、松毛,始载于《名医别录》列为上品,历代本草中均有记载,明代李时珍《本草纲目》云：＂松针,气味苦、温、无毒,久服令人不老,轻身益气,主风湿疮,生毛发,安五脏,守中,不饥延年＂。雪松是松科Pianaceae雪松属CedrusTrew植物的统称,该属共有4种,大西洋雪松（C.atlantica）、短叶雪松（C.brevifolia）、喜马拉雅雪松（C.deodara）和黎巴嫩雪松（C.libani）,均为高大乔木,原产于地中海。

雪松松针总多酚的纯化工艺和抗氧化活性研究

通过吸附-解吸附能力考察，从树脂NKA-9、S-8、AB-8、D101、HPD-100及HPD-600中筛选出适合纯化雪松松针总多酚的大孔树脂，并确定纯化工艺参数。结果表明，HPD-600树脂为纯化雪松松针总多酚的优良材料；最佳纯化工艺为：上样量为8BV、浓度1．5mg／mL、pH4．0—5．0，以2BV／h流速进行动态吸附；以10BV／h流速的6BV蒸馏水冲洗除杂后，用3BV的70％乙醇以4BV／h的流速进行解吸。在此条件下，多酚的纯度由9．88％提高到34．56％，约为纯化前的3．5倍。利用DPPH和ABTS自由基法对纯化前后雪松松针总多酚的抗氧化活性进行了比较，结果显示，清除DPPH和ABTS自由基能力依次为Vc〉纯化后的总多酚提取物〉BHT〉纯化前的总多酚提取物。通过测定纯化后雪松松针总多酚对野生型秀丽隐杆线虫体内活性氧的水平评价其体内抗氧化能力，结果显示，雪松松针总多酚降低了线虫体内的活性氧水平，10μg／mL雪松松针总多酚提取物溶液与4000μM／L的Vc对线虫的体内抗氧化能力相当，表现出良好的抗氧化活性。

响应面法优化雪松松针中总多酚的超声提取工艺

目的:优化雪松松针总多酚的超声提取工艺。方法:以总多酚提取率为指标,在单因素试验基础上,通过响应面法对影响雪松松针总多酚提取工艺的主要因素(乙醇浓度、提取时间、液料比)进行优化。结果:超声提取雪松松针中总多酚的最佳工艺为:55%乙醇,料液比1∶20(g/m L),超声提取65 min,提取次数为2次;在此最佳工艺下,总多酚提取率为5.460%。结论:优选出的最佳工艺条件经验证,结果与模型预测值相符。

雪松松针中莽草酸和多糖的提取工艺研究

目的:优选雪松松针中莽草酸和多糖的提取工艺。方法:采用正交试验法,以雪松松针中莽草酸和多糖的含量为评价指标,以溶剂用量、提取时间和提取次数为考察因素,通过综合评分法优选最佳的提取工艺。结果:雪松松针中莽草酸和多糖的最佳提取工艺为:首次提取加入13倍量水,第二次提取加10倍量水,回流提取,每次2h。在最佳的提取工艺下,莽草酸的含量为41.225 mg/g,多糖的含量为39.220 mg/g。结论:优选的提取工艺稳定、可行,适用于提取雪松松针中莽草酸和多糖的中试生产。

雪松松针二氯甲烷提取物的化学成分研究(Ⅱ)

目的:研究雪松松针二氯甲烷提取物的化学成分。方法:利用硅胶及Sephadex LH-20柱色谱分离、纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果:从雪松松针二氯甲烷提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为:阿魏酸(1)、蛇床子素(2)、β-苯丙烯酸(3)、丹皮酚(4)、β-谷甾醇(5)、厚朴酚(6)、和厚朴酚(7)。结论:除化合物5外均为首次从该植物中分离得到。

酸水解雪松松针总黄酮制备杨梅素工艺的优化

目的优化酸水解雪松松针总黄酮制备杨梅素的工艺。方法选用50%甲醇-盐酸作为水解体系,考察盐酸质量分数、料液比、水解时间对雪松松针总黄酮水解过程的影响。在单因素试验的基础上,采用响应面试验优选酸水解工艺。结果各因素影响程度依次是料液比>水解时间>盐酸质量分数,酸水解最佳工艺为盐酸质量分数3. 7%,料液比1∶330,水解时间1. 2 h。在此工艺条件下水解得到的杨梅素平均含有量为0. 247 6%,与预测值0. 242 8%非常接近,RSD为1. 94%。结论该方法简便、稳定、可行,可用于雪松松针总黄酮中杨梅素的酸水解。

雪松松针中槲皮素、山柰酚与异鼠李素质量控制方法的研究

[目的]建立高效液相色谱,测定雪松松针中黄酮醇苷元槲皮素、山柰酚与异鼠李素的含量,用于雪松松针及其松针制剂中黄酮成分的质量控制。[方法]2011年3月1日与4月15日分别采摘雪松松针,用甲醇连续提取,盐酸水解提取液,采用HPLC法测定。色谱柱:Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.4%磷酸-甲醇(50∶50);流速:1.0 ml/min;检测波长:360 nm;进样量10μl.[结果]该方法加样回收率槲皮素、山柰酚、异鼠李素分别为96.8%(RSD=1.2%)、95.1%(RSD=1.5%)、95.3%(RSD=1.8%),3月1日采摘的雪松松针中槲皮素、山柰酚与异鼠李素平均含量(3.8、2.9、1.6 mg/g)高于与4月15日平均含量(3.0、1.9、1.2 mg/g)。[结论]雪松松针中槲皮素、山柰酚与异鼠李素含量测定方法的建立,为松针及其制剂质量控制提供了切实可行的方法,也为更有效地利用现有松针资源提供理论依据。

雪松松针中莽草酸的纯化方法研究

为建立莽草酸的纯化方法,以莽草酸的含量为指标,对雪松松针水提液的醇沉、大孔吸附树脂单用或与不同柱层析合用的纯化方法进行了探索。最终确定的莽草酸的纯化工艺流程为:提取-醇沉-柱层析-重结晶,其中醇沉法可以将莽草酸的含量由12.69%提升到20.08%,大孔吸附树脂柱层析法单用可以将莽草酸的含量由20.08%提升到35.73%,回收率均超过95%;大孔吸附树脂柱结合硅胶柱层析法可得到纯度为80.05%的莽草酸近白色固体,回收率达60.04%,再经二氯甲烷和甲醇重结晶得到纯度为96.54%的莽草酸白色粉末,表明该纯化方法简单可行,重复性好,易于实施工业化生产。

Box-Behnken设计-响应面法优选雪松松针中蛇床子素的提取工艺

目的:优选雪松松针中蛇床子素的提取工艺。方法:采用高效液相色谱法测定蛇床子素含量。在单因素考察的基础上,以乙醇体积分数、提取时间、料液比为考察因素,以蛇床子素含量为响应值,采用Box-Behnken设计-响应面法优选雪松松针中蛇床子素的提取工艺,并进行验证试验。结果:确定的最佳提取工艺为乙醇体积分数88%,料液比1∶20(g/mL),提取2次、每次57min。在此工艺条件下,提取得到蛇床子素的平均含量为0.675 7 mg/g(RSD=1.78%,n=3),与预测值0.680 9 mg/g的相对误差为0.59%。结论:优选的最佳提取工艺方法简便、可行,可用于雪松松针中蛇床子素的提取。

雪松松针多糖超声波酶法提取及其抗氧化性

为优化雪松松针多糖超声波酶法的提取工艺,并研究多糖结构及其抗氧化性。通过响应面法分析确定最佳提取参数为:3. 0 g松针粉末,液料比20∶1(m L∶g),提取温度80℃,超声功率560 W,超声时间47 min,纤维素酶用量12 FPU/g原料,提取两次,多糖得率高达10. 39%。采用高效液相色谱、红外光谱和核磁共振光谱等对松针多糖进行了结构表征,松针多糖以β-糖苷键为主要连接方式,并由葡萄糖、果糖、阿拉伯糖和半乳糖等单糖组成。体外抗氧化性研究结果表明:松针粗多糖对羟基自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的清除能力远高于纯化多糖,呈现出良好的量效关系,粗多糖对·OH和DPPH·的半抑制浓度IC50分别为0. 47 g/L和0. 076 g/L。

雪松松针总黄酮醇提工艺优化

利用乙醇浸提法提取雪松松针中的黄酮类化合物,以芦丁为对照品,采用NaAc-AlCl3比色法考察总黄酮提取率,通过单因素试验和正交试验对提取工艺进行优化。结果表明,该方法的最佳提取工艺为:以1 g松针为原料,按照1∶45的料液比加入50%乙醇作为提取剂,于75℃恒温回流提取2 h。最佳工艺条件下雪松松针的总黄酮提取率为3.64%,RSD为4.04%。该方法稳定可靠,工艺合理可行。

洛阳市城区雪松松针铅含量空间分布

通过对洛阳市城区居民区、商业区、工业区、风景区4种功能类型区中的11个采样点中的10～15年生雪松松针(SA)、地面落针(SB)和20～30年生雪松松针(SC)、地面落针(SD)中重金属Pb含量的测定,分析了洛阳市城区大气中Pb污染现状。结果表明:洛阳市城区雪松松针Pb含量平均为1.606mg/kg,属重金属轻度污染;居民区、商业区、工业区、风景区雪松松针Pb含量差异显著,表现为工业区>居民区>商业区>风景区;松针中Pb含量主要受冶炼、工业废气、汽车尾气排放等人为活动因素影响。雪松松针Pb含量分异性可以客观反映城市不同区域内大气Pb污染程度,这为城市环境保护研究提供了新方法,值得推广使用。

雪松松针总黄酮的体外抗肿瘤作用

目的研究雪松松针总黄酮的体外抗肿瘤活性。方法采用MTT实验进行体外增殖抑制作用研究,从人宫颈癌He La细胞株、人胃癌MKN45细胞株、人肺癌A549细胞株、人肝癌Hep G2细胞株及人胶质瘤SHG44细胞株中筛选雪松松针总黄酮最敏感瘤株,采用细胞流式仪进行细胞周期及凋亡研究。结果雪松松针总黄酮不同浓度对各肿瘤细胞均有增殖抑制作用,并具剂量依赖性,对人肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株Hep G2作用48 h后,IC50分别为211.39μg/ml和114.12μg/ml。结合MTT实验结果及IC50值,发现Hep G2细胞对雪松松针总黄酮最为敏感(P<0.05)。雪松松针总黄酮能够阻滞Hep G2细胞于G0/G1期,并诱导其凋亡。结论雪松松针总黄酮不同剂量组对5株肿瘤细胞均有一定抑制作用,其中对Hep G2细胞抑制作用最为显著。

雪松松针多糖提取及中红外光谱研究

采用中红外(MIR)光谱技术(包括一维MIR光谱、二阶导数MIR光谱、四阶导数MIR光谱和去卷积MIR光谱)开展雪松松针多糖结构的研究。实验发现,松针的主要红外吸收官能团包括νOH-雪松松针多糖、νC=O-雪松松针多糖、ν酰胺-Ⅰ-雪松松针多糖、νC=C-雪松松针多糖、ν酰胺-Ⅱ-雪松松针多糖、δCH_(2)-雪松松针多糖和νC-O-雪松松针多糖等,采用MIR光谱可以快速鉴别雪松松针多糖结构。本课题为雪松松针多糖结构研究建立了1个新的方法学,具有重要的应用研究价值。