雪胆素甲诱导非小细胞肺癌系NCI-H460和A549的凋亡效应及其作用机制初探

目的雪胆素甲(CuⅡa)诱导肺癌NCI-H460和A549的凋亡效应及其作用机制初探。方法利用CCK-8检测CuⅡa对肿瘤细胞抑制活性;流式细胞术检测CuⅡa对肿瘤细胞凋亡以及周期的影响;Western blot检测CuⅡa对Aurora A、STAT3以及Cofilin蛋白磷酸化的影响。结果 CuⅡa对肺癌细胞NCI-H460和A549具有明显抑制作用,其IC_(50)分别为224.9和108.3 nmol·L^(-1);CuⅡa能诱导肿瘤细胞凋亡,并阻滞细胞周期于G_2/M期;Western blot实验结果显示CuⅡa对STAT3和Cofilin的磷酸化具有抑制作用,且呈现剂量依赖性,CuⅡa能抑制Aurora A磷酸化,符合Aurora A激酶抑制剂抗肿瘤效应重要特征—阻滞细胞于G_2/M期。结论CuⅡa对非小细胞肺癌细胞系NCI-H460和A549具有明显的抑制作用,CuⅡa可作为抗非小细胞肺癌的先导化合物进行下一步研究。

雪胆素甲通过破坏微丝结构诱导LPS活化的RAW264.7细胞凋亡

目的分析雪胆素甲(CuIIa)对脂多糖(LPS)活化的RAW264.7巨噬细胞的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制。方法MTS法检测CuIIa对RAW264.7细胞增殖的作用,相差显微镜观察CuIIa对LPS活化的细胞形态的影响,荧光显微镜观察CuIIa对细胞骨架的影响,流式细胞仪检测亚二倍体(凋亡)峰的变化,免疫印迹检测Cleaved caspase-3、生存素以及G-actin与F-actin的变化。结果 CuIIa能明显抑制RAW264.7细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,但单独CuIIa不能有效诱导细胞凋亡。CuIIa使LPS活化的伸展细胞收缩变圆,伪足突起消失,G-actin水平下降,细胞内发生严重的Actin聚集,说明微丝结构被破坏。随着CuIIa浓度的增加,其诱导LPS活化的RAW264.7细胞处于sub-G0/G1(凋亡峰)的数量明显增加。免疫印迹分析显示CuIIa使Caspase-3明显活化,生存素急剧下降。结论 CuIIa可能通过引起Actin聚集而破坏微丝细胞骨架,诱导LPS活化的RAW264.7细胞发生凋亡,从而发挥其抗炎效应。

雪胆素甲对胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭能力的影响

目的研究雪胆素甲(CuⅡa)对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移能力的影响及其分子作用机制。方法以0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L的CuⅡa溶液(A、B、C、D、E、F组)作用SGC-7901细胞48 h后,采用CCK-8法、Transwell小室、流式细胞仪分别检测细胞的增殖能力、迁移能力及细胞凋亡情况。采用免疫印迹(Western blot)法分析细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc、细胞周期素D1(CyclinD1)和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)等蛋白的表达。结果除B组细胞的迁移能力以及凋亡率与A组相比,差异无显著性(P>0.05)外,其他组与A组相比,随着CuⅡa浓度的增加,可以明显地抑制SGC-7901细胞的增殖、迁移及促进SGC-7901细胞的凋亡(F=15.812~98.346,P<0.05),且其作用呈浓度依赖性。与A组相比,0.1、1、10、100μmol/L的CuⅡa作用48 h后,可以降低胃癌细胞β-catenin、C-myc、CyclinD1蛋白的表达(F=15.632、8.494、11.267,P<0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(F=21.763,P<0.05),但是B组β-catenin、C-myc、CyclinD1、GSK-3β蛋白表达与A组相比,差异无显著的统计学意义(P>0.05)。结论CuⅡa能够有效地抑制胃癌细胞的增殖和侵袭,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

雪胆素甲对小鼠乳腺肿瘤的抑制作用及其机制

目的研究雪胆素甲(CUBα)对二甲基苯蒽(DMBA)诱导的小鼠乳腺肿瘤的影响。方法将实验小鼠按体质量采用配对设计随机分组法分为6组,每组12只。即空白对照组、模型对照组、他莫昔芬(阳性对照)组和CUBα小剂量组、中剂量组、大剂量组。建立DMBA诱导小鼠乳腺肿瘤模型,其中CUBα小剂量组、中剂量组、大剂量组小鼠分别灌胃给予CUBα12.5,25,50 mg·kg^-1,观察小鼠体温、体质量、瘤体生长及肺转移情况,测定小鼠白细胞计数水平、免疫脏器指数、血清雌二醇和孕酮含量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平,检测组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果与模型对照组比较,中、大剂量组CUBα乳腺肿瘤生长和肺转移结节数均被明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05),雌二醇、孕酮含量降低,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶、SOD、GSH-Px酶活性升高。与他莫昔芬组比较,大剂量CUBα组小鼠免疫指标显著改善,表现为白细胞计数水平和免疫器官脏器指数提高(均P<0.05),血浆TNF-α和IL-6水平降低(均P<0.05)。结论CUBα能抑制DMBA诱导的小鼠乳腺肿瘤,其作用机制与调剂免疫功能有关。

高效液相色谱法测定雪胆素片中雪胆素甲的含量

目的测定雪胆素片中雪胆素甲的含量。方法采用高效液相色谱法,色谱条件为:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈-水(40∶60)为流动相,柱温为25℃,流速为1mL·min-1,紫外检测波长为212nm。结果所测定的10批雪胆素片中雪胆素甲的平均含量为104.61%.结论该法简便易行,灵敏度高,重现性好,可用于雪胆素片的质量控制。

用UHPLC-MS/MS法研究雪胆素甲在大鼠体内的代谢产物及代谢途径

目的建立一种快速鉴定大鼠体内雪胆素甲代谢产物的UPLC-MS/MS法,并提出可能的代谢途径。方法大鼠单次灌胃0.5%羧甲基纤维素钠配制的雪胆素甲混悬液(100 mg·kg^-1),收集大鼠给药前后的血浆和尿液。血浆经蛋白沉淀、尿液经稀释高速离心后分别进样分析。用Waters Xbridge C18色谱柱(100 mm×3 mm,3.5μm),10 mmol·L^-1乙酸铵和乙腈为流动相进行梯度洗脱,在正离子模式下对样品进行质谱分析。结果经研究分析,初步鉴定出22种雪胆素甲的代谢产物,其中包括15个Ⅰ相产物和7个Ⅱ相产物。并推测出雪胆素甲在大鼠体内的可能转化途径,包括Ⅰ相反应(水解、氧化、脱水、去甲基化)和Ⅱ相反应(葡萄糖醛酸结合、半胱氨酸结合);且雪胆素甲主要经过肾以原型及代谢产物的形式快速排泄至体外。结论本研究初步揭示了雪胆素甲在大鼠体内的代谢概况,为研究雪胆素甲代谢产物的活性及其药代动力学特性提供基础。

雪胆甲素的提取与确证

应用乙醇提取、乙酸乙酯纯化、丙酮沉淀的方法,从大籽雪胆中提取到结晶物,经HPLC和MS检测,并对其准分子离子进行ESI碰撞诱导裂解规律的分析,确证为雪胆甲素,其含量为95.1%。

反相高效液相色谱法测定不同采收期长果雪胆中雪胆甲素的含量

反相高效液相色谱法测定不同采收期长果雪胆中雪胆甲素的含量施亚琴杨培全台云梅（华西医科大学药学院成都６１００４１）张文锦（四川省彭州市药品检验所６１１９３０）长果雪胆ＨｅｍｓｌｅｙａｄｏｌｉｃｈｏｃａｒｐａＷ．Ｊ．Ｃｈａｎｇ主要含雪胆甲素及少量雪胆乙素...

高效液相色谱法测定雪胆中雪胆甲素的含量

目的应用高效液相色谱法(HPLC法)测定雪胆中雪胆甲素的含量。方法采用C18色谱柱,流动相为甲醇-水(80∶20),流速:1.0m l/min,检测波长为210nm。结果雪胆甲素在进样量0.4994-2.497μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系;平均加样回收率为99.80%,RSD=0.16%(n=5)。结论本法操作简便、准确、灵敏度高、重现性好,可用于雪胆药材中雪胆甲素的含量测定。

高效液相色谱-蒸发光散射法检测雪胆溶液中雪胆甲素的研究

采用 HPLC －ELS 法，C18柱（4．6 mm ×250 mm），流动相为乙腈－水（40∶60）；流速0．8 mL／min；柱温为室温；检测器为 Alltech 2000蒸发光散射检测器；检测温度100℃；ELSD 载气为高纯氮气；载气压力为0．35 MPa，对雪胆溶液中雪胆甲素含量进行测定。结果表明：在该方法下，雪胆甲素进样量在3．34～16．70μg之间，进样量的自然对数与峰面积积分值的自然对数呈良好的线性关系，其平均回收率为98．81％，RSD 为0．92％（n ＝6）。所建方法简便易行、准确可靠，可用于雪胆溶液中雪胆甲素含量的测定。

微波辅助提取峨眉雪胆中雪胆甲素及其抑菌作用

以峨眉雪胆为试材,采用单因素试验和正交实验对雪胆甲素的提取工艺进行优化,同时用滤纸片法测定雪胆甲素的抑菌活性,以期为研究峨眉雪胆中雪胆甲素的提取工艺及雪胆甲素的抑菌活性奠定基础。结果表明:峨眉雪胆中雪胆甲素的最佳提取条件为微波提取功率400 W、微波最佳提取时间为7 min、料液比1∶25 g·mL^-1、乙醇体积分数90%(v/v),此时提取率为3.8026 mg·g^-1。峨眉雪胆石油醚浸提液、乙酸乙酯浸提液和正丁醇浸提液在测定浓度范围内对大肠杆菌和金黄色葡萄球均有较好的抑菌活性。

雪胆甲素及其衍生物的研究概况

雪胆甲素主要存在于葫芦科雪胆属植物雪胆中,药理作用广泛,现已用于临床。现对其化学结构、含量测定、药理作用、药效学作用及结构修饰作一综述,以冀为雪胆甲素的深入研究提供参考。

高效液相法测定浙江雪胆中雪胆甲素的含量

目的建立用于测定浙江雪胆中雪胆甲素含量的分析方法。方法浙江雪胆样品经甲醇超声提取后,用HPLC法测定。色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(4.6×250mm,5μm),以乙腈∶水(35∶65)为流动相,流速为1mL/min,柱温为25℃,检测波长为210nm。结果雪胆甲素在2.06×10-3～1.03×10-1mg/mL间有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.61%,RSD为1.896%(n=6)。结论该方法简便、准确、可靠,可用于测定浙江雪胆中雪胆甲素的含量。

HPLC测定大鼠血浆中雪胆甲素的浓度及其药动学研究

目的：建立灵敏、快捷测定大鼠血浆中雪胆甲素浓度的高效液相色谱法（ HPLC）,并应用于体内药动学特征研究。方法：色谱条件：色谱柱：Dikma Diamonsil C18（250 mm x4.6 mm,5μm）,流动相：乙腈∶水（45∶55, v/v）,检测波长：212 nm,柱温：35℃,流速：1.0 ml·min-1。采取大鼠静脉注射给药途径,于不同时间点采血测定血浆药物浓度,并用DAS 2.0计算药动学参数。结果：雪胆甲素血药浓度在0.146-14.060μg·ml-1范围内线性关系良好（r=0.9993）；方法回收率为99.02%-104.22%；提取回收率为84.74%-86.80%；日内、日间精密度RSD均〈5%,稳定性考察符合要求。应用此法测定大鼠尾静脉注射给药后的血药浓度并计算主要药动学参数,1.0,2.0,4.0 mg·kg-1三个剂量组静脉给药后在大鼠体内均符合三室模型,主要药动学参数分别为t1/2β（h）：0.732±0.151,0.681±0.055,0.667±0.064； Vd（L·kg-1）：0.147±0.089,0.131±0.095,0.153±0.047；CL（L·h-1·kg-1）：0.287±0.031,0.304±0.063,0.318±0.029和AUC0→∞（mg·h·L-1）：3.646±1.124,4.916±1.227,9.385±1.419。结论：该法快速、简便、准确,符合生物样品测定需求,可用于药动学研究。雪胆甲素静脉注射给药后在体内呈三室模型,代谢较快,具有线性动力学特征。

雪胆属植物中雪胆素和齐墩果酸的含量测定

目的:测定不同部位(根、块茎)和不同生长年限(2、3、4、6年)雪胆属植物中雪胆素和齐墩果酸的分布情况,旨在寻找高含量雪胆素药材原料。方法:利用HPLC法测定雪胆甲素、雪胆乙素和齐墩果酸在雪胆属植物中的含量,分析比较了不同生长年限和不同品种之间的含量差异。结果:雪胆(Hemsleya chinensis)的地下部分块茎中,雪胆素中的雪胆甲素含量较高;同时,不同生长年限中,以6年生块茎中雪胆素含量最高,生长年限在3年以下块茎中未检测到雪胆素;盘龙七雪胆(Hemsleya panlongqi)块茎中雪胆素含量最高,雪胆甲素含量达到4.37 mg/g,高于药典基原植物曲莲(Hemsleya amabilis)中雪胆素含量。结论:雪胆素含量在雪胆属不同品种间差异显著,选择高含量种源是获得雪胆素的有效途径之一。

甘草制雪胆质量标准研究

目的:建立甘草制雪胆的质量控制标准,以保证甘草制雪胆饮片的药用质量。方法:采用TLC法对甘草制雪胆饮片进行定性鉴别,采用HPLC法测定甘草制雪胆饮片中雪胆素甲和甘草酸的含量,同时参照2015年版《中国药典》并结合中药炮制规范对其水分、总灰分、浸出物进行检查。结果:HPLC测定结果表明,雪胆素甲在148.4~1484.0μg范围内,甘草酸在0.202~2.024μg范围内都具有良好的线性关系。雪胆素甲的平均加样回收率为99.2%,RSD为2.21%,甘草酸的平均加样回收率为97.78%,RSD为1.39%。结论:根据实验结果建立的甘草制雪胆质量标准,可保证甘草制雪胆饮片的质量稳定可控。

中药天花粉中葫芦素类三萜的分离及其结构鉴定

目的研究中药天花粉中的化学成分。方法采用C_(18)层析柱、微孔树脂MCI、SPE固相萃取柱及反相半制备高效液相色谱等低损耗现代色谱技术。结果从中药天花粉(Trichosanthes kirilowii Maxim.)的乙酸乙酯部位中分离得到4个葫芦素类三萜:雪胆素甲(1)、葫芦素R(2)、葫芦素D(3)、葫芦素B(4);通过对质谱(MS)、核磁共振谱(NMR)等波谱技术的综合解析,确定化合物结构,并阐述了其波谱特征。结论从天花粉中得到4个葫芦素类三萜,其中雪胆素甲(1)为首次从该植物中分离得到,且为首次从天花粉中分得葫芦素F型三萜。葫芦素三萜具有毒性,本文的分离为阐述天花粉的临床毒副作用奠定了一定基础。

贵州不同产地雪胆药材有效成分研究

目的:研究贵州不同产地雪胆属药用植物的资源分布并研究其品质差异。方法:通过实地走访调查收集贵州省兴义、毕节、安顺、遵义、六盘水等7个不同产地的雪胆块茎药材样品;采用热浸法对醇溶性浸出物的含量进行测定,采用高效液相色谱法测定雪胆甲素的含量,采用紫外分光光度法对雪胆的总皂苷和总黄酮含量进行检测。结果:本次收集到雪胆样品包括两个基源:肉花雪胆(Hemsleyacarnosiflora C.Y.Wu et C.L.Chen)及雪胆(H.amabilis Diels);不同产地雪胆药材活性成分含量有差异,其中毕节市桂果镇所产样品有效成分含量高于四川、浙江等地样品,品质优良。结论:贵州雪胆药材在民间有广泛应用,商品药材多为野生资源,其资源量不断减少,应该进行保护和有计划地开发利用;肉花雪胆(H.carnosifloraC.Y.Wu et C.L.Chen)栽培方法简单,资源量大,品质优良,是值得大力发展的品种。

雪胆口服液的制备及热加速评价

目的:优化雪胆口服液制备工艺.方法:以雪胆甲素为评价指标,采用正交设计优化口服液提取工艺并考察所制备样品的稳定性.结果:最佳提取工艺条件为提取温度60℃,提取时间4h,提取次数4次,料液比1∶8,在此条件下制得口服液中雪胆甲素含量最高为10.56mg/mL.结论:雪胆口服液制备方法简单且产品质量稳定;雪胆甲素含量测定方法灵敏度高、专属性强、重现性好.