雪花莲凝集素基因转化菊花及转基因植株的抗蚜性研究

针对菊花存在的蚜虫虫害问题 ,采用农杆菌介导法将gna基因导入菊花叶片 ,共获得 93个转化克隆。研究了影响转化频率的主要因素 ,得出在使用 pH5 6的YEB培养基 ,菌液浓度OD60 0 =0 4 ,4 5日苗龄中部叶片预培养 1d ,共培养 4d ,共培养的培养基中加入 0 5mg/LGA3 的条件下可使转化频率提高到 11 2 1%。PCR、实时荧光PCR检测结果表明 ,外源基因已整合到植物细胞基因组中。转化植株幼苗饲虫实验表明 ,不同转化克隆的抗蚜性差异较大 ,蚜口密度抑制率从 10 %～ 84 %不等 ,平均蚜口密度抑制率为 39.4 %。

雪花莲凝集素基因(gna)的改造及其抗蚜性(英文)

用定点突变方法对编码雪花莲凝集素 (Galanthusnivalisagglutinin ,GNA)前体蛋白的DNA序列进行了改造和转基因烟草 (NicotianatabacumL .)抗蚜性的研究。结果表明 ,将GNA编码序列中含有的稀有密码子改造后 ,GNA的表达水平从占总可溶性蛋白的 0 .17%增加到 0 .2 5 % ,转基因烟草的抗蚜性也随之增强 ,从平均抑制桃蚜 (Myzusper sicae (Sulzer) )虫口密度 6 3.7%显著地提高到 71.0 %。

利用花粉管通道法获得转雪花莲凝集素基因(sgna)小麦

利用适用于禾谷类作物的表达载体pGU4AGBar和pGBIU4AGBar,采用花粉管通道法 ,将人工合成的雪花莲凝集素基因sgna导入了优良冬小麦品系西农 2 2 0 8和西农 1 3 2 ,经PCR和Southernblot鉴定 ,证明获得了 2 0株导入了sgna基因的转基因植株 ,转化率约为 0 .2 8%～ 0 .84% 。

雪花莲凝集素基因转化新疆甜瓜抗蚜虫的研究

采用农杆菌介导法对新疆甜瓜进行了遗传转化研究,对影响转化频率的不同因素,即:抗生素浓度、预培养有无及感染时菌液的不同处理、外植体与农杆菌的感染时间和共培养时间等进行了研究,通过农杆菌介导法将雪花莲凝集素基因导入四日龄甜瓜子叶外植体,获得了卡那霉素的抗性植株。移栽成活并生长良好。卡那霉素抗性鉴定及转化株总DNA的PCR分析表明,GNA基因已整合到甜瓜的基因组中。初步抗蚜虫实验证明,转基因甜瓜有一定的抗棉蚜幼虫效果。

雪花莲外源凝集素基因在水稻保持系上的转化

通过把雪花莲外源凝集素基因(GNA)与潮霉素抗性基因(Hyg)构建到同一表达载体上,利用基因枪转化方法,把雪花莲外源凝集素基因导入粳稻保持系中,通过PCR方法和潮霉素抗性筛选,检测该基因的导入情况,发现部分克隆植株只具有单一潮霉素抗性,需要结合抗虫性测定来确定GNA基因的导入及表达。

转雪花莲凝集素酶基因枸杞对蚜虫的抑制作用

利用农杆菌介导法将雪花莲外源凝集素酶基因导入枸杞叶片,获得了完整的转基因植株。对36个经PCR检测为阳性的转基因株系进行了两年抗蚜虫筛选试验,结果表明:蚜口密度抑制率在13.19%-95.4%,平均蚜口密度抑制率为78.59%。

表达雪花莲外源凝集素基因的油菜转基因植株的获得(英文)

利用农杆菌系LBA44 0 4(pCAMBIA330 0RG)转化优良甘蓝型油菜恢复系W72 3的下胚轴节段 .pCAM BIA330 0RG含有Rss1启动子引导的雪花莲外源凝集素基因 (gna)和CaMV 35S启动子引导的除草剂抗性基因(bar) 经过两轮除草剂 (2 .5mg/Lbialaphos)筛选 (两周 /轮 ) ,除草剂抗性再生芽被转入生根培养基中生根 对根系旺盛生长的植株中所含 gna基因进行PCR分析 PCR分析证实了这些植株确为转基因植株 利用West ern印迹法对随机选择的 5株含gna基因的转基因植株的分析发现 ,其中 4株表达了 gna基因 目前正对这些表达

抗虫基因在转基因植株中聚合的初步研究

以质粒 pBUSCK HPT ,pCUSBK HPT和pGNA HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型三系恢复系SH5 2 7和广亲合系W 2 0 0 8为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)、修饰的Bt毒蛋白基因 (sbk)和雪花莲凝集素基因 (gna)的植株 .通过人工杂交 ,将外源基因聚合 .分子证据显示 ,作者获得了抗性基因聚合的材料 .蛋白活性测定表明 ,聚合基因的表达因载体结构相似而受到影响 ,但抗虫性却得到提高 .作者还讨论了聚合转基因在水稻育种中的作用和及其相关问题 .

基因枪导入法培育抗虫水稻

以含潮霉素抗性基因、GUS基因和雪花莲凝集素 (GNA)基因的 pWRG15 15和pRSSGNA1为供体DNA ,利用基因枪法转化上农香糯成熟胚诱导的愈伤组织。经抗性培养基筛选 ,从轰击的 135块愈伤组织中得 5株转基因植株。GUS检测和PCR分析表明 。

转抗虫基因优良籼型恢复系的获得及其外源基因的遗传稳定性研究

用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因 (gna )转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 ,通过 PCR、PCR- South-ern blotting和 Southern blotting等分子方法检测证明 ,外源基因已稳定遗传到转基因第三代 (T2 )。转基因第一代植株 (T0 )在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比 ,发生明显的不可遗传的变异。随着繁殖代数的增加 ,转基因植株恢复到与对照植株一致。还讨论了 DNA微量提取法在转基因后代筛选中的运用。

GNA成熟蛋白基因亚克隆及其原核表达载体构建

雪花莲外源凝集素 (GNA)对刺吸式昆虫和某些咀嚼式昆虫以及多种线虫均有毒性。从含GNA前体蛋白基因的质粒中亚克隆出GNA的成熟蛋白基因MGNA ,将MGNA基因插入大肠杆菌表达载体pET2 2b的不同位点 ,再经测序验证 ,得到了三种不同表达形式的GNA原核表达载体 :2 2bG1 (分泌型融合GNA蛋白 )、2 2bG2 (包涵体型GNA蛋白 )、2 2bG3(分泌型天然GNA蛋白 ) ,这为进一步在大肠杆菌中表达GNA和将GNA制成生物农药奠定了基础。

抗蚜虫转基因枸杞的初步研究

选用对蚜虫具有明显抗性的基因———雪花莲外源凝集素酶基因 ,用宁杞 1号的幼叶、幼茎、幼根与携带质粒的农杆菌共培养后 ,将其转移到含有 6-BA0 .5mg/L +NAA 1mg/L +60mg/L卡那霉素的MS培养基中诱导愈伤组织 ,10～ 15d后将诱导产生的愈伤组织转移到含有 6-BA0 .5mg/L十NAA0 .0 1mg/L +60mg/L卡那霉素的MS分化培养基中 ,培养 2 0～ 30d ,在侵染外植体的愈伤组织上出现小芽 ,当芽长到 1.5～ 2cm时将其切下转入 6-BA0 .0 1mg/L +NAA0 .2mg/L +30mg/L卡那霉素的MS生根培养基中进一步筛选并使转化体生根 ,获得完整的抗蚜虫转基因枸杞。将获得的完整植株进行PCR分析检测 ,发现雪花莲外源凝集素酶基因已经整合到枸杞植株染色体上 ,片段大约在 50 0Pb ,其转化率为 65.1%。

转基因枸杞研究中的问题探讨

应用农杆菌介导 ,将外源基因雪花莲凝集素酶基因导入枸杞细胞 ,获得新的抗蚜虫品种。

优良籼型恢复系转基因植株的获得及其遗传稳定性(英文)

报道了用基因枪转化法将雪花莲凝集素基因 (gna)转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 .PCR、PCR -Southernblotting和Southernblotting等分子检测证明 ,外源基因以多拷贝单位点方式整合到受体基因组中并稳定遗传到转基因第三代 (T2 ) .转基因第一代植株 (T0 )在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比 ,发生明显的不可遗传的变异 ,随着繁殖代数的增加 ,转基因植株恢复到与对照植株一致 .Westernblotting表明 ,目的基因在转基因植株中正确表达 .蛋白活性分析显示 ,外源基因在转基因植株中合成的蛋白具有凝血生物活性 ,含量占可溶性总蛋白的0 .1%左右 .本文还对转基因技术在杂交稻育种中的应用进行了讨论 .图 4表 2参

抗虫基因转化优良籼型保持系D297B的研究

本文报道了用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因(gna)转移到优良籼型杂交稻保持系D297B中。通过PCR、Southern blotting和Western blotting等分子检测方法证明,外源基因已整合到受体材料的基因组中并得到表达。蛋白活性测定结果显示转基因在受体中表达的蛋白具有生物活性。潮霉素抗性分析表明外源基因多数是以单位点形式整合并以3∶1方式遗传。另外。

粳稻抗虫转基因保持系的研究

利用基因枪转化法,以优质粳稻保持系早花二B为受体,获得了含有GNA和Hyg基因的转基因植株。对T2产生的6个纯合株系进行多代潮霉素筛选、PCR分子检测及稻飞虱接种鉴定,表明标记基因在受体中稳定遗传,并高效表达,且一经纯合不再分离;而目的基因表达效果不一样,只有T-10(克隆号A5-32)表达效果最好,其抗虫性达到中抗(MR)以上水平,比受体抗性(S)明显提高。将转基因保持系与不育系早花二A回交,获得的转基因不育系高抗潮霉素,且抗性也完全纯合,表明转基因保持系的抗性基因已转化到不育系中,并得到高效表达。

根癌农杆菌介导北海道黄杨遗传转化体系的建立

在建立北海道黄杨(Euonymus japonicus ‘CuZhi’)再生体系的基础上,建立其遗传转化体系,以获得转雪花莲外源凝集素(Galanthus nivalis agglutinin,GNA)基因植株。采用根癌农杆菌(Agr-robacterium tumefaciens,LBA4404菌株)介导法,研究影响北海道黄杨遗传转化的若干因素。结果表明,预培养与否、菌液浓度、侵染时间、共培养时间等对转化频率都有一定的影响。在遗传转化过程中,不经预培养,根癌农杆菌浓度OD600=0.6,侵染下胚轴40min,再共培养3d,有利于获得最高遗传转化效率。抗性植株经PCR和DNA-Southern blot检测表明,目的基因已整合到北海道黄杨基因组中。