雪莲果叶UPLC-ECD指纹图谱及其抗氧化活性成分研究

目的建立雪莲果叶超高效液相色谱-电化学检测(UPLC-ECD)指纹图谱,并研究其抗氧化成分。方法采用UPLC-ECD法建立10批雪莲果叶样品的指纹图谱,通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)确定共有峰并评价相似度,结合超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)技术指认共有峰成分。以DPPH自由基、ABTS^(+)˙自由基清除实验及Fe^(3+)还原能力实验评价10批样品的抗氧化能力,采用灰色关联度法建立谱效关系。结果10批样品共有12个共有峰,指认出6个成分,分别为芦丁、异槲皮苷、异绿原酸A、咖啡酰葡萄糖二酸、双咖啡酰太洛黏酸、2,3,5-或2,4,5-三咖啡酰太洛黏酸。样品相似度在0.983~0.754之间,聚类分析显示10批样品可聚为两类,S5、S7为一类,其余为第二类。灰色关联结果显示,12个共有峰均与抗氧化活性有关联性。结论ECD能有效筛选雪莲果叶中的抗氧化成分,所建雪莲果叶指纹图谱的共有峰均具有抗氧化能力。

雪莲果叶中多酚的提取工艺研究

以雪莲果叶为原料,采用醇提方法提取其多酚物质。通过单因素、正交试验和方差分析确定了最佳提取条件为:乙醇浓度30%,料液比1:40,提取温度70℃,提取时间1h,提取2次。在最佳条件下多酚的提取量为32.92mg/g,此结果可为雪莲果叶的开发利用提供技术依据。

HPLC法测定雪莲果叶乙醇提取物中芦丁和槲皮素

运用高效液相色谱方法(HPLC)梯度洗脱同时测定了雪莲果叶乙醇提取物中的芦丁和槲皮素,色谱柱为waters XterraTMMSC18柱(150×3.9mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长354nm,柱温25℃。实验结果表明:芦丁和槲皮素在0.03g/L～0.48g/L范围内线性关系良好,加样回收率分别为98.86%和97.25%,相对标准偏差(RSD)分别为0.09%和0.30%。该方法快速、简便、准确,重现性好,可用于雪莲果叶乙醇提取物中芦丁和槲皮素含量测定。

薄层色谱法分离鉴定雪莲果叶中的绿原酸

建立薄层色谱法分离鉴定雪莲果叶中绿原酸的方法,以斑点分离情况、清晰度、有无拖尾现象等方面综合评价展开效果。确定以乙酸乙酯-水-甲酸-甲苯(85∶10∶10∶4)为展开剂,显色剂为2%FeCl3-1%K3Fe(CN)6,方法简单、快速、成本低,分离效果理想,结果满意。

雪莲果叶酚酸抗氧化能力的研究

通过测定雪莲果叶酚酸提取物的还原能力和对化学模拟体系中羟自由基(.OH)、超氧阴离子自由基(O2-.)及二苯代苦味肼基自由基(DPPH.)的清除能力,研究了雪莲果叶酚酸提取物的体外抗氧化活性。结果表明:雪莲果叶酚酸提取物具有较强的抗氧化能力,对自由基有明显清除作用,并且随着雪莲果叶酚酸浓度的增加,其抗氧化能力有显著增强的趋势。

雪莲果叶黄酮的纯化工艺

采用大孔树脂吸附法对雪莲果叶黄酮纯化工艺进行研究,选择9种大孔吸附树脂,通过其对雪莲果叶黄酮的静态吸附率和解吸率比较研究,筛选出HPD-100型树脂为较优的雪莲果叶黄酮的吸附树脂。最佳纯化工艺条件为:上样液质量浓度1.806 mg/mL,上样液p H2.0,上柱流速1 mL/min,以60%乙醇溶液为洗脱液,洗脱流速1 mL/min,洗脱体积为114 mL,解吸率为96.56%,该纯化工艺可使雪莲果叶粗提物中黄酮纯度由18.50%提高到56.24%。

雪莲果叶中黄酮的提取工艺优化

为优化雪莲果叶黄酮的提取工艺条件,采用正交实验法,研究溶剂浓度、料液比、浸提温度和浸提时间4个因素对雪莲果叶黄酮提取量的影响。确定了雪莲果叶黄酮提取的最优条件为用体积浓度40%的乙醇,在料液比为1∶30(g/m L)的溶剂条件下在70℃提取1.5 h,提取2次,在此条件下黄酮含量提取量达到53.41 mg/g。通过工艺优化,雪莲果叶黄酮得率高,稳定性好。

雪莲果叶酚酸提取物抑菌活性研究

以食品中常见的3种病原微生物为供试菌,采用滤纸片法和两倍稀释法研究了雪莲果叶中酚酸提取物的抑菌活性,结果表明:雪莲果叶酚酸对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌均有良好抑制生长作用,对于供试的3种菌,雪莲果叶酚酸对金黄色葡萄球菌抑制作用最强,其次为大肠杆菌,经纯化后的酚酸对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为1.25 mg/mL、2.5 mg/mL、10 mg/mL。

反相高效液相色谱法测定雪莲果叶中的绿原酸

采用反相高效液相色谱法对雪莲果叶中的有效成分绿原酸进行分离,并对其含量进行测定,建立反相高效液相色谱法测定雪莲果叶中绿原酸含量的方法。色谱柱为Hypersil ODS-2 C18柱(4.6mm×300mm,5μm),流动相为乙腈-体积分数0.5%磷酸溶液(8:92,V/V),流速为1.0mL/min,检测波长为325nm,柱温为25℃。绿原酸在10～100μg/mL范围内呈良好线性关系,相关系数为0.9999,加标回收率为97.0%,RSD为1.10%。本法快速、简单、准确、分离度好,可用于实际样品的检测。

大孔树脂纯化雪莲果叶酚酸工艺的研究

以雪莲果叶中的酚酸为纯化对象,通过对8种大孔吸附树脂对雪莲果叶酚酸的静态吸附性能研究,筛选出X-5型树脂为适合雪莲果叶酚酸的吸附树脂,并对雪莲果叶酚酸在树脂上的吸附、解吸特性和吸附动力学行为进行了研究。结果表明:X-5树脂对雪莲果叶酚酸的静态吸附率为77·02%,解吸率为91·41%。本实验的纯化工艺条件为:上样液pH3·0,上样液浓度1·384mg/mL,上柱流速1mL/min,解吸剂乙醇浓度50%,洗脱流速1mL/min,解吸率为98·52%,采用上述纯化工艺,可将雪莲果叶酚酸纯度提高到46·8%。

雪莲果叶总黄酮超声波辅助酶法提取工艺优化及抗氧化活性研究

以雪莲果叶为原料,设计单因素及响应面试验,优化超声波辅助酶法提取雪莲果叶中总黄酮的最佳工艺;以DPPH自由基的清除率及总还原力为指标,评估雪莲果叶总黄酮提取物的抗氧化能力。结果表明:利用超声波辅助酶法提取雪莲果叶总黄酮的最佳工艺为乙醇体积分数30%、料液比(m雪莲果叶∶V乙醇)1∶60(g/mL)、超声温度50℃、超声处理12 min、酶解pH 4.8、纤维素酶质量浓度0.40 mg/mL、酶解时间66 min,此工艺下总黄酮提取率为6.317%。所提取雪莲果叶总黄酮具有抗氧化能力,与浓度呈正相关;在质量浓度为0.6 mg/mL时,DPPH自由基清除率达到71.09%,具有接近维生素C的总还原力。利用超声波辅助酶法提取的雪莲果叶中总黄酮提取物具有较好的抗氧化能力。

雪莲果叶的采收时期、干燥方法及其对饼干品质影响的研究

以雪莲果叶为研究对象,探讨了四个主要生长时期:幼嫩期(5月)、生长期(7月)、成熟期(10月)、衰老期(11月)及不同的干燥方式:恒温热风干燥(40℃)、自然干燥、微波干燥(320 W)、真空干燥(60℃)、真空冷冻干燥(-60℃)对雪莲果叶中主要活性物质绿原酸和总黄酮含量的影响,以确定最佳采收时期及干燥方式;并讨论雪莲果叶粉添加对酥性饼干品质的影响。结果显示,随着雪莲果叶的生长,总黄酮及绿原酸含量均先升高后降低,在成熟期达到最高,分别为0.435和33.52 mg/g;所选干燥方式中,真空冷冻干燥(-60℃)较佳,干燥后雪莲果叶中所含黄酮及绿原酸均较高。在酥性饼干中添加雪莲果叶粉(0~20%),所得饼干呈绿色且具有独特的果叶清香;随着添加量的增多,饼干的含水量逐渐下降,硬度呈先降低后升高再降低的趋势。普通饼干、雪莲果叶饼干的挥发性成分分别是11种、22种,雪莲果叶饼干的风味更加丰富,含有独特的香气成分,包括羟基丙酮(3.23%)、2-甲基吡嗪(1.34%)、B-波旁烯(1.03%)等。综上,雪莲果叶的总黄酮和绿原酸含量在雪莲果叶成熟期达到相对最佳,可在10月开始进行收集,利用真空冷冻干燥方式进行干燥,所得雪莲果叶粉可用于烘焙食品的开发,赋予产品独特的风味。

雪莲果叶乙酸乙酯部位化学成分研究

目的研究雪莲果叶乙酸乙酯部位中的化学成分。方法以雪莲果叶为原材料,用70%乙醇回流提取,采用硅胶柱色谱及制备液相色谱等分离方法进行分离纯化,经核磁共振技术鉴定所得化学成分结构。结果从雪莲果叶乙酸乙酯部位共分离得到8个化合物,分别鉴定为Uvedalin(1)、咖啡酸乙酯(2)、咖啡酸甲酯(3)、Enhydrin(4)、高圣草酚(5)、3,7-二甲基醚槲皮素(6)、Uvedafolin(7)和绿原酸(8)。结论化合物5,6为首次从雪莲果中分离得到。

雪莲果茎叶萃取物抑菌活性研究

以茄腐镰刀菌、玉米纹枯病菌和小麦赤霉病菌为受体,探究不同质量浓度的雪莲果茎、叶有机萃取物对供试菌株的抑菌作用。结果表明,雪莲果茎和叶中的几种萃取物对茄腐镰刀菌、玉米纹枯病菌和小麦赤霉病菌有一定的抑制作用,且抑制强度随提取物质量浓度的升高而增加,相同浓度时雪莲果叶萃取物抑菌作用强于雪莲果茎萃取物。相同浓度的雪莲果茎、叶萃取物对同一供试菌株的抑菌率几乎都出现如下规律:最后水相物>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>二氯甲烷萃取物>石油醚萃取物,说明雪莲果叶中对3种供试菌株有抑制作用的物质主要分布在高极性溶剂中。