雷公藤内酯酮联合甘草次酸对促进人肝癌HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的研究雷公藤内酯酮(TPN)单独或联用甘草次酸(GA)对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移、凋亡及相关信号通路Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法采用CCK-8法测定TPN单独或TPN(0.3、0.6、1.2μmol/L)联用GA(2、10、20μmol/L)对HepG2细胞24 h的增殖抑制作用,利用增效指数(q值)判定协同药效;Annexin V-FITC/PI染色法检测给药后细胞凋亡率变化;细胞划痕实验检测药物对细胞迁移能力的影响;Western-blot法检测Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果TPN、GA单独作用对HepG2细胞24 h的半数抑制浓度(IC 50)分别为(7.28±2.13)和(26.56±6.32)μmol/L。TPN(1.2μmol/L)和GA(2μmol/L)联用组的q值(1.505)最大,细胞抑制率为(62.28±6.13)%;该联用组对HepG2细胞的总凋亡率高于单独使用TPN(P<0.05),同时抑制HepG2细胞的迁移,使细胞内Caspase-3蛋白表达水平升高、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论TPN联用GA对HepG2细胞的增殖具有良好的协同抑制效果,可能与其通过下调Bcl-2基因表达与激活Caspase基因家族共同诱导肝癌细胞的凋亡有关,两者联用能增强抑制肝癌HepG2细胞的迁移。

雷公藤内酯酮对来那度胺原发耐药RPMI-8226细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯酮对来那度胺原发耐药RPMI-8226细胞增殖及凋亡的影响。方法MTS比色法检测来那度胺和雷公藤内酯酮对不同多发性骨髓瘤细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测雷公藤内酯酮对RPMI-8226细胞周期与凋亡的影响;Western blot法检测雷公藤内酯酮对RPMI-8226细胞内IKAROS家族锌指蛋白1(IKZF1)和IKAROS家族锌指蛋白3(IKZF3)表达的影响;RT-qPCR法检测雷公藤内酯酮对RPMI-8226细胞内IKZF1、IKZF3基因转录水平的影响。结果来那度胺对不同类型多发性骨髓瘤细胞增殖的作用强度不同,而雷公藤内酯酮对不同类型多发性骨髓瘤细胞增殖均有强效抑制作用,同时可促进来那度胺非敏感的RPMI-8226细胞凋亡,而对细胞周期变化基本无影响。相较于来那度胺,雷公藤内酯酮可剂量依赖性下调RPMI-8226细胞内IKZF1和IKZF3蛋白的表达,进一步RT-qPCR检测显示,雷公藤内酯酮可降低RPMI-8226细胞IKZF1和IKZF3基因的转录水平。结论雷公藤内酯酮可促进来那度胺原发耐药RPMI-8226细胞的凋亡,并且可通过降低来那度胺原发耐药RPMI-8226细胞内IKZF1和IKZF3基因的转录水平来下调相关蛋白的表达,实现对细胞的增殖抑制作用。

雷公藤内酯酮的雄性抗生育作用及其作用机制

目的 研究雷公藤内酯酮的雄性抗生育作用机制。方法 用雷公藤内酯酮 2 0 0μg/ (kg· d)喂服Wistar大鼠 ,8周后取材。做大鼠睾丸精子计数、精子活动度、睾丸切片的形态学观察 ,精核蛋白提取以及基因 cyclinD1和 Cdk4m RNA的原位杂交实验。结果 实验组大鼠睾丸精子数量为 (2 6 .43± 3.90 )× 10 6 / g,比对照组大鼠的精子计数 (4 1.15± 5 .5 1)× 10 6 / g明显降低 (P<0 .0 1) ,精子活动度为 (6 6 .0± 6 .8) % ,较对照组 (88.0± 2 .0 ) %极显著降低 (P<0 .0 0 1) ;cyclin D1和 Cdk4基因表达在精子细胞中显著上升。结论 雷公藤内酯酮的雄性抗生育作用显著 ,作用机制可能主要是增加精子细胞 cyclin D1和 Cdk4基因的表达 ,抑制附睾精核蛋白的生物合成。

雷公藤内酯酮对小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和TNF-α的影响

目的观察雷公藤内酯酮(T7)对活化的小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)分泌一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法分离、纯化巨噬细胞,给予不同浓度T7进行培养,以Griess试剂检测培养上清液中的NO含量,以MTT法检测培养上清液中的TNF-α活性.结果 T7在浓度0.4～3.2 mg/L、时间4～24 h范围内对MΦ分泌的NO和TNF-α具有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量和时间依赖关系.结论 T7可以抑制MΦ的活性.

雷藤氯内酯和雷公藤内酯酮对大鼠骨髓细胞染色体与微核的影响

目的 :观察雷藤氯内酯 (T4)和雷公藤内酯酮 (T7)对SD雄性大鼠骨髓细胞染色体与微核的影响 ,了解其抗生育时的安全性。 方法 :雄性SD大鼠 ,随机分为用药组 (T4、T7)和阴性对照组 3组 ,每组 10只。用药组大鼠灌服抗生育剂量T4为 80 μg/ (kg·d)或T7为 317μg/ (kg·d) ,连续用药 10周后采用骨髓细胞染色体和微核制片方法进行分析 ,阴性对照组给等量的载体 (1%羧甲基纤维素钠 )。 结果 :用药组与对照组比较 ,3组之间骨髓细胞染色体畸变平均值差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;骨髓细胞微核出现率差异也无显著性 (P >0 .0 5 )。 结论 :提示抗生育剂量的T4和T7在对SD大鼠遗传学影响方面无明显的诱变作用。

雷公藤内酯酮对大鼠类风湿性关节炎的影响

目的:研究雷公藤内酯酮对大鼠类风湿性关节炎的影响及作用机制。方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠类风湿性关节炎模型;观察药物对实验性大鼠足肿胀的抑制作用;检测脾淋巴细胞增殖活性;检测脾细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6和关节浸液内NO、PGE2的含量。结果:与模型组相比,雷公藤内酯酮能剂量依赖性抑制大鼠足肿胀的程度(P<0.01);能明显抑制ConA诱导刺激的脾T淋巴细胞增殖活性(P<0.01);对LPS诱导刺激的脾B淋巴细胞增殖活性的抑制作用不明显(P>0.05);能明显降低脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量以及关节浸液NO、PGE2含量(P<0.01)。结论:雷公藤内酯酮对大鼠类风湿性关节炎有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制脾T淋巴细胞增殖活性、降低致炎因子和相关炎症介质水平密切相关。

雷公藤内酯酮对炎症及免疫功能的影响

目的:研究雷公藤内酯酮(triptonide)对炎症及免疫功能的影响。方法:观察口服给予雷公藤内酯酮对小鼠耳廓急性炎症,毛细血管通透性的影响,以及对小鼠免疫器官指数、碳粒廓清速率、脾细胞抗体、血清溶血素抗体、外周血T淋巴细胞的影响。结果:雷公藤内酯酮1,2,4mg.kg-1能明显抑制小鼠耳廓急性炎症及毛细血管通透性,2,4mg.kg-1能降低胸腺指数、碳粒廓清速率、抑制脾细胞抗体的形成、降低小鼠血清溶血素含量及外周血T淋巴细胞的百分比。结论:雷公藤内酯酮具有抗炎及免疫抑制作用。

甘草对大鼠体内雷公藤甲素和雷公藤内酯酮代谢物水平的影响

目的:研究甘草对大鼠体内雷公藤甲素(TPL)和雷公藤内酯酮(TPN)内源代谢物水平的影响。方法:取160只大鼠ig甘草[30 g(生药)/kg]2 h后ip TPN(2.8 mg/kg),连续30 d,收集24 h尿液,合并30 d尿液,采用柱色谱技术和波谱技术分离鉴定其内源代谢物;并采用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱联用法(UPLC-Q-TOF/MS)确定TPL给药后是否具有共同代谢物。将60只大鼠随机分为TPL空白组、TPL组、甘草+TPL组、TPN空白组、TPN组、甘草+TPN组,各给药组大鼠给药方式及剂量同上,TPL空白组和TPN空白组大鼠分别ip相应溶剂,每天1次,连续7 d;采用UPLC-Q-TOF/MS法研究甘草对大鼠体内TPL、TPN内源代谢物水平的影响。结果:从TPN给药大鼠尿液中共分离出5个内源代谢物,分别鉴定为1-甲基海因、4-氨基烟酸甲酯、3,4-二氢-6-羟基-2-喹啉酮、2,6-二羟基喹啉、2-喹啉酮;TPL给药后大鼠尿液中同样存在这5种代谢物。TPL组大鼠尿液中1-甲基海因水平较TPL空白组显著升高(P<0.05),TPN组大鼠尿液中2,6-二羟基喹啉水平较TPN空白组显著升高(P<0.05);TPL或TPN联合甘草用药后血清中1-甲基海因、2,6-二羟基喹啉水平均降低,较其空白组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本实验首次从TPL和TPN给药大鼠尿液中分离鉴定出了5个内源代谢物;甘草能回调TPL给药大鼠尿液中1-甲基海因水平以及TPN给药后大鼠尿液中2,6-二羟基喹啉水平。

雷公藤内酯酮对免疫功能的影响

目的 :雷公藤内酯酮 (T7)有明确的雄性抗生育作用 ,为了解其抗生育时的安全性 ,观察它对免疫功能的影响。 方法 :雄性小鼠灌服T73 5d后与雌鼠交配 ,观察雌鼠怀孕情况及雄性小鼠附睾精子 ,同时观察对免疫功能的影响。 结果 :抗生育剂量的T7并不影响小鼠的非特异性免疫功能 ,抗生育剂量的T7对抗体生成有抑制作用 ,但对B细胞的免疫功能有促进作用。大剂量T7有一定的免疫抑制作用 ,但T7的安全指数较高。 结论 :T7相对安全 。

雷公藤甲素和雷公藤内酯酮热稳定性与分解动力学

研究雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的热稳定性与分解动力学。利用热重—微商热重（TG-DTG）和差热—微商差热（DTA-DDTA）分析技术测得这两种活性成分在氮气气氛中不同升温速率（β）下的热分解曲线，结合使用Kissinger法、Ozawa法、Coats-Redfern法和Achar法进行动力学处理，根据热分解的表观活化能（Ea）和指前因子（A）计算推断这两种活性成分的贮存期。结果表明，除脱水峰外，雷公藤甲素和雷公藤内酯酮热分解行为相似，失重均分为两步：第一步分别从200 ℃到340 ℃，200 ℃到290 ℃；第二步分别从340 ℃到440 ℃，290 ℃到490 ℃。雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的两步热分解严重重叠，总失重率分别为85.5%和64.4%。DTA-DDTA曲线分别出现232 ℃和252 ℃吸热峰以及298 ℃和280 ℃放热峰。雷公藤甲素的第一步热分解的机制是Chemical reaction控制，对应的函数为Reaction order方程。测得平均表观活化能Ea为136.66 kJ/mol，指前因子lnA为26.47；雷公藤内酯酮的第一步热分解的机制是Chemical reaction控制，对应的函数为二级反应方程。测得平均表观活化能Ea为127.19 kJ/mol，指前因子lnA为25.23。根据第一步热分解的Ea 和A 推断，在室温（25 ℃）下，雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的理论贮存期均为4～5年。研究结果可为含雷公藤甲素和雷公藤内酯酮药品的质量控制和制剂工艺、雷公藤的炮制减毒以及热分解产物研究提供参考。

雷公藤内酯酮的半合成方法研究

雷公藤环氧二萜内酯类化合物,是植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook f.)中起抗炎免疫及雄性抗生育活性的主要一类化合物。药理试验表明,在这类化合物中,雷公藤内酯酮(triptonide,Ⅰ)反映的两类活性效价的差值最大,其抗生育单剂量效价比免疫抑制活性高约12倍,具有一定的雄性抗生育活性优势,展现了一定的抗生育前景。

谷胱甘肽过氧化物酶4在雷公藤内酯酮激活结肠癌细胞铁死亡中的作用

目的探讨谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)在雷公藤内酯酮(TN)激活结肠癌细胞铁死亡中的作用。方法将体外培养结肠癌细胞株HCT116分为5组,即对照组、TN组、铁死亡抑制剂Feroptosis-1(Fer-1)组、阴性载体组、GPX4过表达组。对照组细胞不作任何处理,其余4组细胞均加入15.0 nmol/L的TN处理48 h,其中Fer-1组用2μmol/L Fer-1预处理2 h,阴性载体组、GPX4过表达组细胞分别用阴性慢病毒载体和GPX4过表达载体转染48 h。比较5组HCT116死亡细胞比例,细胞内谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及GPX4蛋白表达水平。结果5组HCT116死亡细胞比例,细胞内GSH、ROS、MDA含量以及GPX4蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组比较,TN组死亡细胞比例及细胞内ROS、MDA含量均明显增加(均P<0.05),GSH含量及GPX4蛋白表达水平均明显减少(均P<0.05);与TN组比较,Fer-1组死亡细胞比例及细胞内ROS、MDA含量均明显减少(均P<0.05),GSH含量及GPX4蛋白表达水平均明显增加(均P<0.05);与阴性载体组比较,GPX4过表达组死亡细胞比例及细胞内ROS、MDA含量均明显减少(均P<0.05),GSH含量及GPX4蛋白表达水平均明显增加(均P<0.05)。结论TN通过抑制GPX4激活结肠癌细胞铁死亡,从而抑制癌细胞增殖。

雷公藤内酯酮的2DNMR研究

从雷公藤根皮中分离出一种含三个环氧基的二萜内酯酮化合物（Ⅰ），利用一维和二维ＮＭＲ技术，通过对￣１Ｈ和￣（１３）ＣＮＭＲ谱的分析，归属了所有和￣１Ｈ和￣（１３）Ｃ化学位移。

雷公藤内酯酮的极谱行为研究

在不同pH值的相关体系中，雷公藤内酯酮可产生两个还原波，其峰电流和峰电位两者均受酸度的影响；然而，在B-R缓冲体系中，虽然峰电流受溶液酸度的影响，但峰电位基本上保持不变。在pH-5．4的B-R缓冲体系中，雷公藤内酯酮的两峰的峰电位分别为-0．06V和-1．05V（vs．SCE）；两峰的峰电流与雷公藤内酯酮的浓度在3．16×10^-6～3．16×10^-5mol／L的范围内成良好的线性关系。循环伏安研究表明，两波都是不可逆吸附波。

雷公藤内酯酮在大鼠体内的药代动力学和体内处置研究

采用ＲＰ－ＨＰＬＣ法，测定给药后不同时刻大鼠血浆中雷公藤内酯酮的浓度。大鼠ｉｖ０．７，１．４，２．８ｍｇ·ｋ－１雷公藤内酯酮后，血浓数据用ＰＫＢＰ－ＮＩ程序拟合，药物动力学模型为两室开放模型，Ｔ１／２α为０．１６７～０．１９５ｈ，Ｔ１／２β为４．９５～６．４９ｈ，曲线下面积（ＡＵＣ）与剂量成正比，清除率（ＣＬｓ）与剂量无关。非房室模型统计矩计算的结果表明，３剂量平均驻留时间ＭＲＴ为３．２６～５．１４ｈ。大鼠ｉｖ雷公藤内酯酮后，在大鼠体内分布广泛，其中以肺和肝药物浓度最高，心、肾、脾和肌肉次之，宰丸、胃肠道和脑中最低。ｉｖ雷公藤内酯酮后，经尿和胆汁排泄的原型药物较少。雷公藤内酯酮的血浆蛋白结合率约为７５％。

雷公藤内酯酮在大鼠体内过程的研究

雷公藤内酯酮具有抗肿瘤、抗炎和免疫抑制作用。本实验研究了该药在大鼠体内的吸收、分布和排泄，结果表明该药能较快由胃肠道吸收。口服和静注后，全身分布迅速广泛，与组织亲和力强，均以肝中浓度为最高，依次为肺、脾、肾、心、脂肪、胃、血和脑。21d内，口服和静注尿粪总排泄量分别为给药量的83．8％和89．1％，并主要从尿中排泄。尿、粪提取物经TLC分析，基本表明以原药排泄为主。

HPLC-TOF/MS研究雷公藤甲素及雷公藤内酯酮体内代谢产物

目的鉴定甘草干预后雷公藤甲素及雷公藤内酯酮在大鼠体内的代谢物,为其结构改造与新药研发提供参考。方法采用高效液相色谱-飞行时间质谱(HPLC-TOF/MS)法研究甘草干预后雷公藤甲素及雷公藤内酯酮在大鼠尿液中的代谢物。结果发现雷公藤甲素代谢物4个,分子量为376Da代谢物2个,390Da代谢物2个;雷公藤内酯酮代谢物5个,分子量为372Da代谢物1个,374Da代谢物1个,390Da代谢物3个。根据高分辨质谱精确分子量以及药物体内代谢规律鉴定为一羟基化雷公藤甲素(M1,M2,376Da),一羟基一羰基化雷公藤甲素(M3,M4,390Da);一羰基化雷公藤内酯酮(M5,372Da),一羟基化雷公藤内酯酮(M6,374Da),二羟基化雷公藤内酯酮(M7,M8,M9,390Da)。结论一羰基化雷公藤内酯酮(M5)及3个二羟基化雷公藤内酯酮(M7,M8,M9)代谢物为首次报道。

雷公藤内酯酮抑制胃癌细胞恶性行为的作用与机理研究

目的:观察雷公藤内酯酮对人胃癌细胞恶性行为的抑制作用,并初步探讨其作用机理。方法:CCK-8法检测雷公藤内酯酮对BGC 823胃癌细胞增殖能力的影响,软琼脂集落形成法检测雷公藤内酯酮对BGC 823细胞锚定非依赖性生长能力的影响,荧光定量PCR法检测雷公藤内酯酮对BGC 823细胞中piRNA651表达的影响。结果:雷公藤内酯酮显著地抑制了BGC 823细胞的增殖能力,IC50为165.17 nmol/L;当浓度等于或大于100 nmol/L时,雷公藤内酯酮有效地抑制了BGC 823细胞的锚定非依赖性生长能力;雷公藤内酯酮有力地下调了BGC 823细胞中piRNA651的表达。结论:雷公藤内酯酮可以降低胃癌细胞中促癌的非编码RNA的表达,使其恶性行为受到显著抑制,在胃癌的治疗上具有良好的应用价值。

雷公藤内酯酮对小鼠变应性接触性皮炎的抑制作用及其机制探讨

研究了雷公藤内酯酮对小鼠变应性接触性皮大、Ｔ和Ｂ淋巴细胞增殖反应及脾细胞分泌白细胞介素２（ＩＬ－２）活性的影响。发现雷公藤内酯酮１、２、５ｍｇ／ｋｇ腹腔注射（ｉｐ，ｑｄ×５ｄ）能显著抑制二硝基氟苯（ＤＮＦＢ）诱导的变应性接触性皮炎，而对脾细胞ＩＬ－２分泌活性无显著影响。体外试验表明，０．０２、０．１０、０．５０ｍｇ／Ｌ浓度的雷公藤内酯酮能显著抑制刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）及脂多糖（ＬＰＳ）诱导的Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖反应。