雷公藤单体T_(10)对Aβ1-42所致PC12细胞凋亡的抑制作用

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是发病率最高的中枢神经系统退变性疾病。目前AD的病因不清,亦无有效的防治手段,其重要的原因是尚无适宜的AD模型。因此,本实验首先建立了PC12细胞系β淀粉样蛋白(β—amyloid,Aβ)细胞损伤模型,在此基础上,探讨了中药免疫抑制剂雷公藤单体T10对细胞的保护作用及其机制。首先用不同浓度的Aβ(5×10～4、5×10-3 、5×10-2 、5×10-1、5、50 μmol/L)与PC12细胞共孵育48 h,用MTT法检测细胞存活率。选取Aβ致使细胞存活率降低的浓度(0.5、5、50 μmol/L)与PC12细胞共孵育48 h,通过流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。用1×10-11mol/L的T10预孵育PC12细胞48 h后,加入50μmol/L Aβ共孵育48 h,亦用流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度变化。结果显示,Aβ的浓度在50 μmol/L时可使细胞存活率降低至55.1％,凋亡细胞比例显著增加,而1×10-11mol/L的T10可明显降低50μmol/L,Aβ诱导的PC12细胞死亡。50μmol/L。Aβ可促进PC12细胞胞外钙离子内流,1×10-11mol/L的T10对Aβ诱导的胞外钙离子内流有抑制作用。这些观察结果表明T10对Aβ导致的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制Aβ诱导的胞内钙离子浓度升高和细胞凋亡有关。

雷公藤单体T10对过氧化氢所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制的研究

目的以过氧化氢(H2O2)为工具药,建立阿尔茨海默病(AD)的氧化应激模型。观察雷公藤内酯醇(T10)的保护作用并初步探讨其作用机制。方法用不同浓度(25、50、100、200μmol/L)的H2O2处理PC12细胞24h,100μmol/LH2O2处理PC12细胞不同时间(6、12、24及48h),建立细胞损伤模型。用1、10、30nmol/LT10预孵育PC12细胞12h后加入100μmol/LH2O2共同作用24h以探讨T10的保护作用。MTT法检测细胞存活率,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,并采用荧光素酶报告基因方法检测转录因子NF-κB转录活性以探讨T10作用机制。结果随着H2O2浓度增加或作用时间延长,PC12细胞MTT值逐渐降低,而LDH释放量逐渐增加。100μmol/LH2O2处理细胞24h,MTT值明显下降,LDH释放量增加。而1、10、30nmol/L的T10预孵育12h可明显减轻PC12细胞的损伤,提高MTT值并降低LDH释放量。100μmol/LH2O2作用4h可明显增加PC12细胞NF-κB的转录活性,而1、10、30nmol/L的T10预处理12h可显著拮抗NF-κB转录活性的升高。结论T10可以有效的拮抗H2O2对PC12细胞的氧化损伤,作用机制可能与其降低转录因子NF-κB的转录活性有关。