雷公藤红素苷对子痫前期大鼠肝肾细胞凋亡的影响及其保护作用

目的:观察雷公藤红素苷(Cel)对子痫前期(PE)大鼠肝肾细胞凋亡的影响及其保护作用。方法:将50只妊娠SD大鼠随机分为对照(Control)组、PE组、PE+低剂量Cel(PE+L-Cel)组、PE+中剂量Cel(PE+M-Cel)组、PE+高剂量Cel(PE+H-Cel)组5组各10只。通过尾静脉注射脂多糖诱导PE大鼠模型,从孕第14天到孕第20天,PE+L-Cel组、PE+M-Cel组和PE+H-Cel组大鼠每天分别腹腔注射5、10、20 mg/(kg·d)的Cel,Control组和PE组注射等体积的0.9%氯化钠溶液。治疗结束后,分别检测各组大鼠的收缩压(SBP)和尿白蛋白。通过脱氧核糖苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肝、肾组织细胞凋亡。通过免疫组织化学染色检测肝、肾组织中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-9抗体(Caspase-9)的表达。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)和白细胞介素-10(IL-10)水平。采用流式细胞仪检测外周血辅助性T细胞1(Th1)、辅助性T细胞2(Th2)、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)占CD4+的百分比。结果:与Control组比较,PE组SBP、尿白蛋白水平均升高(P<0.05),胎盘组织VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均降低(P<0.05),肝、肾组织细胞凋亡率均升高(P<0.05),肝、肾组织Caspase-9表达均升高(P<0.05),Bcl-2表达均降低(P<0.05),血清IFN-γ、IL-17水平均升高(P<0.05),IL-4、IL-10水平均降低(P<0.05),外周血Th1、Th17占CD4+的百分比均升高(P<0.05),Th2、Treg占CD4+的百分比均降低(P<0.05)。与PE组比较,PE+L-Cel组、PE+M-Cel组、PE+H-Cel组SBP、尿白蛋白水平均降低(P<0.05),胎盘组织VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均升高(P<0.05),肝、肾组织细胞凋亡率均降低(P<0.05),Caspase-9表达均降低(P<0.05),Bcl-2表达均逐渐升高(P<0.05),血清IFN-γ、IL-17水平均降低(P<0.05),IL-4、IL-10水平均升高(P<0.05),外周血Th1、Th17占CD4+的百分比均降低(P<0.05),Th2、Treg占CD4+的百分比均升高(P<0.05)。与PE+L-Cel组比较,PE+M-Cel组、PE+H-Cel组SBP、尿白蛋白水平均降低(P<0.05),胎盘组织VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均升高(P<0.05),肝、肾组织细胞凋亡率均降低(P<0.05),肝、肾组织Caspase-9表达均升高(P<0.05),Bcl-2表达均降低(P<0.05),血清IFN-γ、IL-17水平均降低(P<0.05),IL-4、IL-10水平均升高(P<0.05),外周血Th1、Th17占CD4+的百分比均降低(P<0.05),Th2、Treg占CD4+的百分比均升高(P<0.05)。与PE+M-Cel组比较,PE+H-Cel组SBP、尿白蛋白水平降低(P<0.05),胎盘组织VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05),肝、肾组织细胞凋亡率降低(P<0.05),肝、肾组织Caspase-9表达均升高(P<0.05),Bcl-2表达均降低(P<0.05),血清IFN-γ、IL-17水平均降低(P<0.05),IL-4、IL-10水平均升高(P<0.05),外周血Th1、Th17占CD4+的百分比降低(P<0.05),Th2、Treg占CD4+的百分比升高(P<0.05)。结论:Cel可减轻PE大鼠症状并抑制肝肾细胞凋亡,Cel可能通过纠正PE大鼠Th1/Th2及Th17/Treg细胞失衡来发挥治疗作用。

IL13修饰雷公藤红素/人参总皂苷脂质体的制备及其抑制BT325细胞作用

目的制备白介素13(IL13)修饰雷公藤红素/人参总皂苷脂质体,并评价其对人脑胶质瘤细胞BT325的抑制作用。方法薄膜分散法制备脂质体,1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)水相缩合法将IL13锚定在粒子表面,考察其形态、粒径、Zeta电位、IL13修饰密度的质量分数、包封率、体外释放。以药脂比(雷公藤红素/卵磷脂)、胆脂比、水合时间、IL13投料比为影响因素,粒径、Zeta电位、聚合物分散性指数(PDI)为评价指标,正交试验优化制备工艺。荧光定性和胞内药物定量法评价BT325细胞摄取行为,MTT法和流式细胞仪法分别测定脂质体抗肿瘤和诱导细胞凋亡作用。结果最佳条件为药脂比1∶20,胆脂比1∶4,水合时间45 min,IL13投料比0.6%。所得脂质体均一圆整,粒径分布较窄,平均粒径(118.3±3.2)nm,Zeta电位(-38.3±3.4)m V,IL13修饰密度的质量分数0.3%,雷公藤红素和人参总皂苷包封率分别为(82.3±2.9)%和(71.2±3.2)%,24 h累计释放度分别为(42.5±4.9)%和(24.3±2.1)%。它可显著促进BT325细胞摄取,IC50为(2.8±0.3)μg/m L(以雷公藤红素计),低于IL13未修饰脂质体和物理混合物(雷公藤红素-人参总皂苷)。当雷公藤红素质量浓度为10μg/m L时,它还能诱导84.3%的BT325细胞发生凋亡。结论 IL13修饰雷公藤红素/人参总皂苷脂质体在体外表现出明显的人脑胶质瘤细胞BT325靶向性和体外抗肿瘤作用。