雷帕霉素的水解行为及对4种非靶标生物的急性毒性

雷帕霉素为大环内脂类抗生素药剂,对多种人类疾病有效,近年发现其对多种植物病原真菌也有较好的抑制活性,有望开发为微生物源农药用于植物病害的防治,而目前关于雷帕霉素的水解行为及其对非靶标生物的急性毒性还未见报道。为评价雷帕霉素的水解行为及其对非靶标生物的急性毒性,本研究通过室内模拟试验,测定了雷帕霉素在不同pH值、温度、初始浓度及光源中的水解特性,同时测定了其对家蚕、意大利工蜂、斑马鱼及赤子爱胜蚯蚓4种非靶标生物的急性毒性。水解试验结果表明:碱性环境、紫外光照及高温有利于雷帕霉素的水解。当其初始质量浓度为10 mg/L时,半衰期分别为66.63、38.93及77.00 h;初始质量浓度为50 mg/L时,半衰期分别为144.38、105.00及165.00 h。急性毒性试验结果表明:雷帕霉素对家蚕和斑马鱼的96 h-LC_(50)值分别为386.46和3.50 mg/L(有效成分,下同);对意大利工蜂的急性经口毒性48 h-LD50值为8.95μg/bee,急性接触毒性48 h-LD50值为16.79μg/bee;对赤子爱胜蚯蚓的14 d-LC_(50)值为223.81 mg/kg。按照“化学农药环境安全评价准则”(GB/T 31270—2014)的毒性等级划分标准,雷帕霉素对家蚕、斑马鱼、赤子爱胜蚯蚓的急性毒性分别为“低毒”、“中毒”和“低毒”,对意大利工蜂的急性经口毒性为“中毒”,急性接触毒性为“低毒”。研究表明,雷帕霉素属于易降解性药剂,对家蚕、意大利工蜂、斑马鱼及赤子爱胜蚯蚓4种非靶标生物安全。

雷帕霉素干预TRALI大鼠肺组织mTOR信号通路下游蛋白p70s6k/p-p70s6k表达与肺病理变化研究

目的建立SD大鼠输血相关急性肺损伤(TRALI)模型,探讨雷帕霉素干预TRALI大鼠肺组织m TOR信号通路下游蛋白p70s6k/p-p70s6k表达与对肺损伤病理变化的影响。方法 SD大鼠30只随机分成3组(10只/组),TRALI模型组:LPS 2 mg/kg腹腔注射+人血浆5 m L/kg静脉注射;雷帕霉素干预组(Rapa组):Rapa 10 mg/kg连续3 d灌胃+TRALI模型;对照组:假手术处理。观察各组大鼠临床症状、肺组织病理变化及p70s6k/p-p70s6k蛋白表达情况。结果 TRALI大鼠的主要临床表现为呼吸困难及内毒素样等症状,症状出现率TRALI组较对照组明显增加(P<0.05),Rapa组较TRALI组无明显变化(P>0.05)。TRALI组、Rapa组和对照组大鼠肺损伤病理综合评分分别为9.30±2.21 vs 6.60±1.78 vs 2.60±1.82(P<0.01)。TRALI组、Rapa组和对照组大鼠肺组织的磷酸化蛋白p-p70s6k表达的Western blot条带半定量结果分别为0.566 4±0.032 9 vs 0.114 2±0.006 4 vs 0.438 4±0.022 1(P<0.01)。结论 TRALI病程中m TOR信号通路明显活化,应用Rapa可有效抑制m TOR信号通路过度活化状态,并能部分缓解肺组织病理损伤程度。

TOR抑制剂雷帕霉素对荔枝霜疫霉生长发育及自噬的影响

【目的】明确TOR(Target of Rapamycin)信号通路抑制剂雷帕霉素对荔枝霜疫霉生长发育、致病性及自噬的影响。【方法】采用不同浓度的TOR抑制剂雷帕霉素处理荔枝霜疫霉菌,观察不同浓度雷帕霉素对荔枝霜疫霉的菌丝生长及形态、孢子囊产生数量、游动孢子释放和致病性的影响,并通过丹酰戊二胺(MDC)染色观察细胞自噬。【结果】雷帕霉素处理后,荔枝霜疫霉的菌丝生长明显受到抑制,半最大效应浓度(EC 50)值为29.18 ng·mL^(−1),随着雷帕霉素浓度的增加,菌丝生长抑制不同程度增加;当雷帕霉素深度为25.0 ng·mL^(−1)时,菌落生长抑菌率为45.3%,孢子囊产生数量为8.0×10^(4)个·mL^(−1),仅为对照组的27.9%;雷帕霉素处理能促进游动孢子的释放;同时严重影响荔枝霜疫霉菌的致病性。通过自噬体观察表明,雷帕霉素处理后荔枝霜疫霉菌丝中自噬体的数量显著增加,促进荔枝霜疫霉的细胞自噬。【结论】TOR抑制剂雷帕霉素通过调控荔枝霜疫霉的细胞自噬,从而影响病菌的生长发育及致病性,研究结果为荔枝霜疫霉的致病机制提供科学依据。

雷帕霉素抑制胆囊癌GBC-SD细胞的生长和转移

目的:研究雷帕霉素(rapamycin)对胆囊癌GBC-SD细胞生长和转移的影响,探讨雷帕霉素治疗胆囊癌的临床应用前景。方法:采用MTT法检测不同浓度(12.5、25、50 nmol/L)的雷帕霉素对胆囊癌细胞增殖的影响,以流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素对细胞凋亡和细胞周期的变化,Transwell小室检测雷帕霉素对细胞迁移能力的影响,利用Western blotting检测胆囊癌细胞中雷帕霉素哺乳动物靶标(mammalian target of rapamycin,mTOR)及其磷酸化p-mTOR水平。结果:雷帕霉素可显著抑制胆囊癌GBC-SD细胞中mTOR的磷酸化,但对mTOR表达无影响。雷帕霉素显著抑制胆囊癌细胞的生长,并呈剂量依赖性抑制(P<0.01)。雷帕霉素可引起胆囊癌细胞周期G1/S阻滞和细胞凋亡;可显著抑制胆囊癌细胞的转移(P<0.01)。结论:雷帕霉素能显著抑制胆囊癌细胞生长及转移,其机制可能与抑制p-mTOR通路、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。

绿盲蝽雷帕霉素靶蛋白的克隆、抗体制备及在蜕皮激素诱导下的应答

【目的】克隆绿盲蝽(Apolygus lucorum)雷帕霉素靶标全长基因(AlTOR),研究AlTOR时空表达特性及在外源蜕皮激素(20E)诱导下的应答响应,进一步获得原核表达的重组蛋白及制备多克隆抗体,分析该抗体的特异性,为后续研究AlTOR蛋白功能打下基础。【方法】RACE法克隆AlTOR基因序列全长,qRT-PCR分析AlTOR表达特性以及在20E及其抑制剂U73122诱导下的应答响应;将含有AlTOR序列T载体经EcoR I及Xho I双酶切,构建原核表达载体pCzn1-AlTOR,经20℃、0.5 mmol·L-1 IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,以获得AlTOR重组蛋白,最后再通过免疫,制备AlTOR蛋白多克隆抗体,Western blot评价该抗体的特异性。【结果】AlTOR的开放阅读框编码包含435个氨基酸,具有典型的TOR基因序列特征,即SIN1结构域、高度保守的CRIM结构域及PH域;AlTOR在绿盲蝽不同日龄、不同组织中均有表达,且在1日龄以及脂肪体中表达量最高;20E可诱导绿盲蝽不同日龄若虫期AlTOR的表达,同时也能诱导成虫头、翅、卵巢和脂肪体中AlTOR表达上调,分别上调200.00%、118.89%、20.53%和60.82%,而U73122在中肠和卵巢中会显著抑制AlTOR的表达。经双酶切的重组克隆载体可成功亚克隆到pCzn1载体上,命名为pCzn1-AlTOR;IPTG诱导的重组质粒可特异性表达一个约36 kD的蛋白,且主要以包涵体形式存在;经Ni-IDA亲和层析纯化后,仅在36 kD附近有一条明显的特异性条带。进一步免疫及间接ELISA方法确定抗血清对TOR蛋白的效价,Western blot分析表明制备的多克隆抗体可以特异性与AlTOR重组蛋白及绿盲蝽3龄若虫总蛋白结合,说明制备的AlTOR多克隆抗体特异性较好,可以用于后续的蛋白研究。【结论】AlTOR在绿盲蝽体内的表达谱显示出发育阶段特异性和组织特异性;20E及其抑制剂诱导后,AlTOR呈现出相反的应答反应;本研究获得的AlTOR重组蛋白的多克隆抗体具有高特异性。

雷帕霉素抗阿尔兹海默病的机制研究

大环内酯类抗生素雷帕霉素主要作为免疫抑制剂用于器官移植,近年来亦有许多研究表明它可通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶标蛋白(m TOR)、促进自噬等途径发挥神经保护功能。本文就雷帕霉素抗阿尔兹海默病的分子机制研究进展进行综述,主要介绍其在抗衰老、减轻认知损伤、减少β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集、促进Aβ的清除、减少Tau蛋白过度磷酸化、抑制NO大量产生以及抗阿尔兹海默的其他神经保护作用等方面的作用。

鱼类雷帕霉素靶蛋白信号通路生物学功能的研究进展

雷帕霉素靶蛋白(TOR)信号通路是营养、化学和运动等因素导致细胞生长和分化的一个关键信号通路。本文介绍了到目前为止TOR信号通路的生物学功能以及其在水产动物中的研究进展,主要包括TOR信号通路对蛋白质合成代谢、糖代谢、脂代谢、摄食调控以及机体免疫、抗氧化调控的影响,同时阐述了胰岛素抵抗机制及精氨酸对团头鲂免疫与抗氧化信号通路的调控机制,以为进一步全面研究TOR信号通路在水产动物中的应用提供参考。

雷帕霉素对短管赤眼蜂生物学特性的影响

研究以携带Wolbachia的短管赤眼蜂为试验材料,使用雷帕霉素喂食短管赤眼蜂,为明确雷帕霉素靶蛋白(TOR)途径受抑制下的短管赤眼蜂生物学相关特性。试验采用无水乙醇为溶剂设置200、400、600、800、1000、2000μmol·L^(-1)不同浓度雷帕霉素浓度连续喂食短管赤眼蜂3代。结果表明,雷帕霉素显著降低短管赤眼蜂寄生力,表现在各个浓度的F0代、F1代和F2代均有不同程度的降低,F1代降低最显著。400、600、800和2000μmol·L^(-1)浓度下显著降低了F1代蜂的寿命;400~800μmol·L^(-1)的雷帕霉素显著降低F3代的羽化率;各世代雷帕霉素处理对发育历期、子代蜂存活时间无显著影响;雷帕霉素没有改变孤雌产雌生殖短管赤眼蜂的生殖方式。

自噬通路中mTOR和Beclin1与肿瘤关系的研究进展

细胞自噬是进化上保守的降解胞内受损的细胞器、异常蛋白质、外源微生物的溶酶体依赖代谢途径。研究证实,自噬与多种肿瘤细胞的恶性转化和肿瘤细胞的生长有关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)和自噬相关基因Beclin1可通过调节细胞自噬活性而在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用。目前,有关肿瘤细胞自噬性死亡的研究受到越来越多人的关注,它很可能成为肿瘤精确治疗的新靶点。深入研究自噬通路中相关因子,如m TOR和beclin1的具体作用条件及其机制,为基于自噬调节治疗肿瘤新方法提供更多的理论基础。本文现就对自噬通路中m TOR、Beclin1在肿瘤发生及发展中的作用及其治疗的研究进展作一简要概述。

慢性阻塞性肺疾病的综合治疗靶标:肺衰老

慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺),是一个全球性的健康问题,其发病率和死亡率都非常高,尤其是在老年患者中。慢阻肺是一种慢性气道炎症疾病,也是一种典型的肺加速衰老的疾病,表现出所有衰老特征,包括端粒缩短、细胞衰老、磷酸肌醇-3-激酶-雷帕霉素靶蛋白(PI3K-mTOR)信号激活、自噬受损、线粒体功能障碍、干细胞衰竭、表观遗传变化、异常microRNA分布、免疫衰老以及衰老相关的分泌表型(SASP)等外源性和内源性氧化应激是慢阻肺细胞衰老的始动因素和关键机制。了解慢阻肺气道炎症及氧化应激等与肺衰老的关系,有助于在现有治疗基础上更好地综合防治慢阻肺并开发新的治疗靶标。

酵母TOR信号转导途径

TOR(target of rapamycin)是真核细胞中一种高度保守的与磷脂酰肌醇激酶相关的蛋白激酶(PIKK),它是免疫抑制剂/抗癌药物雷帕霉素(rapamycin)的靶物质。TOR是细胞生长的中枢控制因子,外界营养因素通过TOR的作用控制酵母、果蝇和哺乳动物细胞的生长。TOR根据细胞环境的营养条件做出相应的应答,参与调控蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶的活性,从而控制与蛋白质合成和基因转录相关基因的表达。现对酵母细胞中TOR信号转导途径的研究进行简明的阐述。

植物雷帕霉素靶蛋白(TOR)信号通路研究进展

雷帕霉素靶蛋白(TOR)是一种存在于真核生物中进化保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,通过调节细胞周期、蛋白质合成、细胞能量代谢等多种途径发挥重要的生理功能。作为真核生物生长发育与免疫应答中最重要且高度保守的宏观调控者之一,TOR已成为近年生物学领域一个新的研究热点。本文主要阐述了TOR在生物中高度保守和对雷帕霉素敏感的特性,及其在拟南芥(Arabidopsis thaliana)、玉米(Zea mays)、豌豆(Pisum sativum)等植物中对生长、SnRK-TOR信号通路、糖代谢及防御反应的影响。

营养素和激素通过哺乳动物雷帕霉素靶标信号通路调控乳蛋白合成

营养物质和内分泌虽能影响奶牛乳蛋白的合成,但至今这种调控作用的分子机制仍未完全阐明。本研究的目的是测定营养物质和激素是否是通过哺乳动物雷帕霉素靶标(mTOR)信号通路调控乳蛋白合成。试验从泌乳奶牛乳腺组织中分离乳腺腺泡,用含有氨基酸(AA)、葡萄糖和乙酸(GA)或催乳激素(HIP)以其混合物的培养基处理腺泡,然后测定乳蛋白合成速率和mTOR信号通路中各元件的磷酸化状态。结果发现,培养基添加AA后可使乳蛋白合成率提高50%,而单独添加GA或HIP不影响乳蛋白合成。HIP可以增强AA调控乳蛋白合成,但GA没有增强AA的这种作用。HIP可诱导蛋白激酶B发生磷酸化,而且当AA或GA存在时,HIP能增强这种磷酸化作用。AA和HIP对乳蛋白合成的促进作用与mTOR的底物磷酸化有关,即与p70核糖体蛋白S6激酶-1和真核起始因子4E(eIF4E)结合蛋白-1(4E-BP1)的磷酸化有关。结果表明,营养物质和激素可能通过mTOR信号通路调控乳蛋白合成。

过量表达蛋白激酶YPK1使酵母细胞对高盐胁迫的高度敏感依赖于雷帕霉素靶蛋白

YPK1是酵母中和哺乳动物蛋白激酶SGK同源的一种丝氨酸3苏氨酸蛋白激酶,在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)生理调节中有重要的作用,和酵母细胞壁的完整性、细胞骨架中肌动蛋白极性、细胞内吞作用、细胞在氮源缺乏和营养条件调节下细胞内部的翻译情况密切相关。【目的】为了深入研究YPK1蛋白激酶的细胞功能以及在细胞信号传导中的作用,【方法】我们构建了过量表达YPK1的高拷贝质粒,研究了过量表达YPK1的酵母细胞在盐胁迫条件下的生长情况,【结果】发现过量表达YPK1会导致酵母细胞对盐胁迫高度敏感,并且这种敏感性依赖于TOR1的存在。【结论】我们的研究结果首次初步揭示YPK1与细胞盐胁迫应答的关系,并初步证明YPK1的功能充分发挥需要TOR1的参与。

雷帕霉素预处理延缓牡丹‘洛阳红’切花衰老的生理效应

为研究雷帕霉素靶标激酶TOR在牡丹开花衰老过程中的生理作用,以牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)‘洛阳红’切花为试材,用0.01μmol·L^-1雷帕霉素预处理2 h后瓶插,并测定瓶插寿命、能量物质含量、糖分含量、乙烯释放速率、呼吸速率、MDA含量以及Ps TOR、Ps Sn RK1和Ps HXK1表达量变化。结果表明:雷帕霉素预处理可延长该牡丹切花的瓶插最佳观赏期和增大花朵的最大花径;另外,雷帕霉素预处理还可提高花瓣可溶性糖含量和能荷积累,降低呼吸耗能和MDA含量,并下调瓶插初期PsSnRK1和PsHXK1的表达水平,上调瓶插后期PsTOR和PsSnRK1的表达水平。说明雷帕霉素可通过TOR途径调控能量感知,延缓牡丹切花的开放和衰老进程,进而提高瓶插品质。

17β-雌二醇对髁突软骨细胞增殖的影响机制

目的研究17β-雌二醇(E2)对髁突软骨细胞增殖调节的影响,并初步探讨磷酸化雷帕霉素哺乳动物靶标(p-mTOR)在该调节过程中发挥的作用。方法取6周龄雌性SD大鼠髁突软骨细胞进行原代培养,从第二代分别给予不同浓度的E2和/或雷帕霉素(RAPA);CCK8法检测不同给药条件下,髁突软骨细胞在第24、48、72小时的增殖情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测软骨细胞中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、自噬相关基因6(Beclin-1)、自噬相关基因5(ATG-5)、Ⅱ型胶原(COLⅡ)相关基因的表达;蛋白印迹(Western blot)法检测软骨细胞中ERα、ERβ、Beclin-1、脂质化轻链蛋白3B(LC3-Ⅱ)、p-mTOR相关蛋白的表达及加入雌激素受体拮抗剂后各组细胞p-mTOR的表达。结果E2可显著促进体外培养的髁突软骨细胞增殖,并在10-8 mol·L^(-1)浓度下达到峰值;RAPA可以显著抑制细胞增殖。10-8 mol·L^(-1) E2上调软骨细胞ERα、COLⅡ基因表达(P<0.01)和ERα、p-mTOR蛋白表达(P<0.05),下调软骨细胞Beclin-1、ATG-5基因表达(P<0.05)和Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达(P<0.05);RAPA可以上调细胞Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平(P<0.01),下调p-mTOR的表达(P<0.01);ERα拮抗剂可以显著降低细胞中p-mTOR的表达(P<0.01)。结论E2在浓度为10-8 mol·L^(-1)时可有效通过ERα-p-mTOR途径激活mTOR的磷酸化,抑制自噬,提高髁突软骨细胞增殖速度。

美国科学家发现基因调控新机制

美国华盛顿大学医学院的研究人员发现了能够调控一大组群基因的新机制。当引用酵母对一种新型抗癌药物进行实验时,研究小组发现一种能使酵母基因组中的大多数基因同时静默,而不是某一个基因静默的机制。

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨左归丸对^(60)Co-γ射线损伤大鼠卵泡凋亡调控作用

目的以磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路为靶点,探讨左归丸对^(60)Co-γ射线早衰大鼠的保护作用。方法采用^(60)Co-γ射线一次性照射(6.0 Gy,LD_(40))性成熟雌性SD大鼠60只,随机分成模型组、补佳乐组(0.18 g·kg^(-1)·d^(-1))、补佳乐(0.09 g·kg^(-1)·d^(-1))+左归丸高剂量(23.625 g·kg^(-1)·d^(-1))组、左归丸高剂量(23.625 g·kg^(-1)·d^(-1))组、左归丸中剂量(9.45 g·kg^(-1)·d^(-1))组和左归丸低剂量(4.725 g·kg^(-1)·d^(-1))组,每日1次,治疗21 d,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清[卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二醇(E_(2))],苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢的组织形态变化,原位末端标记法(TUNEL)检测颗粒细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织磷酸化(p)-PI3K、p-Akt、p-mTOR和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达结果。结果与正常组比较,模型组大鼠血清FSH显著上升(P<0.01),E2明显下降(P<0.05),卵巢早期卵泡和黄体数量减少(P<0.01);颗粒细胞凋亡率显著增加(P<0.01);卵巢组织p-PI3K、p-Akt、p-mTOR和Bcl-2蛋白表达明显下降,Bax蛋白表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,各给药组干预后卵巢内早期卵泡数量增加,颗粒细胞凋亡率降低,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR和Bcl-2蛋白表达有增加趋势,Bax蛋白表达有下降趋势,尤以补佳乐+左归丸高剂量组差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论左归丸对辐射损伤卵巢的保护作用机制可能是通过活化卵巢组织PI3K/Akt/mTOR蛋白表达,增加Bcl-2蛋白量和抑制Bax蛋白表达。

TOR途径对玉米大斑病菌发育调控作用的研究

大斑刚毛球腔菌(Setosphaeria turcica)引起的玉米大斑病(Northern corn leaf blight)是危害玉米的一种重要真菌性叶部病害。大量研究表明,真菌病原物的生长发育及致病性受多种信号转导途径的调控,其中TOR是雷帕霉素的作用靶标,它既是一种蛋白激酶,也是一种信号转导分子,在调控细胞生长方面起核心作用。本试验用雷帕霉素处理玉米大斑病菌菌株,观察其菌落生长、菌丝形态、产孢量、附着胞形成及穿透情况。结果表明,当雷帕霉素处理浓度为25 ng·mL-1时,菌落直径为1.65 cm,抑菌率达到81.9%,雷帕霉素对菌丝体生长的半抑制浓度IC50为0.665 ng·mL-1;病菌产孢量为0.1×104个·mL-1,仅为对照组的10%。随着雷帕霉素浓度的增加,分生孢子萌发、附着胞形成及穿透能力均被不同程度抑制,但形态未出现异常。qRT-PCR分析表明,雷帕霉素处理后,StTOR、StTAP42及PP2A结构亚基StPP2A-A和调节亚基StPP2A-B的表达均显著下调。第5 d时,分别降低至甲醇对照组的约42%、38%、47%和42%;第10 d时,分别降低至甲醇对照组的约36%、31%、26%和21%,而PP2A的催化亚基StPP2A-C表达量变化不显著,表明雷帕霉素在抑制TOR活性的同时,还可以抑制StTOR、StTAP42及PP2A结构亚基和调节亚基的转录。本研究为深入探究TOR信号通路对玉米大斑病菌发育过程的调控作用提供了依据。

柚皮素对甲状腺癌细胞凋亡、自噬的影响及其与AMPK/mTORC1通路的关系

背景与目的:柚皮素(NAR)是天然的黄酮类化合物,能够抑制宫颈癌、胃癌、舌鳞癌及肝癌细胞的生长,但其对甲状腺癌细胞的作用尚不明确。本实验探讨NAR对甲状腺细胞的影响,并初步研究其作用机制,以期为甲状腺癌的药物研发提供理论基础。方法:不同浓度的NAR处理甲状腺癌ACT-1细胞不同时间后,用MTT法检测细胞存活率,以观察NAR对ACT-1细胞的时间、浓度效应并计算IC_(50)值。在以上实验基础上,选择适合的浓度的NAR与适合的时间处理ACT-1细胞,然后分别采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;绿色荧光蛋白(GFP)标记质粒转染检测自噬小体变化;Western blot法检测自噬相关蛋白(LC3 I、LC3 II、p62)以及AMPK/mTORC1通路相关蛋白表达的变化,以及AMPK抑制剂对NAR作用的影响。结果:NAR能明显抑制ACT-1细胞的存活,呈时间与浓度依赖性(均P<0.05),其12、24和48 h的IC_(50)值分别为85.65、50.12、38.94μg/mL。选用25、50、100μg/mL的NAR处理ACT-1细胞24 h后,细胞凋亡率、自噬小体数量、LC3 II/LC3 I和p-AMPK/AMPK蛋白表达明显升高,p62和p-mTORC1/mTORC1蛋白表达明显降低,均呈浓度依赖性(均P<0.05)。用100μg/mL NAR同时加入25μmol/L AMPK抑制剂后处理ACT-1细胞后,NAR的以上作用以及升高凋亡效应蛋白caspase-3的作用被明显抑制(均P<0.05)。结论:NAR能够抑制甲状腺癌ACT-1细胞增殖,诱导凋亡,这可能与其调控AMPK/mTORC1信号通路,增强自噬相关。