哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路与调节性T细胞营养代谢调控机制研究进展

肿瘤微环境中发生的代谢重编程会影响T细胞的代谢特征,诱导免疫抑制促进肿瘤免疫逃逸。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在调控各种免疫细胞的不同功能方面发挥着重要作用。本文主要回顾了mTOR信号调节细胞能量代谢进程的分子机制,以及不同营养环境下mTOR信号的活化状态。此外,还总结了目前研究中mTOR信号在调节性T细胞(Treg)代谢和功能过程中的作用,评估了mTOR作为临床免疫治疗靶点的潜力和目前应用的挑战性。

鳖甲煎丸对肝癌大鼠黏着斑激酶/雷帕霉素靶蛋白通路的影响

目的:探讨鳖甲煎丸对肝癌模型大鼠肝组织病理特征及FAK/mTORC1通路的影响。方法:HepG2(1×10^(7))细胞注射于大鼠右腋皮下,建立肝癌模型,分为模型组、5-氟尿嘧啶组、鳖甲煎丸低剂量组、鳖甲煎丸高剂量组,另设正常组。各药物组给予相应药物灌胃,持续给药4周,正常组、模型组给予等体积的0.9%氯化钠溶液。实验结束后,测定肝癌组织重量、肝癌组织体积、肝癌组织抑瘤率、肝癌FAK、mTORC1水平、肝癌VEGFR-2、VEGF、IL-4、IL-8、TNF-α蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组肝癌组织重量、肝癌组织体积、肝癌组织抑瘤率、VEGFR-2、VEGF、IL-4、IL-8、TNF-α蛋白、肝癌FAK、mTORC1 mRNA和蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型组比较,5-氟尿嘧啶组、鳖甲煎丸低剂量组、鳖甲煎丸高剂量组肝癌组织重量、肝癌组织体积、肝癌组织抑瘤率、VEGFR-2、VEGF、IL-4、IL-8、TNF-α蛋白、肝癌FAK、mTORC1 mRNA和蛋白表达降低(均P<0.05)。鳖甲煎丸高剂量组肝癌组织重量、肝癌组织体积、肝癌组织抑瘤率、VEGFR-2、VEGF、IL-4、IL-8、TNF-α蛋白、肝癌FAK、mTORC1 mRNA和蛋白表达低于鳖甲煎丸低剂量组(均P<0.05)。结论:鳖甲煎丸对大鼠肝癌具有明显抑制作用,能减轻大鼠肝癌所致的病理损伤,其机制可能与鳖甲煎丸抑制肝癌FAK、mTORC1表达,诱导肝癌细胞凋亡,降低炎症反应有关。

肝细胞DEP结构域蛋白5/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1信号轴在非酒精性脂肪肝形成中的作用

目的建立肝细胞Dishevelled/Egl-10/pleckstrin(DEP)结构域蛋白5(DEPDC5)基因(Depdc5)肝细胞特异性敲除小鼠高脂喂养模型,探讨DEPDC5/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号轴对非酒精性脂肪肝的调控。方法构建肝细胞特异性敲除Depdc5^(flox/flox)模型;Alb-Cre小鼠(LKO),Depdc5^(flox/flox)小鼠(Loxp)作为对照。32只2~3月龄雄性小鼠随机分为高脂LKO组、高脂Loxp对照组、高脂+雷帕霉素LKO组及高脂+雷帕霉素Loxp对照组,每组8只。检测肝脏血清生物化学指标、脂质含量、蛋白、mRNA及病理切片,采用GraphPad Prism 8软件进行统计学分析。结果高脂喂养导致LoxP小鼠肝脏脂肪变性,LKO小鼠肝脏脂肪变性减轻但合并出现肝损伤;雷帕霉素抑制了Depdc5敲除引起的mTORC1通路激活,显著改善Loxp小鼠肝脏脂肪变性,并改善LKO小鼠的肝损伤。结论Depdc5基因敲除能够保护高脂喂养小鼠肝脏脂肪变性,雷帕霉素可以改善DEPDC5缺失诱发的肝损伤。

基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路探讨大株红景天注射液对缺氧H9C2心肌细胞损伤的影响

目的探讨大株红景天注射液对缺氧H9C2心肌细胞的影响及保护机制。方法取H9C2心肌细胞缺氧造模,实验分为正常组、模型组、大株红景天注射液组(简称:SI组)、尼可地尔组。采用RT-qPCR检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的mRNA;免疫蛋白印记法检测PI3K、AKT、mTOR、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果与模型组比较,SI组及尼可地尔组PI3K、AKT、mTOR的mRNA表达均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,SI组和尼可地尔组PI3K、AKT、mTOR蛋白表达无明显差异(P>0.05)。经磷酸化处理后,与模型组比较,SI组和尼可地尔组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的蛋白表达显著下降(P<0.05);与尼可地尔组相比,SI组p-PI3K、p-AKT的蛋白表达下降(P<0.05),p-mTOR的蛋白含量无明显差异(P>0.05)。结论大株红景天注射液通过下调PI3K/AKT/mTOR通路,起到了抑制缺氧心肌细胞过度自噬,改善心肌细胞损伤的作用。

雷帕霉素靶蛋白途径对植物生长发育及抗病防御的影响

在真核生物领域,雷帕霉素靶蛋白的结构和功能展现了显著的保守性。其在植物体内作为信号与代谢网络的核心调节因子,对多种信号(包括营养、生长因子、能量、病原体等环境因子)作出响应,协调细胞的生长发育与抗病防御过程。该文深入探讨了植物TOR途径在胚胎发育、幼苗生长、叶片扩展、开花、衰老等生命周期各阶段及抗病防御过程中所发挥的调控作用。该研究成果不仅对于植物TOR途径未来的研究方向及其在农业生产中的应用具有重要的理论与实践价值,同时也为寻找新型植物抗性基因、实施新的抗病策略及培育优质高产作物提供了关键的参考依据。

罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖、侵袭及雷帕霉素靶蛋白/缺氧诱导因子1α信号通路的影响

目的:探究罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖、侵袭及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/缺氧诱导因子1α(HIF-1α)信号通路的影响。方法:将MG63细胞分为对照组、罗哌卡因低浓度组、罗哌卡因中浓度组、罗哌卡因高浓度组。采用平板克隆法测定MG63细胞平板克隆率,采用免疫组化法测定MG63细胞Ki-67表达,采用Transwell法测定MG63细胞侵袭、迁移能力,采用Western blot法测定MG63细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、mTOR、HIF-1α蛋白表达。结果:与对照组比较,罗哌卡因低、中、高浓度组MG63细胞克隆形成率、Ki-67阳性率、侵袭细胞数、迁移细胞数以及MMP-2、MMP-9、mTOR、HIF-1α蛋白表达降低(均P<0.05)。与罗哌卡因低浓度组比较,罗哌卡因中、高浓度组MG63细胞克隆形成率、Ki-67阳性率、侵袭细胞数、迁移细胞数以及MMP-2、MMP-9、mTOR、HIF-1α蛋白表达降低(均P<0.05)。与罗哌卡因中浓度组比较,罗哌卡因高浓度组MG63细胞克隆形成率、Ki-67阳性率、侵袭细胞数、迁移细胞数以及MMP-2、MMP-9、mTOR、HIF-1α蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:罗哌卡因可抑制MG63细胞增殖、侵袭、迁移,并可抑制mTOR/HIF-1α通路的激活。

甘草苷对口腔鳞状细胞癌细胞磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路的影响

目的 探讨甘草苷对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(MTOR)信号通路的影响。方法 提取114例OSCC患者的肿瘤细胞进行体外培养,调整细胞状态至对数生长期备用。采用CCK8法检测不同浓度(0、10、20、30、40μmol/L)甘草苷提取液对对数生长期的OSCC细胞存活率的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测OSCC细胞中PI3K、AKT、MTOR蛋白的相对表达量;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PI3K、AKT、MTOR mRNA的相对表达量。结果 随着甘草苷提取液浓度的逐渐增加,OSCC细胞存活率逐渐下降,PI3K、AKT、MTOR蛋白及mRNA相对表达量均逐渐下降(P﹤0.05)。结论 甘草苷可能通过抑制OSCC细胞PI3K、AKT、MTOR蛋白及mRNA的表达抑制OSCC细胞生长,进而对OSCC产生抑制效果。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂在器官移植受者病毒感染中的作用

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂是目前器官移植受者术后常用的免疫抑制药,主要包括西罗莫司(雷帕霉素)和依维莫司。mTOR抑制剂除通过抑制T细胞增殖达到免疫抑制作用外,还具有抗衰老、抗肿瘤、抗病毒感染等多种潜在作用。病毒感染是器官移植术后最常见并发症之一,目前抗病毒治疗的方法较为有限且疗效欠佳。本文对mTOR通路在病毒感染中的作用、常见mTOR抑制剂的作用机制及mTOR抑制剂在不同病毒感染中的作用进行综述,旨为mTOR抑制剂在器官移植受者的临床应用及后续研究提供参考。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在小鼠卵母细胞成熟过程中的表达及作用

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种Ser/Thr激酶,属于PIKK超家族,对调节细胞周期、蛋白质合成等具有重要作用,是细胞生长、增殖、分化、凋亡的中心调控器,但在哺乳动物卵母细胞中的研究还未见报道.以小鼠卵母细胞为研究对象,采用免疫荧光为主要研究方法,对mTOR在小鼠卵母细胞中的表达进行研究,并通过mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对卵母细胞进行处理,对mTOR在卵母细胞成熟过程中的作用进行研究.结果显示:小鼠卵母细胞成熟过程中,生发泡(germinal vesicle,GV)期mTOR主要集中在核膜处表达,生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)后mTOR伴随染色体分布,第二次减数分裂中期(second metaphase,MⅡ期)mTOR伴随纺锤体分布;雷帕霉素处理后,小鼠卵母细胞的成熟受到抑制,且这种抑制作用具有浓度依赖性,同时其mTOR的表达部位和形态也发生变化.研究表明,在小鼠卵母细胞成熟过程中,mTOR在各个时期的表达及分布具有阶段特异性,并对小鼠卵母细胞GVBD的发生和第一极体的排放都具有重要作用.

IL-37通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化而诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡和自噬

目的观察白细胞介素37(IL-37)诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡和自噬的机制。方法体外培养SMMC-7721细胞,SMMC-7721细胞分为处理组和对照组,处理组分别予以不同剂量(50、100、200)ng/mL的重组人IL-37(rh IL-37)。CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡和自噬相关蛋白Bax、Bcl-2、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和beclin 1及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的水平,透射电子显微镜观察自噬体的形成情况。结果 IL-37可抑制SMMC-7721肝细胞癌细胞的增殖、诱导SMMC-7721细胞凋亡和自噬;IL-37处理组Bax、LC3和beclin 1水平增加,Bcl-2水平降低,mTOR的磷酸化被抑制;可见明显自噬体形成。结论 IL-37可诱导肝细胞癌SMMC-7721细胞发生凋亡和自噬,可能与mTOR的磷酸化有关。

雷帕霉素靶蛋白调节自噬在理筋手法改善静力性损伤中的作用机制研究

目的通过观察理筋手法对兔颈后肌静力性损伤的干预,观察家兔一般状况、组织形态学、超微结构、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及自噬相关蛋白Bcl-2-腺病毒E1B相互作用蛋白3(bcl-2-adenoirus E1B 19-Kda interacting protein 3,BNIP3)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1-light chain 3,LC3)、核孔蛋白62(nucleoporin 62,P62)的变化,探索mTOR分子抑制骨骼肌过度自噬的相关机制。方法选择日本大耳兔40只,按随机数字表选取5只作为空白对照组,其余均采用颈椎前屈位45°固定,每日5小时,建立颈部慢性静力性损伤模型。60天后随机选取5只与空白组对照,通过一般行为学和组织形态学验证造模是否成功。剩余30只随机分为模型组和手法治疗组,每组各15只,模型组不予任何治疗,治疗组每日予以松筋、拨筋、顺筋三种手法治疗,力量控制为2 kg,频率100次/分钟,持续5分钟,分别在第10天、20天、30天各处死5只进行颈后肌取材。采用苏木素—伊红染色(HE染色)及透射电镜观察骨骼肌组织形态学和超微结构变化。采用蛋白免疫印迹法检测mTOR及自噬相关因子LC3、BNIP3、P62的蛋白表达变化,实时荧光定量法检测BNIP3、P62 mRNA水平的变化。结果家兔造模结束后出现精神萎靡不振,但触及颈部时反应敏捷易躲闪,颈部可触及条索状物。与空白组比较,模型组HE染色见肌纤维排列紊乱,扭曲变形,大量炎性物质浸润,10天、20天、30天时肌纤维扭曲程度逐渐减轻,排列较整齐,炎性细胞逐渐减少,且治疗组效果优于模型组。透射电镜下与空白组比较,模型组可见肌丝严重扭曲变形,肌节模糊,线粒体肿胀散乱分布。10天、20天、30天时肌丝扭曲程度逐渐减轻,肌节逐步完整,线粒体形态趋于正常,数量逐渐增多,且各治疗组效果优于模型组。蛋白免疫印迹法结果显示,与空白组比较,模型组P-mTOR、BNIP3和LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达量升高(P<0.05),P62蛋白表达量降低(P<0.05);与同一时间点模型组比较,各治疗组P-mTOR表达量升高(P<0.05),BNIP3蛋白表达量降低(P<0.05),治疗10天组和治疗20天组P62表达量均升高(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ表达量均下降(P<0.05)。实时荧光定量法结果显示,与空白组比较,模型组BNIP3 mRNA水平升高(P<0.05),P62 mRNA水平降低(P﹤0.05);与同一时间点模型组相比,治疗组BNIP3 mRNA水平下降(P<0.05)。结论家兔颈部前屈造成颈后肌静力性损伤后,自噬被激活,理筋手法干预后自噬水平逐渐下降,可能与理筋手法作用于mTOR信号通路调节自噬有关,从而维持细胞内环境的稳态,促进肌肉组织的修复。

植物雷帕霉素靶蛋白激酶研究进展

植物雷帕霉素靶蛋白(target of rapamycin,TOR)作为信号和代谢调节中枢,通过磷酸化修饰整合营养、能量和环境信号,感知植物体内能量变化,调节植物生长发育和环境适应过程。在本文中,我们回顾了TOR的发现历程,总结了以往和近期植物TOR的信号通路研究进展(包括新发现的部分上游效应因子和下游调控路径),TOR在植物胚胎发生、分生组织形成、养分利用、开花和衰老等不同生长发育阶段或代谢过程中的重要作用,以及响应非生物胁迫和生物胁迫的生物学机制,还展望了TOR激酶在未来的研究热点方向及其在农业生产中的应用。

以哺乳动物雷帕霉素靶蛋白为靶点治疗阿尔茨海默病的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)调节细胞存活、增殖和代谢。阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种常见的神经系统退行性疾病,发病机理复杂,与衰老密切相关。研究发现,AD的病理发展过程中经常伴随着mTOR活性的变化,但尚不清楚mTOR在AD发病机制中的作用。本文首先介绍了mTOR的复合物及其信号通路,重点综述了mTOR信号通路对突触可塑性和记忆功能、自噬作用、β-淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)、Tau蛋白和脑胰岛素抵抗等AD病理特征的影响,其次阐述了m TOR两种信号通路在抗衰老和延长寿命方面的调控作用,最后介绍了mTOR抑制剂在AD病理研究中的应用,为延缓和改善AD提供新的思路。

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白自噬通路在支气管肺发育不良中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。方法将A549细胞(腺癌人类肺泡基底上皮细胞)一定条件培养后分成对照组、支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组。支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组高氧环境培养,置于37℃、85%氧气孵化箱中培养48 h,前者不加药剂、后者加10μmol/L的雷帕霉素干预;对照组常规环境培养,置于37℃、5%二氧化碳孵化箱中培养48 h,不加药剂。利用高氧构建支气管肺发育不良的细胞模型,利用蛋白质印迹实验和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证自噬对高氧处理后A549细胞肺泡表面标志物合成蛋白复合物(SPC)、水通道蛋白5(AQP5)的影响,利用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测自噬对高氧处理后A549细胞增殖的影响,利用蛋白质印迹实验验证PI3K/Akt/mTOR自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。结果蛋白质印迹实验和RT-qPCR实验表明自噬激活剂雷帕霉素挽救了高氧处理后A549细胞SPC、AQP5表达的下调。EdU实验表明雷帕霉素显著促进了高氧处理后A549细胞的增殖,EdU阳性细胞百分比高于支气管肺发育不良组[(0.48±0.06)比(0.36±0.02)](P<0.05)。蛋白质印迹实验显示雷帕霉素干预后的A549细胞中的磷酸化-PI3K、磷酸化-Akt、磷酸化-mTOR、自噬选择性底物P62的表达水平显著降低,微管相关蛋白1轻链3的表达水平显著上升(均P<0.05)。结论PI3K/Akt/mTOR自噬通路在支气管肺发育不良中发挥着重要作用。

雷帕霉素通过抑制mTOR活性降低铝引起的磷酸化tau蛋白沉积

目的研究雷帕霉素是否可以通过抑制mTOR活性降低铝暴露引起的p-tau蛋白的沉积。方法24只SD大鼠随机分为四组:对照组、低剂量麦芽酚铝组、中剂量麦芽酚铝组和高剂量麦芽酚铝组。Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;Western blot检测海马组织中p-tau蛋白、p-mTOR和PSD95的变化情况;PC12细胞分为对照组、铝处理组、铝+溶剂对照组、铝+雷帕霉素100 nmol组、铝+雷帕霉素300 nmol组和铝+雷帕霉素500 nmol组,Western blot检测蛋白变化情况。12只大鼠分为铝处理组和铝+雷帕霉素组,Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;Western blot检测海马组织中p-tau蛋白、p-mTOR和PSD95的变化情况。结果水迷宫实验中,铝处理组大鼠的逃避潜伏期均比对照组延长,中、高剂量麦芽酚铝组逃避潜伏期明显低于对照组((35.24±4.78)、(25.92±8.80)vs(20.32±6.04),P<0.001);铝处理组大鼠的目标象限停留时间和穿越平台次数均随着铝剂量的升高而减少(P<0.05)。与对照组比较,铝处理组大鼠的海马组织中,p-mTOR/mTOR和p-tau/tau的水平均明显增高(P<0.05);PSD95蛋白明显降低(P<0.05)。在PC12细胞中,与单独铝处理组相比,雷帕霉素干预组的p-mTOR/mTOR和p-tau/tau的表达均有所减少,尤其在雷帕霉素300 nmol和雷帕霉素500 nmol干预组中,p-tau可恢复至正常对照组水平,PSD95也明显回升(P<0.05)。与单独铝处理组大鼠比较,雷帕霉素干预组的大鼠学习记忆能力明显改善,同时海马组织中p-mTOR/mTOR和p-tau/tau的表达均减少,PSD95也明显回升。结论mTOR磷酸化激活参与了铝引起的p-tau蛋白过度沉积,雷帕霉素可以通过抑制mTOR的磷酸化活性降低磷酸化tau蛋白的沉积。

雷帕霉素及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在免疫调节中的作用研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)是丝氨酸苏氨酸蛋白酶,由雷帕霉素靶蛋白复合物1(m TORC1)和m TORC2组成,具有调节细胞生长、代谢、增殖、存活功能。m TOR及其相关信号通道在多种疾病的病理生理过程中具有重要的调节作用,如自身免疫性疾病系统性红斑狼疮(SLE)、移植排斥反应及肿瘤等。雷帕霉素是m TOR敏感性抑制剂,具有免疫抑制作用,现已用于m TOR相关的多种疾病治疗,我们主要总结了雷帕霉素及m TOR参与疾病免疫调节的作用及机制。

雷帕霉素靶蛋白(mTOR)介导Th17/Treg失衡在白塞病(BD)葡萄膜炎发病机制中的作用

白塞病是一种慢性复发性、与免疫相关的系统性变异性血管炎,其常见眼部表现为葡萄膜炎。T细胞免疫异常在白塞病发病中尤为显著。辅助性T细胞17(T help cell 17,Th17)/调节性T淋巴细胞(T regular cell,Treg)平衡能维持内环境稳态和免疫耐受,若失衡将导致多种自身免疫病,如白塞病葡萄膜炎。雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)参与调控T细胞生长发育,通过调控炎症通路促进Th17细胞分化和抑制Treg增殖,从而介导Th17/Treg失衡。近来,mTOR通过介导Th17/Treg失衡参与白塞病葡萄膜炎发病受到关注。本文就mTOR介导Th17/Treg失衡参与BD葡萄膜炎发病机制作一综述。

沙格列汀通过下调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达减轻糖尿病大鼠肾损伤

目的探讨沙格列汀(Sax)对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用及机制。方法SD雄性大鼠14只给予腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病(T2DM)模型,造模成功后随机分为T2DM组和Sax组,6只大鼠为正常对照(NC)组。Sax组给予Sax溶液灌胃,其余两组灌胃予以等量的羧甲基纤维素钠溶液,8周后处死大鼠,留存血液和肾脏组织。全自动生化分析仪检测血清葡萄糖(Glu)、白蛋白(ALB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);HE、PAS、Masson染色及透射电镜观察肾脏病变情况;免疫组织化学染色法检测大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达和分布。结果与NC组相比,T2DM组大鼠Glu、ALB、AST、ALT、Scr、BUN、UA、TC、TG水平明显升高;肾小球系膜细胞数量增多、系膜基质增厚;mTOR、IL-1、IL-6、TNF-α的蛋白表达水平明显增高。与T2DM组相比,Sax组大鼠Glu、ALB、AST、ALT、Scr、BUN、UA、TC、TG水平降低,肾损伤减轻;mTOR、IL-1、IL-6、TNF-α的表达显著降低。结论Sax可能通过下调mTOR表达,抑制炎症反应,减轻糖尿病大鼠肾损伤。

EC9706和Eca109细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路激活状态观察

目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态。方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和Westernblot方法分别从mRNA及蛋白水平检测此通路的活性。结果:在2种细胞中mTOR均有表达,且在EC9706细胞中的表达水平高于Eca109(P<0.05);EC9706细胞中mTOR下游靶点的磷酸化水平高于Eca109细胞(P<0.05)。结论:在2种食管鳞癌细胞中,mTOR信号通路均特异性激活;但激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度低者通路的激活水平较高。

雷帕霉素靶蛋白的蛋白信号通路及其与代谢性疾病相关性

雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamyoin,mTOR)是进化上高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于磷脂酰肌醇3-激酶相关激酶(plosphatidylinositol 3-kinase-related kinase,PIKK)蛋白质家族的成员。mTOR作为细胞生长的核心因子,与不同的蛋白质结合时表现出不同的生理功能,参与基因转录、蛋白质翻译起始、核糖体生物合成、细胞周期调控、DNA损伤修复、重组和端粒酶长度的维持等。PIKK家族激酶的功能异常会导致多种代谢性疾病。通过对不同的mTOR相关蛋白信号转导机制的研究,进一步探讨代谢综合征的发病机制,并为相关治疗提供分子靶标。