雷氏大疣蛛毒素-Ⅱ的纯化与初步毒性研究

雷氏大疣蛛是我国最近鉴定的蜘蛛新种 .雷氏大疣蛛毒素 - 就是以其粗毒为材料 ,利用阴、阳离子交换层析和反相 HPLC分离得到并命名的一种新型神经毒素肽 .根据质谱分析得知它的相对分子质量为3 0 2 1 .5 6;通过初步毒性研究 ,证明它是一个神经毒素 .

雷氏大疣蛛毒素溶栓活性测定及纤溶蛋白的分离

[目的]检测雷氏大疣蛛毒素的体外溶栓活性及分离雷氏大疣蛛毒素中的纤溶酶组分。[方法]应用人血检测雷氏大疣蛛毒素的体外溶栓活性;用反相层析法和阳离子交换法分离雷氏大疣蛛毒素,应用纤维蛋白平板检测毒素及分离组分的纤溶酶活性。[结果]体外溶栓实验显示,不同浓度的雷氏大疣蛛毒素水溶液均可溶解人血凝块,浓度越高溶解作用越强。经纤维蛋白平板法检测,雷氏大疣蛛毒素具有良好的纤溶作用。反相层析法分离雷氏大疣蛛毒素收集得14种组分,其中4种具有纤溶活性。取其中分离效果较好的组分2和10利用阳离子交换法再分离,各收集了2种组分,其中2-2和10-2具纤溶活性且SDS-PAGE显示一条带,达到了电泳纯。[结论]雷氏大疣蛛毒素存在具纤溶酶活性的蛋白(多肽)组分,应用反相层析和阳离子交换的反法能较好的分离雷氏大疣蛛毒素组分。

雷氏大疣蛛毒素对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雷氏大疣蛛M acrothele raven i毒素对人肝癌细胞SMM C-7721增殖及细胞周期的抑制作用,进一步探讨其作用的分子机制。方法采用M TT法测定雷氏大疣蛛毒素对SMM C-7721细胞增殖作用的影响;采用[3H]-T dR掺入法检测雷氏大疣蛛毒素作用前后SMM C-7721细胞DNA合成的变化;采用流式细胞术(FCM)探讨雷氏大疣蛛毒素对SMM C-7721细胞凋亡率和细胞周期的影响;采用W estern B lot方法研究雷氏大疣蛛毒素对细胞周期相关c-m yc蛋白表达的影响。结果M TT方法表明雷氏大疣蛛毒素对SMM C-7721细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05),时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛毒素可以抑制SMM C-7721细胞DNA的合成。流式细胞仪检测结果发现雷氏大疣蛛毒素作用后SMM C-7721细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G2/M期。W estern B lot方法进一步检测到雷氏大疣蛛毒素作用SMM C-7721细胞72 h后,c-m yc蛋白表达减弱。结论雷氏大疣蛛毒素可以抑制人肝癌细胞SMM C-7721的增殖和DNA的合成,其机制可能是诱导细胞凋亡,使细胞周期相关c-m yc蛋白表达减弱,导致细胞周期的变化。

雷氏大疣蛛毒素-V的分离纯化与初步活性鉴定

雷氏大疣蛛(Macrothele raveni)是最近发现的异仿蛛科大疣蛛属的蜘蛛新种.雷氏大疣蛛毒素-V就是以该蜘蛛粗毒为原料,利用阴、阳离子交换层析和反相高效液相色谱分离纯化得到并命名的一种新型蜘蛛毒素.利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪分析得知它的相对分子质量为3133.48;通过初步活性研究证明雷氏大疣蛛毒素-V是一种昆虫专一性神经毒素.

新型抗虫活性肽雷氏大疣蛛毒素4596的纯化与鉴定

雷氏大疣蛛是我国新近鉴定的蜘蛛新种,虽然动物学家们已经对其进行过分类地位与生态学特性研究,然而有关抗昆虫活性成分研究的报道较少.通过比较解剖蜘蛛毒囊、乳胶软管诱导与电脉冲刺激3种蜘蛛毒液采集技术,发现雷氏大疣蛛毒液的最佳采集方法是电脉冲刺激采毒法.该蜘蛛粗毒对蜚蠊50%致死剂量LD50值是1.486 mg/g.结合阳离子交换层析和反相高效液相色谱技术从该蜘蛛粗毒中分离纯化到一种新型多肽毒素,根据质谱分析确定其相对分子质量为4 596.38,该毒素被命名为雷氏大疣蜘蛛毒素-4596(raventoxin-4596,RVTX-4596).通过初步毒性实验证实RVTX-4596是一种新型抗昆虫毒素.

雷氏大疣蛛毒素对神经胶质瘤U87的抑制作用

直观的观察雷氏大疣蛛毒素促进神经胶质瘤U87凋亡的形态学变化。首先用蛋白印迹法检测合适的雷氏大疣蛛毒素浓度处理U87细胞,再用该浓度毒素处理U87细胞不同时间;用100pg/m L的雷氏大疣蛛毒素作用48 h诱导神经胶质瘤U87细胞凋亡,然后用倒置相差显微镜,Gimsa染色法,吖啶橙/嗅化乙锭(AO/EB)双重荧光染色法以及流式细胞法,从最直观的形态学上观察雷氏大疣蛛毒素促进神经胶质瘤U87凋亡的形态学变化。实验组的细胞出现很明显的凋亡小体,细胞膜不会破裂,细胞质不会流出,细胞核含有固缩核片段等细胞凋亡的形态学上的特征。雷氏大疣蛛毒素作用神经胶质瘤U87细胞后的形态学的变化,基本包括了细胞凋亡的主要的形态学特征。说明雷氏大疣蛛毒素是通过促进神经胶质瘤U87细胞凋亡从而抑制细胞的增殖。

雷氏大疣蛛毒素对间充质干细胞增殖的影响

探究雷氏大疣蛛毒素对间充质干细胞增殖的影响。用不同浓度的雷氏大疣蛛毒素处理间充质干细胞,通过细胞增殖实验(MTS)法测定毒素对间充质干细胞增殖的影响,倒置显微镜观察间充质干细胞的形态学变化,台盼蓝拒染观察间充质干细胞的数量变化。MTS法、倒置显微镜和台盼蓝拒染均得到低浓度的蜘蛛毒素作用于间充质干细胞后细胞数量增加;中浓度的毒素作用于间充质干细胞后,细胞数量与对照组差不多;高浓度的蜘蛛毒素作用于细胞后,细胞数量明显减少。雷氏大疣蛛毒素低浓度促进细胞生长,高浓度抑制细胞生长。

雷氏大疣蛛蜘蛛毒素对人肺癌细胞A549增殖的影响

背景与目的雷氏大疣蛛蜘蛛毒素作为新药有可能用于癌症的治疗,本研究旨在探讨雷氏大疣蛛蜘蛛毒素对人肺癌细胞A549的作用及机理。方法应用MTT法检测雷氏大疣蛛蜘蛛毒素对人肺癌细胞A549增殖的影响,比色法检测过氧化氢酶活性,改良的硫代巴比妥酸荧光法检测丙二醛含量;流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用免疫印迹分析A549细胞中P38MAPK蛋白的表达。结果雷氏大疣蛛蜘蛛毒素可抑制A549细胞增殖,使CAT活性和MDA的形成增加,且使P38MAPK的表达较对照组明显增多。结论雷氏大疣蛛蜘蛛毒素抑制A549细胞增殖可能与CAT活性和MDA的形成增加以及P38MAPK的表达降低相关。