雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠肾小球系膜基质增生抑制作用的实验研究

目的:研究雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠肾小球系膜基质增生的抑制作用,探讨其抗系膜基质增生的分子机制。方法:采用阿霉素静脉注射建立阿霉素肾病模型,将实验动物分为模型组,雷至胶囊组及正常组,分别留取各组第0、2、3、4、5周尿标本。第5周末处死大鼠,留取血肝肾标本;光镜、电镜观察肝肾组织病理形态学变化;West-Blot检测肾组织TGF-β、MMP-9蛋白表达。结果:与模型组相比,雷至胶囊组24 h尿蛋白、血脂及系膜基质指数明显降低,同时TGF-β蛋白表达明显降低,MMP-9蛋白表达明显升高,透射电镜显示肾小球基质增生明显改善。结论:雷至胶囊可从多方面、多层次恢复细胞外基质(ECM)代谢平衡,防止系膜基质增生。

雷至胶囊治疗阿霉素肾病大鼠的实验研究

目的探讨雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠的治疗作用。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、雷至胶囊实验组、洛丁新组和雷至胶囊加洛丁新治疗组,尾静脉注射阿霉素6mg/kg,造成阿霉素肾病模型。观察24h尿蛋白定量、尿N-乙酰-葡萄糖苷酶(NAG)的改变和肾脏病理变化。结果雷至胶囊加洛丁新治疗组尿蛋白含量、NAG酶明显降低,与模型组相比统计学差异显著(P<0.05);雷至胶囊加洛丁新治疗组与洛丁新组、模型组相比肾脏病理变化明显减轻。结论雷至胶囊能增强对阿霉素肾病大鼠的治疗作用,保护肾功能,延缓肾脏病变恶化速度。

雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠足细胞分子Podocalyxin蛋白的影响

目的研究雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠肾脏podocalyxin表达的影响,探讨其保护足细胞的作用机制。方法采用分次尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病模型,将实验动物分为模型组、雷公藤多苷组、雷至胶囊组及正常组,第5周末处死大鼠,光镜、电镜观察肾组织病理形态学变化;West-Blot的方法检测肾皮质中podocalyxin的表达。结果与模型组相比,用药组24 h尿蛋白、血脂明显降低,同时podocalyxin蛋白表达明显提高,透射电镜显示足细胞足突病变不同程度改善;雷至胶囊组以上指标改善明显优于雷公藤多苷组。结论podocalyxin与蛋白尿和足细胞形态密切相关;雷至胶囊保护足细胞机制之一是恢复肾小球足细胞podoca-lyxin的表达。

雷至胶囊对阿霉素肾病模型基质金属蛋白酶及其抑制物的作用

目的利用阿霉素肾病模型(daunomycin-induce nephropathy,DMN)研究雷至胶囊的疗效及其对肾组织基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)及其抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMP)的影响。方法实验动物分为正常对照组、模型对照组、贝那普利治疗组、雷公藤多苷治疗组和雷至胶囊治疗组。分别在造模第7天、第28天、第42天和第56天留取血清和尿液标本,观察尿蛋白定量、血清白蛋白、谷丙转氨酶和肾功能等指标的变化;留取肾组织进行光镜、电镜和TGF-β1(转化生长因子-β1)、TIMP-1(金属基质蛋白酶抑制物-1)、和MMP-9(金属基质蛋白酶-9)的逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)。结果①尿蛋白:各治疗组治疗7天尿蛋白减少不明显,但在第28天、42天和56天表现为一定程度的下降,其中雷至胶囊组最为明显,与模型组比较有统计学意义(P<0.05);②血清生化:雷至胶囊治疗组谷丙转氨酶未见明显升高,血清白蛋白水平高于其他各治疗组水平;③肾脏系膜细胞和足细胞的影响:光镜和电镜观察结果显示雷至胶囊治疗组与贝那普利治疗组、雷公藤多苷治疗组和模型组比较系膜细胞增生情况、足细胞融合情况以及系膜基质增生情况均较轻,在尿蛋白明显减少情况下仍然存在与肾脏纤维化相关的肾脏病理进展,表现为程度减轻而不是逆转;④治疗第56天肾脏组织RT-PCR检测发现,雷至胶囊治疗组TGF-β1、TIMP-1表达水平低于其他各治疗组而MMP-9表达水平高于其余各治疗组,组间比较有统计学意义(P<0.05)。结论雷至胶囊对于阿霉素肾病具有较好的治疗作用,能够显著减少蛋白尿,减轻肾组织损伤、保护足细胞结构的完整性和抑制系膜细胞增生。雷至胶囊延缓肾脏纤维化的治疗作用体现在调节与肾脏纤维化相关的肾脏组织转化生长因子、基质金属蛋白酶及其抑制物有关。

雷至胶囊对嘌呤霉素氨基核苷肾病的减毒增效作用

目的:探讨雷至胶囊(雷公藤多苷10 mg.kg-1+女贞子、墨旱莲4 g.kg-1)在治疗嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病的减毒增效作用。方法:80只雄性大鼠随机分为8组:空白组、模型组、雷至胶囊高、低剂量组、雷公藤多苷高、低剂量组、雷公藤甲素组和缬沙坦组,每组10只。颈静脉注射PAN 100 mg.kg-1建立PAN肾病模型。空白组颈静脉注射等量生理盐水。其余各治疗组造模后第2天开始每日分别ig给药,持续10 d。第11天,处死大鼠,摘取肝肾,用于光镜、免疫荧光及透射电镜检测。结果:一般情况:模型鼠第5天尿量减少、腹水,而浮肿不明显,体重下降。第7～10天腹水明显,24 h尿蛋白增加,死亡率30%(3/10)。病理改变:模型鼠肾小管上皮细胞变性,电镜下,可见足细胞足突融合、消失,而空白组足细胞结构正常。各药物治疗组24 h尿蛋白、血生化、血红蛋白均有不同程度改善,各治疗组血尿素氮轻度升高(P<0.05)。雷至胶囊及雷公藤多苷10 mg.kg-1组降蛋白尿、改善贫血、降低AST疗效优于其余各组,电镜下,雷至胶囊高剂量组足突融合减轻,足突明显恢复。结论:雷至胶囊可能通过降低PAN肾病大鼠蛋白尿、改善贫血、降低AST、减轻足细胞足突融合及肾小管上皮细胞变性等发挥减毒增效作用。

嘌呤霉素肾病模型肾组织微小RNA的差异性表达及雷至胶囊的干预作用

目的:观察嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型鼠肾组织微小RNA(microRNAs,miR-NAs)差异性表达的特征及其与足细胞裂隙膜(slid diaphragm,SD)关键结构分子nephrin,podocin和骨架蛋白synaptopodin表达的关系;阐明雷至胶囊(Leizhi capsule,LZC)在体内通过调控模型鼠肾组织miRNAs差异性表达而改善足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,减少蛋白尿的机制。方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、雷至胶囊组(C,5 mL.kg-1.d-1)、雷公藤多苷组(D,10 mL.kg-1.d-1)和缬沙坦(E,7.5 mL.kg-1.d-1)组。除A组外,其余各组大鼠一次性经颈静脉注射PAN(100 mg.kg-1)而建立PAN肾病模型。造模后第2天灌胃给药,A,B组大鼠用生理盐水干预,共10 d。造模前及造模后第3,9天称量各组大鼠体重,并检测24 h尿蛋白排泄量(urinary protein ration,Upro)。造模后第11天,处死全部大鼠,采集血液和肾组织,观察血清生化指标血清白蛋白(albumin,Alb),血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(bloodurea nitrogen,BUN),肾小球超微结构(足细胞足突形态)以及肾组织dicer酶,nephrin,podocin,synaptopodin表达;同时,借助生物芯片(biochip)技术,分析肾皮质miRNAs差异性表达的特征,并且,借助荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)验证rno-miR-23a,rno-miR-300-3p,rno-miR-24,rno-miR-30c等的差异性表达量。结果:在PAN诱导下,模型鼠出现蛋白尿、肾功能减退、低白蛋白血症、足细胞足突融合;在模型鼠肾组织中,dicer酶影响足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达;上调rno-miR-23a,rno-miR-300-3p表达,下调rno-miR-24,rno-miR-30c表达;差异性表达的miRNAs包括rno-miR-24,rno-miR-30c,rno-miR-23a,rno-miR-300-3p等。雷至胶囊能改善PAN肾病模型鼠的一般情况、蛋白尿、血清BUN、足细胞足突融合;还能减少模型鼠肾组织dicer酶表达,增加足细胞nephrin,podocin和synaptopodin表达;减弱在模型鼠肾组织中上调的rno-miR-23a,rno-miR-300-3p,增强在模型鼠肾组织中下调的rno-miR-24,rno-miR-30c等。结论:PAN在体内通过dicer酶/miRNAs差异性表达途径而影响模型鼠肾组织miRNAs表达,干预足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,破坏足细胞结构和功能,产生蛋白尿;雷至胶囊可以减少PAN肾病模型鼠蛋白尿,其机制可能是干预dicer酶/miRNAs差异性表达途径,调控足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,改善足细胞的结构与功能。

雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠足细胞分子nephrin的影响

目的:研究雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠肾脏nephrin蛋白表达的影响,探讨其抗蛋白尿的作用机制。方法:采用分次尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病模型,将实验动物分为模型组、雷公藤多苷组、雷至胶囊组及正常对照组,第5周末处死大鼠,光镜、电镜观察肾组织病理形态学变化;半定量RT-PCR和Western-blot的方法检测肾皮质中nephrin mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组相比,治疗组24h尿蛋白、血脂明显降低,同时nephrin mRNA及蛋白表达明显提高,透射电镜显示足细胞足突病变不同程度改善;雷至胶囊组以上指标改善明显优于雷公藤多苷组,且无肝脏副作用。结论:nephrin蛋白的表达减少是产生蛋白尿的主要原因;雷至胶囊抗蛋白尿的作用机制之一是提高肾小球细胞nephrin蛋白的表达,从多方面证实其治疗效果优于雷公藤多苷。

中药配伍对雷公藤多苷所致雄性大鼠生殖毒性的影响

目的根据中医组方配伍雷公藤多苷（GTW）组成雷至胶囊及桑椹液，旨在对抗GTW的生殖毒性。方法4周龄Wistar大鼠分7组，正常对照组（自由进食水），雷公藤多苷高剂量组（20mg·kg^-1·d^-1），雷公藤多苷低剂量组（10mg·kg^-1·d^-1），雷至灌胃液高剂量组（RZ液，雷公藤多苷20mg·kgll·d．1＋稀释后RZ液2ml／只），雷至灌胃液低剂量组（RZ液，雷公藤多苷10nag·kg^-1·d^-1＋稀释后RZ液2rnl／只），桑椹液高剂量（雷公藤多苷20nag·kg^-1·d^-1＋稀释后的桑椹液2ml／只），桑椹液低剂量（雷公藤多苷10mg·kg^-1·d^-1＋稀释后的桑椹液2ml／只）。在给药前、给药30d各测定1次血常规、尿常规、血生化、血清性激素。给药30d与停药15d处死大鼠，取材组织病理检查。结果给药前、后各组血常规、肝肾功能、尿蛋白无明显变化。GTW给药1d大鼠睾酮下降，雷至胶囊组睾酮恢复明显，桑椹组改善不明显。组织病理可见，给药1个月雷公藤多苷、雷至灌胃液及桑椹液在所设剂量下均可见肾脏肾小管上皮水样变性、睾丸曲精小管各级生精上皮细胞减少、附睾管中精子明显减少并可见多核巨细胞，间质纤维结缔组织增生。停药半个月后，雷公藤多苷在所设剂量下可见肾脏肾小管上皮水样变性，睾丸曲精小管各级生精上皮细胞减少，附睾管中精子明显减少并可见多核巨细胞，间质纤维结缔组织增生。雷至灌胃液在所设剂量下可见附睾管中精子明显减少并可见多核巨细胞。桑椹液在所设剂量下可见睾丸曲精小管各级生精上皮细胞减少，附睾管中精子明显减少并可见多核巨细胞。结论单独给予雷至灌胃液对正常大鼠生殖系统可能影响不显著，仅在GTW造成生殖系统损害时发挥对抗作用，故可认为雷至胶囊的对抗作用机制为保护睾丸生精上皮免受GTW的损害，并使血清睾酮水平维持于正常有关。桑椹液在所设剂量下对大鼠肾脏、附睾有一定的毒性作用，且桑椹液的毒性低于雷公藤多苷、雷至灌胃液。

雷公藤制剂抗蛋白尿疗效及其对肝脏、肾脏的影响

目的观察雷公藤制剂对阿霉素肾病大鼠蛋白尿的治疗作用及对肝脏、肾脏的影响。方法采用分次尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病模型,将SPF级纯系SD大鼠分为正常组、模型组、雷公藤多苷组、雷公藤水提物组、雷至胶囊低剂量组、雷至胶囊中剂量组、雷至胶囊高剂量组,分别留取各组第0、2、3、4、5周尿标本,第5周末处死大鼠,检测大鼠白蛋白、甘油三酯、胆固醇及转氨酶含量;光镜、电镜观察肾组织病理形态学变化。结果模型组尿蛋白量逐渐增加,与模型组、雷公藤多苷组、雷公藤水提物组相比,雷至胶囊各剂量组第4、5周的尿蛋白均明显降低;模型组血白蛋白明显降低,甘油三酯、胆固醇明显升高,与模型组比较各治疗组白蛋白、甘油三酯、胆固醇均明显改善;雷公藤多苷组转氨酶水平明显高于其他组。结论从疗效或药物安全性方面雷至胶囊均优于其他雷公藤制剂,体现了减毒增效的效果。