雷藤氯内酯醇（T_4）的抗生育作用机理

雷藤氯内酯醇（Ｔ_４）的抗生育作用机理左晓春，王乃功（中国医学科学院，中国协和医科大学，药物研究所，北京１０００５０）雷藤氯内酯醇（Ｔ４）是在分离雷公藤单体过程中得到的一个含氯单体［１］，它具有雷公藤多甙的抗炎免疫抑制和抗生育活性，其抗生育活性效价约?..

雷公藤中雷藤氯内酯醇(T_4)的分离与结构测定

从雷公藤多甙(TⅡ)中分离到一个单体,经UV,IR,~1H-NMR,^(12)C-NMR 2INMR,FTMS/SCI,MS,X-射线衍射等分析及与雷藤素甲(triptolide)的化学关联试验,确定化学结构为雷藤氯内酯醇(tripchlorolide),是一种新的化合物。

雷公藤总甙(T_Ⅱ)中雷藤氯内酯醇的高效液相色谱分析

建立了雷公藤总甙(T_1)中雷藤氯内酯醇的高效液相色谱分析方法。采用μ-Bondapak C_(18)柱和46％甲醇-水流动相,紫外检测波长219nm。考察了雷藤氯内酯醇的稳定性,雷藤氯内酯醇在0.5～10.0μg/ml范围内线性良好,回收率在98％～101％之间。

雷藤氯内酯醇对围产期小鼠内脏器官及其胎鼠的影响

给围产期昆明鼠喂服０．６及０，３ｍｇ·ｋｇ^（－１）／ｄ的雷藤氯内酯醇（Ｔ４），可导致部分母鼠产后泌乳减少，仔鼠缺奶死亡；引起母鼠肝脏线粒体损伤，琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）活性分布改变，糖原合成减少，肝细胞空泡变性；肾脏小管细胞空泡变性；但不引起心脏、脾脏的病理改变。另于雌鼠怀孕第５天喂服Ｔ_４，于孕第１７天取材，用药组吸收胎及死胎未见高于对照组，亦未发现明显的宫内发育畸形。本实验说明Ｔ_４确是一种对胚胎毒性小的药物。

雷藤氯内酯醇对正常人及类风湿关节炎患者周围血单个核细胞及滑膜细胞产生免疫球蛋白的影响

研究了１０例正常人和６例类风湿关节炎（ＲＡ）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及３例ＲＡ患者消化的单个滑膜细胞（ＤＳＳＣ），经雷公藤的有效单体雷藤氯内酯醇（Ｔ４）处理２ｈ对其分泌免疫球蛋白（Ｉｇ）的影响。结果显示：Ｔ４在浓度为５～３５ｎｇ·ｍｌ－１对正常人ＰＢＭＣ分泌Ｉｇ有明显抑制作用，呈剂量依赖趋势。在２５ｎｇ·ｍｌ－１浓度下，Ｔ４对ＲＡ患者ＰＢＭＣ及ＤＳＳＣ分泌Ｉｇ均有明显抑制作用。

雷公藤化学成分研究及雷藤氯内酯醇生源讨探

通过GC-MS联用技术对雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook f.)的脂肪油进行了分析,鉴定出邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯、十一烷酸、鲸蜡酸等12个化合物,以及残留农药P,P′-DDT及其降解产物P,P′-DDD和氯二苯基甲烷,并通过归一化法获得了各成分在脂肪油中的相对百分含量。同时直接从提取物中分离和鉴定出了P,P′-DDT,进而讨论了雷公藤中抗炎免疫和雄性抗生育成分——雷藤氯内酯醇的生物来源。

昆明鼠围产期使用雷藤氯内酯醇对后代的影响

用５８只昆明雌鼠，于围产期（孕第１５ｄ至胎鼠出生后１５ｄ）给雌鼠灌服雷藤氯内酯醇（Ｔ＿４）（０．６ｍｇ／ｋｇ／ｄ及０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄ），观察了子１代及子２代鼠的出生、生长、发育以及生殖能力。运用行为测试指标测定Ｔ４是否引起后代畸形；采用形态学方法检查胎鼠脏器及骨骼，以判断人是否具有毒性作用及导致畸形。结果表明，子１代及子２代鼠的生长、发育以及生殖能力正常，器官发育正常，运动反射属正常范围；内脏器官未见中毒性病变；胎鼠骨骼发育正常。

雷公藤氯内酯醇对急性肺损伤患者T辅助淋巴细胞功能的调节作用体外研究

目的观察急性肺损伤(ALI)患者T辅助淋巴细胞(Th)亚群平衡变化及雷公藤氯内酯醇(T4)的调节作用。方法实验分健康对照组、ALI组、雷公藤T4组、地塞米松(DX)组。采用酶联免疫斑点法(Elispot)测定ALI患者外周血单个核细胞(PBMC)中Th亚群,酶联免疫吸附法(ELISA)测单个核细胞培养上清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10含量。结果与对照组比较,ALI组、雷公藤T4组、DX组Th2/Th1比值明显升高(P<0.01);与ALI组比较,雷公藤T4组、DX组Th2/Th1比值下降(分别P<0.01,P<0.05)。Th1亚群与TNF-α含量呈正相关(γ=0.78,P<0.01)。Th2亚群与IL-10含量呈显著正相关(γ=0.66,P<0.01)。结论ALI时Th亚群比例失调,提示促炎/抗炎反应失衡。雷公藤T4能够调控Th亚群失衡状态,防止ALI炎症瀑布反应的放大。

雷藤氯内酯醇的半合成研究——雷公藤内酯醇和雷公藤内酯酮的结构改造

通过HCl对雷公藤内酯醇(triptolide)的12-C进行选择性亲核进攻,将雷公藤植物中分离获得的雷公藤内酯醇(triptolide)和雷公藤内酯酮(triptonide)结构,改造为具有强抗炎、免疫抑制和雄性抗生育活性的雷藤氯内酯醇(tripchlorolide)。并通过二维NMR谱和选择性远程DFPT等图谱分析,归属了雷公藤内酯醇、雷公藤内酯酮和表雷公藤内酯醇(epitriptolide)NMR谱的全部碳和氢的信号。

雷藤氯内酯醇抑制人精子Ca^（2＋）内流及对大鼠胸主动脉、输精管收缩的影响

雷藤氯内酯醇（Ｔｒｉｐｃｈｌｏｒｏｌｉｄｅ，Ｔ４）由雷公藤中分离的单体，除有增强抗炎、免疫抑制作用外，还增强雄性抗生育活性。Ｔ４经大鼠口服，可致附睾尾精子活率和密度明显下降而不育。精子活力主要受Ｃａ２＋等调控，为了探讨Ｔ４抑制精子活力的作用机制，我们观察了Ｔ４对人射出精子Ｃａ２＋内流的作用和对离体大鼠胸主动脉及输精管收缩的影响。结果指出，Ｔ４Ｉ抑制人射出精子对Ｃａ２＋摄取，但不影响由去甲肾上腺素和高Ｋ＋依赖Ｃａ２＋支持而诱发的大鼠胸主动脉和输精管的自发收缩。提示，Ｔ４抑制人射出精子Ｃａ２＋内流，导致精子膜内外Ｃａ２＋梯度浓度失去动态平衡，可能是Ｔ４抑制精子活力的重要机理之一。但Ｔ４不影响离体大鼠胸主动脉和输精管的收缩，可能有选择性的作用在附睾部位。

雷藤氯内酯醇对大鼠生精细胞微核形成的影响

本文采用体内给药及体外培养大鼠睾丸曲细精管特定阶段的方法,研究了男性抗生育药雷公藤活性化合物雷藤氯内酯醇(T_4)对生精细胞微核形成的影响.结果表明,大鼠po抗生育剂量的T_4 50μg·kg^(-1)·d^1,4 wk,其微核发生率与阴性对照组相比无明显升高;体外曲细精管培养液中0.5ng·ml^1的T_4未导致微核率增加,而1.0和2.0 ng·ml^1的T_4使微核率显著升高,2.0和3.0ng·ml^(-1)的T_4在体外导致不同程度的细胞毒性作用,本文用生殖细胞减数分裂过程中微核的形成来检验化学物质对染色体的损伤是一个敏感的方法.在体抗生育剂量下T_4未导致微核率明显升高,离休实验中大剂量的T_4才能造成大鼠生精细胞微核率明显升高。

雷藤氯内酯醇对雄性猕猴的抗生育药效及可复性观察

观察了雷公藤单体雷藤氯内酯醇 (T4)对雄性猕猴的抗生育作用及其可逆性。 1 2只性成熟雄性猴等分 4组 ,口服 T4剂量分别为 5 0、2 5、1 0、0μg· (kg· d) - 1,每周 6次 ,连续8周。 3个剂量组猕猴分别于给药第 8、7、5周其射出精液达到死精、无精、或严重寡精 (<1× 1 0 6 / ml)。射出精子最先出现的改变是颈体弯曲、继之头尾分离、但头部形态基本正常。给药期间各受试猴自发射精频率、电刺激射精反应、精液量、睾丸容积、血清睾酮水平及精浆果糖浓度等与对照组相比 ,没有显著差异。精浆肉毒碱浓度有变化但不甚规律。 3个剂量组猕猴分别于停药后 1 0、8、4周其射出精子密度和活率恢复到药前水平。交配试验亦证实各受试猴已恢复使雌猴受孕的能力。表明

雷公藤抑制致敏小鼠CD4^+T细胞核因子GATA_3、NFAT的活性

目的探讨致敏小鼠CD4`^+ T淋巴细胞核转录因子GATA_3、NFAT活性的变化及雷公藤内酯醇(TP)的作用。方法采用卵蛋白(OVA)致敏的方法建立模型;运用panni ng法分离CD4^+T淋巴细胞;通过凝胶电泳迁移率实验(EMSA)对CD4^+T 淋巴细胞核因子GATA_3、NFAT的DNA结合活性及TP的作用进行检测,同时就TP的作用与地 塞米松(DM)相比较。结果正常小鼠CD4^+T 淋巴细胞核因子GATA_3、NFAT的活性很弱,致敏小鼠CD4^+T淋巴细胞体外经伴刀 豆蛋白A(ConA)刺激后,GATA_3、NFAT的活性与正常对照组比较显著增强,并呈时间依 赖关系。经TP、DM处理后,GATA_3、NFAT的活性显著减弱。结论 GATA_3和NFAT是调控Th2类细胞因子基因转录的重要核因子。TP、DM抑制Th 2类细胞因子基因转录的分子机制可能与其抑制GATA_3、NFAT的DNA结合活性有关。

雷公藤内酯醇对小鼠皮肤移植排斥反应的影响

目的观察雷公藤内酯醇(triptolide,TPT)对同种异体小鼠皮肤移植的影响,探讨其抗排斥反应的作用机制。方法采用BALB/c小鼠→C57BL/6小鼠背-背皮肤移植法建立模型,随机分为假手术组、模型组、TPT组(200μg·kg-1)、环孢素A(CsA)组(10mg·kg-1)、TPT+亚剂量CsA组(TPT 200μg·kg-1+CsA 5 mg·kg-1),腹腔注射给药10天。记录受体鼠移植皮片的存活时间,酶联免疫吸附法检测血浆中白细胞介素Ⅱ(IL-2)、IL-4、IL-10、γ-干扰素(IFN-γ)含量,流式细胞术分析脾脏CD4+CD25+T淋巴细胞亚群的比例。结果各给药组小鼠移植皮片的存活天数均有明显延长,与模型组相比差异均有统计学意义(P<0.01);TPT+CsA组的移植皮片存活天数比TPT组或CsA组均有显著延长(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,TPT+CsA组及TPT组均可明显减少血浆Th1类细胞因子(IL-2、IFN-γ)的表达(P<0.01),明显增高Th2类细胞因子(IL-4、IL-10)的表达(P<0.01)。与模型组相比,TPT+CsA组及TPT组均可明显增高脾脏CD4+CD25+T淋巴细胞的比例(P<0.01)。结论TPT通过影响Th1/Th2型细胞因子、诱导免疫耐受、刺激CD4+CD25+T淋巴细胞的表达等途径,抑制了同种异体小鼠皮肤移植的排斥反应。

雷藤氯内酯醇对大鼠抗生育作用机制探讨

雷藤氯内酯醇（Ｔ４）每天５０ μｇ／ｋｇ 灌胃５ 周，可致雄性大鼠不育。给药大鼠附睾尾部的精子密度和活动力显著下降，附睾液中的肉毒碱和α糖苷酶含量较对照组均显著降低。但在附睾头部的匀浆上清液中α糖苷酶以及酸性磷酸酶活性均没有变化。给药大鼠的附睾精子形态发生了明显改变，主要表现为头尾分离和顶体弯曲。在附睾管腔可见脱落的精子细胞，Ｔ４ 对睾丸的ＬＤＨＣ４ 和透明质酸酶没有明显影响。组织学观察显示曲细精管和和附睾上皮损伤轻微。结果表明Ｔ４ 对大鼠具有明显雄性抗生育作用，精子细胞和附睾精子可能是其作用的主要环节。

雷藤氯内酯醇对大鼠生殖细胞的遗传效应

雷公藤有效抗生育单体T_4(雷藤氯内酯醇)抗生育效果肯定,作用环节理想;对睾丸曲精细管细胞组合影响不大,主要作用于附睾,导致大量精子头尾分离。对精子头部形态没有明显影响,也不干扰精母细胞联会复合体配对及其功能,未见染色体易位的发生,也不引起精原细胞染色体畸变及微核发生率的增加,结果表明T_4对生殖细胞没有明显的遗传损伤效应。对T_4深入研究,可望发展成理想的男用避孕药。

雷藤氯内酯醇与棉酚雄性抗生育作用的比较研究

雷藤氯内酯醇(T_4)系从雷公藤中分离出来的具雄性抗生育作用的单体。棉酚为我国首创男用节育药,但存在少数服药者出现低血钾及停药后精子产生不可恢复现象,影响推广使用。本研究对T_4和棉酚的雄性抗生育作用及毒性进行比较,结果表明T_4作用环节较理想,主要作用在附睾精子,引起精子头尾大量分离,对睾丸曲细精管影响较小。因此在停药后能迅速恢复生育能力,而棉酚主要作用于曲精细管精母细胞阶段,所以恢复生育较慢,动物增重受阻,毒性较T_4显著。因此对T_4深入研究,可望发展成男用节育药。

雷公藤内酯醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎外周血及中枢神经系统中CD4^+T淋巴细胞的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(Tri)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)外周血及中枢神经系统中CD4+T淋巴细胞的影响,为Tri临床应用提供实验依据。方法建立EAE大鼠模型,给予Tri预防性治疗,流式细胞术检测大鼠外周血的CD4^+T淋巴细胞变化,免疫组化观察中枢神经系统中CD4+T淋巴细胞的浸润情况。结果与生理盐水模型组比较,Tri治疗组的发病率显著降低,中枢神经系统中CD4^++ T淋巴细胞的浸润显著减少,而外周血CD4^+T淋巴细胞的量变化不大。结论Tri可能通过抑制CD4+T淋巴细胞在中枢神经系统的浸润,而阻止EAE的发病,提示Tri在治疗人类多发性硬化方面有一定应用前景。

雷藤氯内酯醇对垂体分泌LH的影响

雷公藤多甙(GTW)是从卫茅科植物雷公藤中提取的一种中成药,它对成年男子,雄性大鼠和小鼠都有明确的抗生育作用。在GTW进一步分离过程中得到一个单体化合物、雷藤氯内酯醇(T_4)。经实验室观察,雄性大鼠每天灌服50μg/kg,连服6周即可达不育。其抗生育效价为GTW的200倍,毒副作用明显下降。此剂量也不影响大鼠血清中睾酮和LH水平。但在离体的间质细胞培养过程中加入T_4,则发现睾酮分泌量明显下降。认为T_4对间质细胞功能有直接抑制作用。而T_4对垂体细胞分泌LH功能是否有直接影响尚需进一步探讨。本研究观察了T_4对在体及离体垂体细胞分泌与贮藏LH功能的影响。