食品中链格孢霉毒素残留分析的样品前处理技术研究进展

受链格孢霉菌(Alternaria)侵染的食品中会产生具有遗传毒性、细胞毒性、生殖和发育毒性的链格孢霉毒素。食品中链格孢霉毒素的结构和性质差异大、含量较低,其分析检测需要高效的样品前处理技术和准确的分析检测方法。样品前处理在分析检测过程中是非常重要的步骤,但目前是瓶颈环节。本文对含有链格孢霉毒素的食品样品前处理技术进行综述,分别阐述了QuEChERs(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safe)、分散液液微萃取、分子印迹固相萃取、直接稀释法在食品基质中链格孢霉毒素的提取过程的应用,以及固相萃取、分散固相萃取、低温冷冻、液液分配在食品中链格孢霉毒素的净化过程的应用。同时,总结了不同提取和净化技术的优缺点,分析了现有前处理技术的优势和局限性,展望了具有发展前景的前处理技术,如制备新型分子印迹固相萃取材料和性能较好的净化材料、建立促使食品中链格孢霉毒素的提取-分析一体化检测体系。

全自动QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定花类代用茶中链格孢霉毒素

本文建立了全自动Qu ECh ERS-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定花类代用茶中5种链格孢霉毒素的分析方法。样品经全自动Qu ECh ERS前处理,以ACQUITY UPLCHSST3色谱柱分离,在电喷雾离子源负源模式下,进行多反应监测分析。在优化后的条件下,5种链格孢霉毒素在各自的线性响应范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.999,在6种花类代用茶基质的3个不同加标水平下平均回收率为82.3%~105.7%,相对标准偏差(RSD)小于10%,方法检出限为0.5~1.5μg/kg。方法具有分析速度快、稳定性好、灵敏度高的特点,能够满足花类代用茶中链格孢霉毒素的快速检测需求。

超高效液相色谱-串联质谱法测定葵花籽中4种交链孢霉毒素的含量

取2.5g已粉碎的葵花籽样品,加入500.0μL含100.0μg·L^(-1)交链孢酚单甲醚-d_(3)(AME-d_(3))、1000.0μg·L^(-1)滕毒素-d_(3)(TEN-d_(3))和交链孢酚-d_(2)(AOH-d_(2))、5000.0μg·L^(-1)细交链孢菌酮酸-d_(13)(TeA-d_(13))的混合内标溶液,混匀,放置过夜,用25.0mL体积比为45∶10∶45的乙腈-甲醇-0.05mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(pH 3.0)混合液振荡提取,离心。取上清液,用水定容至30.0mL,分取6.0mL,加入15.0mL 0.05mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(pH 3.0),过Waters Oasis HLB固相萃取柱(预先用5.0mL甲醇和5.0mL水活化),用20%(体积分数)甲醇溶液淋洗,抽干固相萃取柱,用10mL体积比为1∶1的含1%(体积分数)氨水的甲醇-乙腈混合液进行洗脱。将洗脱液于40℃氮吹至近干,残渣用200.0μL甲醇复溶,并用水定容至2.0mL,所得溶液采用超高效液相色谱-串联质谱法测定其中交链孢酚(AOH)、交链孢酚单甲醚(AME)、细交链孢菌酮酸(TeA)和腾毒素(TEN)等4种交链孢霉毒素的含量,内标法定量。结果表明,Waters Oasis HLB固相萃取柱净化效果最佳,在洗脱剂中加入氨水有利于改善峰形,基线更平滑;4种交链孢霉毒素的质量浓度在一定范围内与对应的峰面积和内标峰面积的比值呈线性关系,测定下限(10S/N)为0.15~1.50μg·kg^(-1)。按照标准加入法进行回收试验,回收率为75.0%~112%。对实际样品做7组平行,测定值的相对标准偏差均小于13%。方法用于实际样品分析,结果显示检出率和检出量最高的是TeA,平均值为1890.16μg·kg^(-1),TEN次之,平均值为20.26μg·kg^(-1)。

典型链格孢霉毒素的污染现状与毒理学性质研究进展

链格孢霉毒素是链格孢霉菌产生的次级代谢产物,在谷物、果蔬、坚果、油料作物等农作物和农产品中污染广泛,对人和动物有不同程度的急性毒性、遗传毒性、生殖发育毒性等,然而,现有的污染水平、膳食暴露量及毒效应等资料有限且研究系统性不强,安全风险评估的理论支撑薄弱。基于此,本文系统梳理了典型链格孢霉毒素的污染现状及其毒理学性质,旨在为进一步评估其暴露水平,开展安全性评价,科学制定限量标准与法规提供较为全面、系统的理论依据。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法检测玉米中4种链格孢霉毒素

本研究旨在建立同时测定玉米中4种链格孢霉毒素——交链孢酚(AOH)、交链胞酚单甲醚(AME)、细交链孢菌酮酸(TeA)及腾毒素(TEN)的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法,并利用该方法检测山东省30份饲用玉米AOH、AME、TeA和TEN污染的背景值。将玉米样品加水溶解,用0.1%甲酸-乙腈溶液提取,氯化钠盐析,安捷伦EC-C18柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm)为试验色谱柱,分别用乙腈(流动相A)和超纯水(流动相B)梯度洗脱,负离子电离模式(ESI-)作为电离条件,多反应离子监测模式(MRM)定量与定性分析,通过标准曲线、准确度和精密度试验评价建立的QuEChERS-UHPLC-MS/MS法。结果表明:4种链格孢霉毒素在1~100μg/L时线性关系良好;在5、10和50μg/kg 3种加标情况下,TeA、AOH、AME和TEN的加标回收率分别为74.70%~84.60%、 77.94%~103.84%、 72.61%~102.14%和71.16%~73.16%,相对标准偏差(RSD)分别为4.08%~8.36%、2.03%~4.07%、1.80%~4.61%和1.99%~2.40%。使用该方法检测的山东省30份饲用玉米中,TEN未检出,AOH、AME、TeA的检出率分别为96.67%、93.30%、40.00%。综上可知,本试验所建立的QuEChERS-UHPLC-MS/MS法,准确度、精密度高和稳定性好,可作为玉米中AOH、AME、TeA和TEN的检测方法;山东省饲用玉米样品中AOH、AME和TeA的检出率较高,应当引起重视。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定粮食中4种交链孢霉毒素

为同步测定大米、玉米和小麦中4种交链孢霉毒素,本研究建立了相应的超高效液相色谱-串联质谱法。试样中交链孢霉毒素用酸化乙腈水溶液提取,经HLB固相萃取柱净化后,以ACQUITY UPLC BEH C18柱(1.7μm,2.1 mm×100 mm)为分析柱,以0.55 mmol/L氨水水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,以负离子电喷雾模式电离(ESI-),多反应离子监测(MRM)方式进行定性和定量检测,外标法定量。在本方法条件下,4种交链孢霉毒素在3种基质中线性范围内均呈现良好的线性关系(R^(2)>0.9900),方法检出限0.4~4.0μg/kg,定量限1.0~10.0μg/kg。在3种加标水平下,4种毒素的回收率范围为62.50%~113.40%,相对标准偏差RSD≤7.89%。采用建立的方法检测了市售大米和小麦中的4种交链孢霉毒素,大米中4种毒素的污染水平为ND~12.18μg/kg,小麦中为ND~163.32μg/kg,本方法可满足实际样品的检测。

超高效液相色谱-串联质谱法检测家禽配合饲料中4种链格孢霉毒素

试验旨在建立一种超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)检测配合饲料中的交链孢酚(Alternariol,AOH)、交链孢酚单甲醚(Alternariol Monomethyl Ether,AME)、细交链孢菌酮酸(Tenuazonic Acid,TEA)及腾毒素(Tentoxin,TEN)4种链格孢霉毒素含量,并对配合饲料链格孢霉毒素进行污染调查。通过检出限(DL)和定量限(QL),准确度和精密度试验,评价该检测方法。结果表明:本试验方法的DL为0.02~0.15μg/L,QL为0.06~0.53μg/L;通过加标回收试验验证,在0.2~0.8 mg/kg的加标浓度下,4种毒素回收率为86.47%~112.86%,相对标准偏差≤9.74;肉鸡配合饲料中存在TEA、AOH和TEN毒素的污染,平均值分别为62.55、24.98μg/kg和29.92μg/kg,蛋鸡配合饲料中存在AOH和TEN毒素污染,平均值分别为51.71μg/kg和32.49μg/kg。由此可见,本研究建立了检测配合饲料中TEA、AME、AOH和TEN 4种毒素的UHPLC-MS/MS方法,准确度和精密度好,适合实际应用。

固相萃取-同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定橄榄油中4种交链孢霉毒素含量及其分布状况

目的:建立固相萃取-同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定橄榄油中4种交链孢霉毒素含量的方法并描述其在橄榄油中的分布状况。方法:将橄榄油混匀后取5 g(精确至0.001 g),经乙腈-磷酸二氢钠溶液混合溶液提取,固相萃取柱净化,收集净化液经水浴氮吹浓缩后,采用超高效液相色谱质谱仪测定,内标法定量。结果:交链孢菌酮酸(tenuazonic acid, TeA)在0~50 ng/mL、交链孢酚(alternariol, AOH)在0~20 ng/mL、腾毒素(tentoxin, TEN)在0~10 ng/mL、交链孢酚单甲醚(alternariol methyl ether, AME)在0~2 ng/mL范围内线性良好(R>0.99)。TeA、AOH、TEN、AME的检出限在0.20~2.00μg/kg范围之间。4种生物毒素加标回收率为92.25%~124.66%,精密度范围3.79%~10.58%,表明本方法样本检测量小、灵敏度高、准确度高、精密度高,重现性好,是检测橄榄油中交链孢霉毒素的理想方法。结论:橄榄油普遍受到交链孢霉毒素污染,检出率93.33%(28/30),AME毒素是橄榄油中最主要的检出毒素。

食品中链格孢霉毒素污染现状及检测技术研究进展

链格孢霉毒素是由链格孢霉属(Alternaria species)产生的次级代谢产物,具有致突变、致癌、致畸等多种毒性。文章概述了水果、蔬菜、谷物及其制品中链格孢霉毒素的污染现状,综述了链格孢霉毒素检测方法的研究现状,并展望了链格孢霉毒素检测技术今后的研究方向。

赤霉毒素对小麦幼胚愈伤组织和幼苗生长的影响

研究了赤霉毒素对小麦幼胚愈伤组织和幼苗生长的影响。结果表明,赤霉毒素对小麦幼胚愈伤组织有毒害和致死作用;赤霉毒素使小麦种子发芽率、幼苗的株高、根长、发芽指数、活力指数及根系还原力和可溶性糖含量降低,并使电导率值升高。

链格孢霉毒素细交链格孢菌酮酸的研究进展

链格孢霉(Alternara)是污染食品和饲料最普遍的真菌之一。细交链格孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)是链格孢霉毒素中最为重要的一种,可广泛污染蔬菜、水果及谷物。本文综述TeA毒素的来源及污染情况、理化险质及其毒性、检测方法等,并就未来研究方向进行展望。

QuEChERS净化-超高效液相色谱-串联质谱法测定番茄中5种链格孢霉毒素的含量

取经粉碎匀浆的番茄样品(5.0g)于50mL聚丙烯离心管中,加入酸化乙腈(每升中加入甲酸4.0mL)10mL,超声提取30min,使得测定的5种链格孢霉毒素[链格孢酚(AOH)、交链格孢酚单甲醚(AME)、交链孢烯(ALT)、腾毒素(TEN)及细交链格孢菌酮酸(TeA)]溶入乙腈中,加入氯化钠0.5g,无水硫酸镁5g脱水后高速离心5min,取提取液1.5mL,加入C1825mg作为净化剂,涡旋1min除去其中色素等共提取物,取经净化的提取液0.5 mL,置于离心管中,加入1mmol·L-1碳酸氢铵溶液0.5mL,再次高速离心5min,取上清液供超高效液相色谱-串联质谱分析。选择ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱作为固定相,以不同比例的1mmol·L-1碳酸氢铵溶液(A)和甲醇(B)的混合液作为流动相进行梯度洗脱。串联质谱测定中采用电喷雾离子源正负离子切换扫描和多反应监测模式。用基质匹配法绘制标准曲线,所测定的5种链格孢霉毒素的线性范围均为0.5~100μg·L-1,其检出限(3S/N)在0.6~3.0μg·kg-1之间。以空白样品为基体,加入5种链格孢霉毒素的标准溶液按所述方法测定后计算其回收率,所得结果在81.6%~115%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在2.1%~11%之间。

固相萃取净化-超高效液相色谱串联质谱法测定菜籽油中交链孢霉毒素含量

建立了固相萃取净化-超高效液相色谱串联质谱法测定菜籽油中交链孢霉毒素含量的方法。将菜籽油与甲醇混匀后使用Captive EMR-Lipid固相萃取柱(3 mL,300 mg)净化,收集净化液经氮吹浓缩后,采用超高效液相色谱串联质谱测定,内标法定量。以回收率为指标对固相萃取柱的净化载量及洗脱剂体积进行优化。结果表明,菜籽油最佳净化载量为0.15 g,最佳洗脱剂体积为2.0 mL。4种交链孢霉毒素在线性范围内相关系数均大于0.998,4种交链孢霉毒素加标回收率为68.8%~117.3%,精密度为8.6%~11.4%,方法检出限为0.1~2.0μg/kg,定量限为0.3~6.0μg/kg。方法具有较好的灵敏度及回收率,简单、易于操作,适用于菜籽油中交链孢霉毒素的检测。

不同贮藏条件对干辣椒黄曲霉毒素含量的影响

为了对提高干辣椒原料贮藏期间的品质提供理论支持,对影响辣椒主要品质的黄曲霉毒素的变化情况进行了研究。结果表明,在低温、低水分含量和低湿度条件下贮藏有利于减少干辣椒中黄曲霉毒素的生成积累。

我国两种生物毒素与肝癌——黄曲霉毒素与藻类毒素(摘要)

我国两种生物毒素与肝癌——黄曲霉毒素与藻类毒素（摘要）俞顺章董传辉张幼辰（上海医科大学预防医学研究所，上海２０００３２）原发性肝癌已成为我国农村第一位癌症和城市第二位癌症。根据流行病学研究，肝癌的主要环境危险因素为：乙型肝炎感染，黄曲霉毒素对食物的污...

SPE和QuEChERS净化测定番茄中链格孢霉毒素方法比较

通过加标样品的回收率对固相萃取和QuEChERS测定番茄中链格孢霉毒素净化效果进行比较,结果表明,固相萃取净化法的回收率在21%~69%,远低于QuEChERS方法的平均回收率81%~115%,且QuEChERS方法较固相萃取净化法操作简便快速,更适用于番茄中链格孢霉毒素含量的测定。

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定水果中5种链格孢霉毒素

匀浆后的水果样品用1%甲酸乙腈溶液超声提取30min,离心后,取上清液加入N-丙基乙二胺和C18净化,离心后过0.22μm滤膜,采用高效液相色谱-串联质谱法测定滤液中5种链格孢霉毒素的含量。以Hypersil GOLD色谱柱为固定相,以不同体积比的乙腈和0.1%(体积分数,下同)甲酸溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱,串联质谱分析中采用电喷雾离子源和多反应监测模式。5种链格孢霉毒素的质量浓度在一定范围内与其对应的峰面积呈线性关系,方法的测定下限(10S/N)为0.02~1.0μg·kg^-1。以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为93.3%~111%,测定值的相对标准偏差(n=6)为3.0%~9.7%。

马唐生防菌画眉草弯孢霉毒素α,β-dehydrocurvularin对马唐叶片PSⅡ功能的影响

马唐[Digitariasanguinalis(L.)Scop]生防菌画眉草弯孢霉(CurvulariaeragrostidisJ.A.Meyer)菌株QZ2000产生一种具有除草剂活性毒素α,β-dehydrocurvularin。毒素对马唐叶片类囊体膜光系统Ⅱ(PSⅡ)的电子传递有较强的抑制作用,当毒素浓度达到0.688mmol·L-1时,电子传递速率比对照降低了19.37%。毒素对PSⅠ的电子传递影响较小。叶绿素荧光动力学参数测定显示,用0.516mmol·L-1浓度的毒素处理马唐离体叶片24h后,叶片的Fv/Fo、Fv/Fm、ΦPSⅡ、qP、qN、Fm都显著降低,而Fo呈上升趋势。试验结果显示,该毒素对PSⅡ光化学活性的抑制作用与均三氮苯类除草剂阿特拉津(Atrazine)、西玛津(Simazine)和取代脲类除草剂敌草隆(Diuron)有相似之处,叶绿素荧光动力学参数的变化表明,该毒素损坏PSⅡ中心和抑制QA的再氧化。表明该毒素可能是通过损坏PSⅡ中心及抑制QA的再氧化,使PSⅡ反应中心向QA、QB电子传递受阻,从而影响马唐的光合磷酸化与碳同化,引起马唐叶片坏死。qN的显著降低,表明毒素对PSⅡ中心的损坏也可能是由于毒素导致还原型电子受体积累增加了自由基的产生所致。

复合免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中6种黄曲霉毒素和6种玉米赤霉醇类真菌毒素残留量

建立了动物源食品（猪肉、鱼肉、猪肝）中6种黄曲霉毒素（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1和AFM2）和6种玉米赤霉醇类真菌毒素（α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮）残留量的复合免疫亲和柱净化-高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法。样品经β-葡萄糖苷酸/硫酸酯复合酶酶解后,用甲醇-乙腈（20∶80,V/V）提取,提取液经玻璃纤维滤纸过滤,滤液用PBS溶液稀释,复合免疫亲和柱富集和净化后,采用HPLC-MS/MS法分析。12种目标分析物中AFB2和AFG2的线性范围为0.03~6.0μg/L,其余目标分析物的线性范围为0.05~20μg/L,线性相关系数均大于0.999,检出限在0.01~0.03μg/kg范围内,定量限在0.04~0.09μg/kg范围内。分别以0.5,1.0和5.0μg/kg添加浓度水平进行方法学验证,平均回收率为73.6%~98.4%,相对标准偏差（RSD）为1.9%~11.2%。本方法简便、灵敏,能够满足动物源食品中痕量黄曲霉毒素和玉米赤霉醇类真菌毒素残留的测定要求。

鸡单端孢霉毒素中毒病的诊断

单端孢霉毒素 (单端孢霉烯族化合物包括T 2毒素 ) ,是由多种霉菌如镰刀菌、木霉、头孢霉、单端孢霉等多种霉菌产生的霉菌毒素。本病多发于猪 ,家禽次之 ,牛、羊等反刍动物较少发生。家禽中毒后 ,发生以口腔粘膜、神经和羽毛损伤为特征的疾病。本文通过流行病学调查、临床症状、病理变化观察及病原分离 ,确诊