烤后健康烟叶和霉烂烟叶真菌群落结构分析

为了解烤后健康烟叶和霉烂烟叶真菌群落多样性,采用Illumina MiSeq测序平台对烤后健康与霉烂烟叶样品上真菌群落的ITS1-ITS2区域PCR扩增片段进行测序并分析。健康烟叶组(MJ)和霉烂烟叶组(MB)2类样品真菌主要为子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、接合菌门(Zygomycota)等6个门25纲58目187科260个属的394个真菌分类单元(OTUs)。在属水平上,健康烟叶组(MJ)优势真菌为链格孢属(Alternaria),其次为曲霉属(Aspergillus)、新凸轮孢菌属(Neocamarosporium)、赤霉属(Gibberella)、支顶孢属(Acremonium);霉烂烟叶组(MB)优势真菌为曲霉属(Aspergillus),其次为青霉属(Penicillium)和根霉属(Rhizopus)。Alpha指数表明,健康烟叶组(MJ)真菌群落丰富度与多样性均高于霉烂烟叶组(MB)。71.06%的OTUs归属于8个功能类群,其中腐生菌是主要功能类群,研究结果揭示了烤后健康烟叶和霉烂烟叶真菌群落结构,为制定相应的防治方案提供参考依据。

烘烤期烟叶霉烂病的病原鉴定

为明确烘烤期烟叶霉烂病病因和发病条件,进行了病原菌分离培养、病原菌形态特征观察、生长温度试验、致病性测定及病害发生条件观察。结果表明：病原菌为米根霉（Rhizopus oryzae）,烟叶变黄期烤房温度达36～40℃,相对湿度75%~85%的条件下有利病菌的生长和侵染。首次确认烘烤期烟叶霉烂是由病原菌引起的一种新的侵染性病害,该病害命名为烟叶霉烂病（tobacco leaf mildew and rot）。

烘烤期烟叶霉烂病的侵染源与防治

[目的]明确烘烤期烟叶霉烂病的症状、病因、侵染源和防治措施。[方法]通过病原形态学观察、生物学特性观察和ITS-PCR检测分析,对烘烤期烟叶霉烂病的病原进行鉴定,并用二氧化氯和三氯异氰脲酸对烟柄喷雾或熏蒸装烟后的烤房,研究其对烘烤期烟叶霉烂病的防治效果。[结果]烘烤期烟叶霉烂病的病原鉴定为米根霉(Rhizopus oryzae)。利用PSA平板采集烤房内外及烟叶表面的微生物,米根霉广泛存在于烤房内外的环境中,能在烤房内存活和积累成为重要侵染源。用二氧化氯和三氯异氰脲酸对烟柄喷雾或熏蒸装烟后的烤房,结果显示熏蒸法对烘烤期烟叶霉烂病的防治效果在62.62%~69.57%。[结论]为烟叶霉烂病的有效防治提供了理论依据。

烘烤期烟叶霉烂病病原菌的分离、鉴定及生物学特性

为明确云南省烘烤期烟叶霉烂病的病原,采用分子和形态学鉴定方法,依据柯赫氏法则,对病原菌进行分离和鉴定并将其命名为Rhi-1,并初步研究了该病原菌的生物学特性。结果表明,引起该病害的病原菌为米根霉(Rhizopus oryzae)。菌株Rhi-1的气生菌丝旺盛,质地疏松,孢子囊和孢囊孢子直径分别为53~123μm和2.1~9.0μm,两者均呈球形或椭圆形。孢囊孢子萌发的最高温度为44.6℃,水相介质中孢囊孢子热处理10min的致死温度为54℃,菌丝体热处理30min的致死温度为70℃,最适pH为7.0,最佳培养基为PSA。此结果为研究霉烂病发生机制提供了依据。

抗微生物制剂对烤烟烘烤霉烂的控制效果研究

探究绿色抗微生物制剂对云南大理云烟85烘烤过程中烟叶霉烂的最佳防控效果,为烘烤期烟叶霉烂明确防治方法.应用不同类型绿色抗微生物制剂对烤前烟叶进行喷施,统计烤后烟叶霉变率及防治效果.结果表明:1)随烟叶部位的升高烤后烟叶霉变率呈下降趋势.2)不同部位烟叶化学抗微生物剂以0.5%脱氢乙酸钠溶液防控效果最佳,各部位平均防效达到86.70%;天然抗微生物剂以0.2%纳他霉素溶液防控效果最佳,各部位平均防效达到87.99%.因此,云烟85烘烤期烟叶霉变可采用烤前喷施0.5%脱氢乙酸钠溶液或0.2%纳他霉素溶液进行预防.

烟叶米根霉检测、碳源代谢表型及其对7种杀菌剂的敏感性

采用组织分离法检测了烘烤烟叶霉烂病病原菌米根霉Rhizopus oryzae,采用Biolog FF代谢板分析了其碳源代谢表型特征,并测定了其对7种杀菌剂(多菌灵、异菌脲、咪鲜胺、氟硅唑、丙环唑、苯醚甲环唑和嘧菌酯)的敏感性。结果表明:米根霉在田间烟叶、编烟杆和编烟绳上的检出率均为100%。米根霉能代谢和产孢的碳源分别有66和30种,主要包括核糖醇、D-阿拉伯醇和β-环式糊精等;不能代谢和产孢的碳源分别有29和65种,包括a-环式糊精、L-海藻糖和D-半乳糖醛酸等。7种杀菌剂对烟草米根霉的菌丝生长均表现出不同的抑制作用,抑菌活性最强的是氟硅唑和苯醚甲环唑,其EC50值分别为8.31和9.71mg/L;其次为丙环唑、异菌脲和咪鲜胺,其EC50值分别为14.24、32.84及>10mg/L;最弱的为嘧菌酯和多菌灵,其EC50值均>100mg/L。研究结果可为烘烤烟叶霉烂病化学防治提供参考和依据。

烟草米根霉对6种杀菌剂的敏感性及菌株保存条件筛选

采用孢子萌发法测定了烟草上米根霉Rhizopus oryzae对6种杀菌剂(代森锰锌、多菌灵、嘧霉胺、嘧菌酯、啶酰菌胺及氟啶胺)的敏感性,并就其适宜的保存条件进行了筛选,同时采用离体叶片法测定了上述6种杀菌剂对烟叶霉烂病的防治效果。结果表明:6种杀菌剂对米根霉孢子萌发和烟叶霉烂病均表现出了不同的抑制活性。其中,抑制孢子萌发活性最为明显的是氟啶胺和啶酰菌胺,其EC90值分别为0.67和1.53 mg/L;其次为代森锰锌和嘧菌酯,15.16和17.66 mg/L;最弱为嘧霉胺和多菌灵,71.87和81.96 mg/L。对烟叶霉烂病防效最好的为嘧菌酯,50 mg/L处理的防效为85%;其次为啶酰菌胺,200 mg/L处理时防效为83%;氟啶胺的防效较差,1 000 mg/L处理时仅为48%;而代森锰锌、多菌灵和嘧霉胺在最高使用剂量(分别为4 000、800和800 mg/L)时防效均低于20%。病原菌保存方法筛选结果表明,保存后米根霉的孢子萌发率均发生了不同程度降低。其中,4℃保存于20%甘油组的孢子悬浮液萌发率为60%;4℃保存的孢子干样萌发率为36%;4℃保存的孢子悬浮液和–20℃保存于20%甘油的孢子悬浮液萌发率均低于20%;20℃保存的孢子干样萌发率为11%;–20℃保存的孢子悬浮液萌发率为6%。研究结果可为烘烤期烟叶霉烂病防治和米根霉孢子的保存提供参考依据。

烟草米根霉致病力及不同渗透压和pH环境下的代谢表型特征分析

为明确温度、叶位和创伤对烟叶霉烂病病原菌米根霉致病力的影响,及不同渗透压和pH环境下病原菌的代谢表型特征,采用穿刺法接种烟草离体叶片,测定了米根霉在不同温度及不同叶位烟叶中的致病力,并在Biolog PM 9和PM 10代谢板中96种渗透压和96种pH环境下培养米根霉,分析了其代谢表型特征。结果表明,米根霉可致病的温度范围为20℃~38℃,温度高于45℃无致病力;烟叶叶柄和叶片均可被侵染,创伤有利于侵染;米根霉对不同叶位烟叶的致病力间存在差异,其中对下部成熟叶的致病力较强,上部幼嫩叶的致病力较弱;米根霉具有广泛渗透压和pH适应能力,能在1%~10%(质量分数)氯化钠、3%~6%(质量分数)氯化钾、2%~5%(质量分数)硫酸钠、5%~20%(体积分数)乙二醇、1%~2%(质量分数)甲酸钠、2%~3%(质量分数)尿素、1%~12%(质量分数)乳酸钠、20~200 mmol·L^(-1)的磷酸钠(pH 7.0)、10~100 mmol·L^(-1)的硫酸铵(pH 8.0)、10~100mmol·L^(-1)的硝酸钠等渗透环境中正常生长,不能在3%~6%甲酸钠、4%~7%尿素、20~200 mmol·L^(-1)苯甲酸钠(pH 5.2)的渗透环境中生长;其pH适应范围为3.5~10.0,最适pH约为7.0。米根霉具有较强的脱羧酶活性和较弱的脱胺酶活性。