霍乱弧菌肠毒素B亚单位基因在大肠杆菌和双歧杆菌的表达

目的构建霍乱弧菌肠毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)基因的大肠杆菌表达重组质粒,并观察其在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达。方法从pBI121质粒PCR扩增获得CTB基因片断,克隆到大肠杆菌载体pGEX-4T-1上,构建重组质粒,然后转化大肠杆菌DH5α和双歧杆菌。转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达的重组蛋白。结果构建了重组质粒pGEX-4T-CTB,CTB基因片段分子量约为376bp;在大肠杆菌中表达出35kD的霍乱弧菌B亚单位融合蛋白,经SDS-PAGE分析,相对分子量与文献相符,表达的蛋白约占细菌总蛋白的10%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约5%。Western blotting结果确认了该条带为CTB基因的产物。结论构建的重组质粒pGEX-4T-CTB能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达。

O139霍乱弧菌肠毒素核苷酸序列分析

目的 探讨O139霍乱弧菌肠毒素 (CTX)核苷酸与O1群霍乱CTX毒素核苷酸序列异同。方法 用聚合酶链反应、DNA序列分析测定 2株O139群、2株O1群古典型、2株O1群ElTor型霍乱弧菌CTXA2 B亚单位核苷酸。结果 2株O139群霍乱弧菌均含有CTXA2 B亚单位基因 ,O139群与O1群CTXA2 B核苷酸同源性为 97.1%～ 98.9%。结论 O139群与O1群霍乱弧菌CTXA2 B核苷酸基本同源。进一步证实两者CTX核苷酸序列一致。

滕州市185株弧菌及肠毒素检测分析

目的探讨滕州市弧菌种类、分布、构成特征和毒力因子。方法对就诊的急性腹泻病人采集腹泻便，按《卫生防疫细菌检验》提供的方法进行弧菌分离鉴定及肠毒素检测。结果1992～201i年共检测急性腹泻病人粪便4847份，检出各类弧菌185株，检出率为3．82％。其中以非O1群霍乱弧菌为主126株占68．i1％，其次是河弧菌16株占8．65％、梅契尼柯夫弧菌和弗尼斯弧菌各12株各占6．49％、溶藻弧菌9株占4．86％、副溶血弧菌8株占4．32％、霍乱弧菌2株占1．08％。结论在检出的弧菌中，以非O。群霍乱弧菌为主要菌群，另外还有霍乱弧菌、河弧菌、弗尼斯弧菌、溶藻弧菌、梅契尼柯夫弧菌和副溶血弧菌。非0。群霍乱弧菌能产生CT，与其致病性密切相关；NAG-ST是非0。群霍乱弧菌一种主要毒力因子。

活髓切断术盖髓剂研究进展

活髓切断的理念最先由Witzel等于1872年最先提出,他使用砷使冠髓失活,然后使用暂封剂暂封[1-3].Lepkowski于1897年使用经甲醛处理的霍乱弧菌肠毒素盖髓,活髓保存成功率达99%[4]. 随后Buckley提出可以使用甲醛甲酚合剂处理冠髓[5]. 直到20世纪20年代早期Davis首次提出手术切除冠髓组织,保留正常根髓,活髓切断术操作指南逐步成熟[6]. 1968年Redig提出了我们现在临床上常用的一次性活髓切断术[7,8].盖髓剂在活髓切断术的发展过程中不断创新和改进,理想的盖髓剂应当具有抗炎、抗菌、诱导软硬组织修复等作用,盖髓剂的应用对活髓保存起着重要作用.