2株公园湖水源非O1/O139群霍乱弧菌的分离鉴定和致病性分析

近年来,非O1/O139群霍乱弧菌(NOVC)引起人和动物感染时有报道。本试验于2021年3月—2022年4月连续采集圆明园遗址公园湖水样本进行细菌分离培养,经16S rRNA序列分析和溶血性检测对分离株进行鉴定,并通过细胞毒性试验和小鼠感染试验对分离株的致病性进行检测;采用PCR方法对分离株的毒力相关基因ctxA、ctxB、tcpA、hlyA、rtxA、rtxC和chxA进行检测;通过系统发育进化分析对分离株的chxA基因全长进行分析;通过药敏试验对分离株的药物敏感性进行检测。结果显示,共分离鉴定出2株NOVC,NOVC分离株在血琼脂培养基上生长呈现明显的溶血现象;经过滤除菌的细菌培养液上清有溶细胞作用,对体外培养的Vero细胞具有极强的毒性作用,可引起细胞萎缩和脱落;分离株培养物和培养液上清经腹腔注射均可致死小鼠,对小鼠的半数致死量(LD_(50))为10^(7.23)CFU。PCR检测结果显示,分离株hlyA、rtxA、rtxC和chxA基因呈阳性,提示细菌的致病性可能与毒力因子的表达相关。对chxA基因的全长分析结果显示,2株分离株均可编码II型ChxA毒素,其催化域与I型毒素高度同源,但在相应区域缺失1段5个氨基酸片段(^(619)AIAKE^(623))。药敏试验结果显示,2株分离株均对环丙沙星、恩诺沙星和阿米卡星敏感,均对复方新诺明耐药。结果表明,公园水源性NOVC分离株携带多种毒力相关基因,产生溶血素等溶细胞毒素,可致死小鼠,对抗菌药呈多重耐药,对水生动物和环境的公共卫生具有潜在的威胁。

非O1非O139群霍乱弧菌致肝硬化肝腹水患者感染败血症

目的对从肝硬化肝腹水患者血液中感染的疑似霍乱弧菌进行实验室鉴定及药物敏感性试验.方法调查回顾患者的临床症状、原发病、实验室检查结果、治疗和预后;用梅里埃Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定分析系统、手工微量管生化反应及聚合酶链式反应法鉴定细菌,采用K-B药敏纸片法进行药物敏感性测定,血清毒力鉴别用玻片凝集法确定.结果经过系列试验鉴定为非O1非O139群霍乱弧菌,药物敏感性试验显示该菌对氨苄青霉素、哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、舒巴坦、头孢曲松、头孢吡肟、亚胺培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星、加替沙星、复方新诺明均敏感.结论细菌为不产霍乱毒素的非O1非O139群霍乱弧菌,并对常用抗生素均敏感.

肝硬化患者非O1非O139型霍乱弧菌败血症

目的分析非O1非O139型霍乱弧菌感染的肝硬化败血症患者的临床和实验室特点。方法回顾调查病人的临床基本情况、原发病、实验室结果、治疗和预后;BacT/Alert全自动血培养微生物检测仪培养病人全血标本,用VITEK仪器鉴定细菌。药敏试验根据CLSI(2005)规定,K-B药敏纸片测定法进行。结果3例患者均为肝硬化病人;感染发生在夏季;经左氧氟沙星、加替沙星或联用头孢曲松治疗后痊愈。结论非O1非O139型霍乱弧菌败血症推荐使用头孢三代或氟喹诺酮类抗生素治疗。

一起引起食物中毒的非O1群霍乱弧菌实验室鉴定

目的查明引发浙江省宁波市某服饰公司食物中毒事件的病原菌。方法对采集到可疑食品和肛拭等标本参照GB/T4789-2003标准进行细菌的分离、鉴定及血清学分型;参照霍乱防治手册检测菌株的CT毒力基因。结果6份患者大便标本与14份轻微腹泻患者或腹部不适者大便标本中检出非O1群霍乱弧菌O29血清型9株,其中腹泻患者标本检出6株,轻微腹泻患者中检出3株,检出率为45.0%。未检出志贺菌、副溶血性弧菌、致病性大肠杆菌、O1群和O139霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌,剩余食物未检出志贺菌、副溶血性弧菌、致病性大肠杆菌、O1群和O139霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌。结论此次食物中毒为非O1群霍乱弧菌O29血清型所致。

宁波市人群中非O1群霍乱弧菌携带及其毒性研究

目的：非O1群霍乱弧菌是我市感染性腹泻的常见病原菌，通过研究其在人群中携带频度和产生毒素的种类，有利于对该疾病采取针对性措施。方法：用筛检方法分离菌株，经系统生化血清分型确定型别，K-B法测定菌株的耐药性，用PCR、ELISA和动物等试验测定细菌的毒性。结果：从18416份标本中检出O1群霍乱弧菌236株，检出率为1．28％，其中腹泻病人检出率为8．3％，健康人群为0．3％，分属于25个血清型、9个噬菌体，除对青霉素有较高的耐药性外，其他常用抗生素敏感在67．6％-100．0％之间，发现有15．3％的菌株对弧菌抑制剂O／129抗性。92．0％的非O1群霍乱弧菌对小鼠有毒性，CT毒素检出率为1．3％；ST毒素检出率为78．8％；溶血素血平板法阳性率为94．4％、试管法阳性率为88．9％；未检出耐热性溶血素、Vero毒素等多种。结论：宁波市人群中携带一定数量的非O1群霍乱弧菌，腹泻病人中检出率较高，健康人群携带率稍低，与报道一致。7-10月份为检出高峰，与疾病流行规律相符。菌株的生化和药敏特征未发现变异，但抗弧菌抑制剂O／129现象较严重，在鉴定、鉴别时应加以关注。从细菌中检出多种致病毒素，并对小鼠的有较强的致病作用。说明该菌的综合毒力较强。结果提示我们，非O1群霍乱弧菌的致病因子复杂程度高于O1群霍乱弧菌，应引起我们的重视。

蛭弧菌的分离鉴定及其对非O1霍乱弧菌的消除作用研究

从海洋环境中分离到2株蛭弧菌(A-1和A-2),研究了其对6株不同来源非O1霍乱弧菌的消除作用,以探索其对由非O1霍乱弧菌所引起的腹泻疾病的预防效果。实验结果表明,在20～35℃温度条件下,蛭弧菌均有较好的裂解效果,30℃时裂解能力最强;在pH6.5～8.1条件下,蛭弧菌均有较好的裂解能力,pH为7.2时,达到最佳裂解效果;A-1能裂解其中5株非O1霍乱弧菌,A-2能裂解其中4株非O1霍乱弧菌,而2株蛭弧菌协同作用,能全部裂解6株非O1霍乱弧菌。本研究结果揭示了蛭弧菌作为生物消除剂在预防由非O1霍乱弧菌所引起的腹泻疾病方面具有潜在应用价值。

云南省非O1/O139群霍乱弧菌分子特征分析

目的非O1/O139群霍乱弧菌能够引起人类急性腹泻性疾病,但与O1群和O139群相比,人们往往容易忽视其危害性。因此,我们对分离于云南省的31株非O1/O139群霍乱弧菌开展了分子特征分析。方法采用纸片法(K-B)开展抗生素敏感试验;多聚酶链反应(PCR)扩增检测毒力基因;同时,我们对菌株进行了脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分析(MLST)分子分型研究。结果药敏实验结果显示,67.74%的菌株对利福平耐药,对萘啶酸和复方新诺明的耐药率为29.03%,所有的菌株对庆大霉素和环丙沙星敏感;PCR结果显示,所有菌株的ompW基因为阳性,87.10%的菌株hly基因为阳性,25.81%的菌株rstREl tor为阳性,16.13%的菌株rstRClassical和tcpAEl tor为阳性,而CT、rfbO1和rfbO139基因全为阴性;PFGE结果显示,31株非O1/O139群霍乱弧菌呈现出高度的离散趋势,几乎没有相同带型的菌株出现;在MLST结果分析中,发现了1个gyrB新的等位基因,mdh基因发现了4个新的等位基因,metE基因发现了6个新的等位基因,pntA中发现了2个新的等位基因,purM中发现了3个新等位基因,pyrC中发现了4个新等位基因。经过排列组合后,共发现了17个新的霍乱弧菌ST型别(ST273-ST289)。结论非O1/O139群霍乱弧菌呈现出高度的多样性特征,同时,云南省的非O1/O139群霍乱弧菌具有一定的地域特点,丰富了现有的霍乱弧菌分子分型数据库。

浙江省丽水市首起非O1群霍乱弧菌食物中毒分子生物学溯源分析

目的利用分子生物技术了解引起食物中毒的非O1群霍乱弧菌携带毒力基因情况及耐药性特征。方法对检出的非O1群霍乱弧菌菌株进行耐药性分析,同时采用聚合酶链反应(PCR)方法进行霍乱弧菌肠毒素基因(Ctx)、小带联结毒素基因(Zot)、辅助霍乱肠毒素(Ace)基因的检测,并参照美国CDC PulseNet的统一方法进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型并作同源性分析。结果从8例患者和8份食品标本中分离到7株非O1群霍乱弧菌,未检出Ctx、Zot、Ace等毒素基因,检出溶血素,Dienes试验和脉冲场凝胶电泳图谱显示病人分离株和剩余食物检出株同源。经耐药性分析,菌株除对复方新诺明、氨苄西林100%耐药外,对其余抗生素均较敏感。结论通过实验证实本次食物中毒是由聚餐者共同食用冷菜凤爪所致,流行病学追溯从患者共同食用冷菜和海产品中非O1群霍乱弧菌毒力基因、耐药性和脉冲场凝胶电泳分析为同源菌株。

非O_1群霍乱弧菌致病因子检测与分析

〔目的〕非O1群霍乱弧菌有多种致病因子引能起人群腹泻 ,为了解非O1群霍乱弧菌中致病性因子 ,对其进行检测与分析。〔方法〕用平板法和试管法测定溶血素 ;用小鼠测定非O1群霍乱弧菌菌株的急性毒性 ;用VTEC -RPLA法测定菌株的Vero毒素 ;用EIA法测定菌株的ST毒素 ;用PCR法测定菌株的CT毒素。〔结果〕非O1群霍乱弧菌平板法溶血素 2 2 6株阳性 ,阳性率为 94.4% ;试管法溶血素 2 2 0株阳性 ,阳性率为 88.9% ;未检出耐热性溶血素。产ST毒素的菌株186株 ,阳性率为 78.8%。 45株产VTl毒素 ,67株产VT2毒素 ,同时产VTl和VT2两种毒素的 3 5株。 3株非O1群霍乱弧菌检出CT毒素其因 ,产毒率为 1.3 %。〔结论〕检测发现非O1群霍乱弧菌对小鼠有较强的致病能力 ,说明其对人群的危害较大、毒性较强 ;检出CT毒素说明非O1群霍乱弧菌具有引起重症腹泻 (霍乱样腹泻 )的能力 ;检出溶血素、ST毒素、Vero毒素致病因子 ,说明非O1群霍乱弧菌的致病因子有多种。由于菌株发生CT毒素基因频度较低 ,目前不可能成为非O1群霍乱弧菌腹泻的主要的致病因素 ,而菌株发生溶血素、ST毒素、Vero毒素的频度较高 ,尤其是溶血素、ST毒素 ,有可能是非O1群霍乱弧菌的主要致病因子。

河南省某一淡水养殖环节中非O1/O139群霍乱弧菌毒力基因及分子分型分析

目的了解河南省淡水养殖环节中非O1/O139群霍乱弧菌毒力基因分布及分子分型情况。方法对河南省淡水养殖环节中50株非O1/O139群霍乱弧菌和3株病人来源菌株进行全基因测序,利用PubMLST-Vc数据库分析其序列分型(ST),利用最小生成树关系图分析进化关系,通过VFDB数据库获得其毒力基因分布。结果来源于淡水养殖环节和来源于病人的非O1/O139群霍乱弧菌53株菌株均具有黏附、趋化运动、抗吞噬、毒素及酶类等功能的8类毒力相关因子基因,缺失辅助定植、毒素共调、分泌等功能的毒力相关因子基因和副霍乱肠毒素等4个毒素基因。部分毒力相关因子或部分菌株的毒力相关因子毒力基因不全。与3株来源于病人的菌株相比,二者毒力因子基因携带情况相近,除MSHAⅣ型菌毛毒力因子mshA基因、荚膜多糖wbuB基因、wbfY基因、rmlB基因、血红素受体hutA基因及Ⅲ型分泌系统vscC2和vcrD2基因外,部分菌株二者携带相同的毒力因子基因。53株非O1/O139群霍乱弧菌分属19个ST型,ST4和ST5是优势ST型,养殖环节来源的菌株与病人来源的菌株分属不同的ST型。19个ST型等位基因位点变异差异数在1~7个,其中分离自淡水养殖环节的非O1/O139群霍乱弧菌菌株17个ST型等位基因位点变异差异数在1~7个,病人来源的非O1/O139群霍乱弧菌菌株2个ST型与分离自淡水养殖环节的非O1/O139群霍乱弧菌菌株ST1、ST2、ST6和ST10属同一簇,与ST1有6个等位基因位点存在差异。结论河南省淡水养殖环节非O1/O139群霍乱弧菌菌株MLST分型多样化,携带多种毒力相关因子,不同来源菌株携带的毒力基因相同,虽然分属不同的ST型,但还是存在食品安全风险,提醒有关部门采取措施进行防控。

人群中非O_1群霍乱弧菌检测及耐药性分析

[目的]了解宁波市食品及公共场所从业人员、腹泻病人等人群中非O1群霍乱弧菌携带、感染情况及其菌株的耐药性。[方法]用过筛法筛选、VBO诊断血清作血清分型,K-B法作药敏试验。[结果]从人群中筛检出非O1群霍乱弧菌236株,检出率1.3%(236/18 416);能被VBO分型的有188株,总分型率79.7%(188/236),分属25个血清型;检出株对头孢他啶、氯霉素和阿米卡星等抗生素敏感,对氨苄西林等青霉素耐药性较高,有15.3%(36/236)对弧菌抑制剂O/129纸片(10μg、150μg)有抗性,涉及11个血清型。[结论]筛检方法适用于非O1群霍乱弧菌检测;VBO2为腹泻病人的优势血清型;常用抗生素大多具有良好的敏感性,病人分离株的耐药性高于从业人员,未发现多重耐药菌株;检出菌对弧菌抑制剂O/129的抗性增高,鉴定时应考虑到该因素。

肝硬化患者血液中检出非O1群霍乱弧菌鉴定检测报告

非O1群霍乱弧菌是一类致病性微生物,其感染最常见的临床症状是水样泻,重病例出现轻度到中度脱水,有时为血性腹泻,偶尔伴有呕吐和腹绞痛,极少出现发热。

北京港口水产品中非O1/O139群霍乱弧菌MLST分型研究

为了分析2008-2011年北京港口进出口水产品中非O1/O139群霍乱弧菌的多位点序列分型(MLST)特征,为霍乱弧菌导致食品安全事件的有效溯源提供理论支持,选取2008-2011年北京港口食源性非O1/O139群霍乱弧菌分离株67株,采用毒力基因PCR检测并用MLST分析。结果:毒力基因PCR检测结果显示,所有菌株均未检出CTX、tox R、hly A 3种基因。菌株的MLST结果显示,菌株可被分为62个ST型,具有明显的多样性。其中原有STs 2个,新发现STs 60个。同ST型菌株均来源于同一国家,本实验数据同pubmlst数据库中数据进行分析,有7个STs可以归为7个克隆组,它们来源于中国和泰国,同组内STs来源于中国、澳洲、法国、泰国和非洲。表明北京港口非O1/O139群霍乱弧菌遗传特征复杂多样,MLST方法可作为可靠的食品污染溯源手段,相同地区的菌株有一定的地域特点,此研究丰富了现有霍乱弧菌MLST数据库,为其溯源提供支持。

饮服行业从业人群非O_1群霍乱弧菌带菌调查

非O1群霍乱弧菌广泛存在于外环境水体中,除O139群以外的有些菌株也可产生霍乱肠毒素,感染后引起人类腹泻,在感染性腹泻的病原学调查中,该菌的检出率可达5.13%[1].但在正常人群中该菌的带菌状况及该细菌的生物学特性却甚少见于报道,为了解该组细菌在正常人群中的分布及相关的特性,我们于1998～2002年的5年间共检测饮服行业从业人员体检粪便12217份,从中检出非O1群霍乱弧菌21株,并对其的型别、生物学特性、以及对抗菌药物的敏感性作了系统的检测,现将结果报告如下:

非O_1群霍乱弧菌噬菌体-生物学分型

目的：了解用霍乱弧菌噬菌体和溶血性等4项生物学试验对非O1群霍乱弧菌进行噬菌体-生物学分型实际应用意义。方法：用VP1-VP55组弧菌噬菌体对非O1群霍乱弧菌进行噬菌体分型；用溶源性噬菌体敏感试验、溶源性测定、山梨醇发酵和溶血试验对非O1群霍乱弧菌进行生物学分型。结果：236株非O1群霍乱弧菌中能被5组O1群霍乱弧菌噬菌体分型的62株，总分型率为26．3％，其中腹泻病人52株，从业人员10株，分型率分别为22．0％和9．3％，分属于11个噬菌体型，腹泻病人以21、26噬菌体型居多，从业人员无优势型别，对5组O1群霍乱弧菌体均不敏感的174株；62株非O1群霍乱弧菌分属于e、f、k、l等4个生物型，23个噬菌体-生物型在8-31型之间，均属非流行株范畴；对第Ⅳ组噬菌体（10^9／ml）及其常规稀释噬菌体和溶原性噬菌体、溶源性表现为不裂解。结论：非O1群霍乱弧菌进行噬菌体分型，对预测非O1群霍乱弧菌流行具有一定的实用和指导性意义。现成的噬菌体分型方法对非O1群霍乱弧菌进行噬菌体分型存在一定的缺陷，应寻找更适宜于非O1群霍乱弧菌分型的噬菌体用于实际应用。