国产类霍乱原(CB)与进口CB的辣根过氧化物酶结合物(国产CB-HRP及进口原料CB-HRP)的标记效果比较

将获自“A-B+突变型菌种”原液的国产CB,一半与HRP直接偶联成CB-HRPI,另一半经Sephadex胶柱分离、纯化后再与HRP偶联得到CB-HRP I,并将其与CB-HRPSigma进行比较.三种样品所含HRP均为3.6％.应用舌-舌下神经核及胫前肌-脊髓前角细胞标记模型。CB-HRP I接近CB-HRP Sigma的标记效果,CB-HRP I的效果较差.

应用辣根过氧化物酶化学发光法检测毒素原性大肠杆菌方法的建立

利用活化酶标复合物（HRP－PBQ－PEI＋－NH3＋）直接标记毒素原性大肠杆菌不耐热肠毒素（ETEC－LT）基因片段（0．8kb）作探针。HRP在戊二醛作用下与单链靶DNA形成DNA和酶的共价复合物，与DNA探针结合的辣根过氧化物酶（HRP）催化相应的发光刺，经增强型化学发光反应（ECL）在普通X光胶片上自显影（CPD）检测ETEC－LT。结果可检测到0．03pg的纯质粒DNA和103的ETEC菌细胞，dotblot杂交证明该酶标基因探针仅与产LT肠毒素的ETEC杂交，其余均未见杂交阳性反应。结果表明酶（HRP）标基因探针化学发光法检测ETEC是一种简便、快速、安全，高度敏感和特异的非放射性标记基因探针检测技术。

基于双层酶信号放大及纳米功能界面的微囊藻毒素电化学免疫传感器

设计了一种基于纳米复合膜双层酶信号放大的竞争型电化学免疫传感器,用于检测痕量微囊藻毒素-LR(Microcystin-(leucine-arginine),MCLR)。在多壁碳纳米管修饰玻碳电极上电沉积金纳米粒子形成纳米复合膜,作为MCLR抗体(anti-MCLR)和辣根过氧化物酶(HRP)的固定化载体;引入HRP作为封闭剂或者通过抗体捕获HRP标记的MCLR(HRP-MCLR),起封闭活性位点及协同催化的作用。利用MCLR与HRPMCLR对纳米复合膜所固载抗体活性位点的竞争结合模式,采用微分脉冲伏安法(DPV)测定电极界面上HRP酶催化过氧化氢(H_2O_2)氧化对苯二酚(HQ)产生的还原电流,实现MCLR的定量检测。此传感器具有良好的特异性、稳定性与灵敏度,线性检测范围为0.1~100.0 μg/L,检出限为0.038 μg/L(S/N=3),对实际水样的加标回收率为72.9%~117.3%。

黄曲霉毒素B1间接竞争化学发光酶免疫分析方法的建立

本试验建立了一种用于检测玉米中黄曲霉毒素B1的间接竞争化学发光酶免疫分析方法。以辣根过氧化物酶催化鲁米诺一过氧化氢一对碘苯酚作为发光体系，通过对包被抗原、检测抗体和酶标二抗浓度的优化建立其标准曲线。

基于纳米金和辣根过氧化物酶双标记抗体的黄曲霉毒素B_1高灵敏检测方法的建立及应用

黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)在自然界普遍存在,可污染多种粮食作物和饲料,给动物和人类健康造成严重威胁。为建立AFB_1高灵敏度的快速检测方法,本研究通过采用纳米金颗粒(Au nanoparticles,AuNPs)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)双标记AFB_1单克隆抗体,建立新型酶联免疫检测方法(HRP-AuNPs IC-ELISA),检测下限(IC10)为0.017ng/mL,检测区间(IC_(20)–IC_(80))为0.026–0.376ng/mL,半数抑制率(IC_(50))为0.099ng/mL,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.7%、9.3%、2.1%和5.3%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素B_1、桔青霉素、展青霉毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。在玉米和面粉样本中的加标回收率可达88.93–103.55%,与LC-MS/MS同时对天然样本中AFB_1含量进行检测,结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的HRP-AuNPs IC-ELISA耗时短且灵敏度高,可用于实际样本中AFB_1的快速定量检测与分析,也为其他霉菌毒素的精准检测技术开发提供参考。

破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒的研制

目的 研制检测破伤风IgG的酶联检测试剂盒。方法 以精制破伤风类毒素进一步纯化后作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG作为抗体制备ELISA试剂盒,并进行敏感性、特异性及重复性检测。结果 试剂盒敏感性可达0.003 9 IU/ml,特异性达95％以上,重复性好,CV<7％,试剂盒置于37℃、7 d敏感性无明显改变。结论 成功地制备了破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒。

大鼠膀胱经背段的神经解剖学特征——CB-HRP逆行示踪研究

目的 通过对大鼠膀胱经躯干段经过的背阔肌及背最长肌的相应脊髓和背根神经节内标记神经元的研究 ,了解经脉线及非经脉线神经支配的区别和经络的神经解剖学特征 ,从而为经络实质的研究提供形态学基础。方法 用霍乱毒素 B亚单位结合辣根过氧化物酶 ( CB-HRP)对膀胱经经脉线及非经脉线上背阔肌和背最长肌进行逆行示踪研究。结果 经脉线上脊髓腹角运动神经元和背根节感觉神经元标记细胞数明显多于非经脉线 ,并且经脉线上脊髓腹角运动神经元有较为广阔的树突野。结论 在经脉线所通过的背阔肌及背最长肌中 ,感觉及运动神经终末密集 ,经络的功能可能与丰富的传入传出神经支配有关。

以CB-HRP标记支配大鼠坐骨海绵体肌、球海绵体肌和胸乳突肌的神经元及其树突

给成年雄鼠的坐骨海绵体肌,球海绵体肌注射酶标类霍乱原,在腰骶段脊髓灰质可标出三组神经元:背内侧组(DM)、腹组(V)及腹外侧组(VL)。各组神经元树突通过不同途径抵达软脊膜下,DM组神经元树突可达室管膜下。给雄鼠胸乳突肌注射CB-HRP,在颈髓标出:背内侧组(DM)、腹组(V)及位于Rexed第X板层(或Rexed第Ⅶ板层最内侧)的背内侧背组(RDM)三组神经元。RDM组的发现为胸乳突肌的特殊内脏运动的本质提供了新证据.DM组神经元树突可达软膜下和室管膜下,RDM神经元树突可达室管膜下。上述软膜下及室管膜下树突的存在,反映了中枢运动神经元“旁侧回路”存在的普遍性。

螯合剂在ELISA检测饲料中黄曲霉毒素B1上的应用研究

在饲料生产上，以无机盐形式添加来满足畜禽的微量元素需要仍为主要手段。目前必需微量元素添加剂的不科学补充主要表现为超量添加，尤其在配合饲料中使用高铜、高锌和高铁制剂。由此带来的霉菌毒素检测时，样品提取液中含有大量的金属离子．高浓度的重金属盐对EUSA检测体系中的辣根过氧化物酶（HRP）造成变性，抗体效价降低甚至失活。

肠毒素大肠杆菌LTh-STIb二价基因探针的克隆及其应用研究

在肠毒素大肠杆菌（ETEC）LTh－STIa－STIb三价基因探针的基础上，用限制性内切酶EcoRI酶切，回收片段，重新构建LTh－STIb二价基因探针的克隆株。用辣报过氧化物防复合物（HRP）直接标记二价基因探针，建立了增强型化学发光反应（ECL）检测ETEC的方法，其敏感性可测到0．1pg的质粒DNA或由10个菌体培养而来的ETEC细胞，与同位素标记杂交方法的敏感性一致，且此探针仅与产STIb、LTh肠毒素的人源性ETEC菌株杂交，与STIa肠毒素菌株及其它非ETEC菌株均无杂交信号。该探针与三公探针及LTh单价探针联合使用，能间接将LTh、STIa和STIb三种肠毒素分型。结果表明该方法简便快速、特异敏感、无放射性污染，是ETEC实验室诊断及分子流行病学调查的有效工具。

HRP神经逆行示踪评价GDNF修饰的神经移植复合体对大鼠脊髓运动神经元的保护作用

目的:采用大鼠坐骨神经缺损桥接动物模型,应用霍乱毒素B-辣根过氧化物酶(CB-HRP)神经逆行示踪技术对构建的GDNF修饰的神经移植复合体的运动神经元保护作用进行评价。方法:20只成年Wistar大鼠随机分为4组:A组(n=5)细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;B组(n=5)雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;C组(n=5)GDNF基因修饰的雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;D组(n=5)自体神经桥接组。损伤各组12周时应用辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术进行脊髓前角运动神经元的再生评价。结果:12周时脊髓前角运动神经元再生评价结果提示:C组优于A、B组,而与D组相比差异无显著性意义。结论:雪旺细胞的转基因处理可能弥补单纯细胞移植神经营养因子含量的不足,而可能达到与自体神经移植相似的效果。

大鼠心脏神经与内关穴区正中神经投射同源关系及其递质属性的实验研究

目的:观察内关穴区正中神经终末支和心脏神经的投射定位及神经递质属性。方法:本实验采用酶标示踪、免疫组化和非荧光双标方法,观察酶标阳性细胞,以确定大鼠心脏与内关穴区的神经投射定位,并检测神经元的肽类性质。结果:在C5～C7脊神经节和迷走神经节中出现辣根过氧化物酶(HRP)和类霍乱原β亚单位(CB)均为阳性的双标阳性神经元脊神经节中有P物质(SP)、神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽(CGRP)免疫组化阳性的双标细胞,迷走神经节中有SP和NPY免疫组化阳性的双标细胞。结论:心脏和内关穴区的神经纤维有一部分来自脊神经节和迷走神经节中的同一个神经元。

中缝背核内远位触液神经元超微结构及其与周围组织的联系

目的观察中缝背核内远位触液神经元的超微结构及其与周围组织的联系,为探讨该类神经元的功能奠定形态学基础。方法使用霍乱毒素亚单位B与HRP结合物(CB-HRP)-电镜法。结果1.中缝背核内远位触液神经元具有一般神经元的形态及各种细胞器结构;2.CB-HRP沉淀物主要分布在触液神经元高尔基复合体的trans面以及溶酶体内;3.触液神经元与其他中枢神经元之间存在着方向相反的两种突触联系。结论1.中缝背核内远位触液神经元在形态及细胞器构成上与其他中枢神经元未见明显不同;2.其高尔基复合体和溶酶体在摄取外来物质的代谢和转运过程中可能存在特殊功能;3.该类神经元可以在中缝背核与脑脊液之间起到双向传递的作用。

电针对“关元”穴区初级感觉传入神经元节段分布的影响

目的：用CB—HRP示踪法对大鼠“关元”穴传入的神经节段分布进行研究。方法：SD大鼠随机分成对照组和电针组，分别在“关元”穴注入0．03％CB-HRP 20μL。注射后，电针组动物每天给予“关元”穴电针30min，共3d。84h后，观察两组动物的双侧相应节段的背根神经节（DRG）中阳性标记细胞的形态学变化和数量的变化。结果：在两组动物的T11～L3双侧DRG中，都存在有与“关元”穴相关的CB—HRP标记细胞；电针组的标记细胞总数显著高于对照组；标记细胞总数分布最多的节段，对照组在L3，电针组比对照组高一节段，在L2；两组标记细胞的形态学观察，均可分为大、中、小三型细胞，其中以小型细胞占多数。结论：针刺大鼠“关元”穴，可使穴位区局部感觉神经初级传入功能活动加强，L2可能是针刺“关元”穴信号传入脊髓的主要途径。

ETEC K88菌毛蛋白抗体PPA-ELISA检测方法的建立

以纯化的大肠埃希菌K88菌毛蛋白为包被抗原,建立了检测大肠埃希菌K88IgG抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA的最适反应条件,即最佳抗原包被浓度为1μg/mL,兔抗体稀释倍数为1∶10,猪抗体稀释倍数为1∶100,确定最佳封闭液为50g/L脱脂奶粉,最佳封闭时间为0.5h,血清反应时间0.5h,二抗反应时间1h,底物室温反应时间为15min,阴阳性临界值兔血清为0.33、猪血清为0.45。证实该间接PPA-ELISA方法特异性强、重复性好、敏感度高,可以作为疫苗效力检验和流行病学调查的参考方法。

鸡肝脏交感传入神经元的定位研究

用霍乱毒素结合辣根过氧化物酶(CT-HRP)逆行追踪法,研究了支配家禽肝脏的交感传入神经元定位。选用体重1.5 kg^2.5 kg的成年母鸡7只,将CT-HRP溶液注入肝门区,动物存活3 d^4 d后,经左心室灌流固定,取胸、腰和荐段各脊神经节,制成50μm的连续冰冻切片,TMB法呈色反应,置明视野显微镜下观察统计。结果发现,支配鸡肝脏的交感传入神经元胞体位于T2~T7脊神经节,其峰值位于T5、T6脊神经节。说明支配鸡肝脏的交感传入神经元胞体仅位于胸段脊神经节。

鸡胆囊交感节后神经元的定位研究

为了找出支配鸡胆囊交感节后神经元的分布规律,选用体重1.5 kg^2.5 kg的成年母鸡6只,将CT-HRP溶液注入胆囊壁,动物存活3 d^4 d后,经左心室灌流固定,取内脏神经节、肾上腺神经节以及双侧胸、腰和荐段交感干神经节,制成50μm的连续冰冻切片,TMB法呈色反应,置明视野显微镜下观片统计。结果发现,支配鸡胆囊的交感传出神经元胞体位于内脏神经节(占41.1%)、肾上腺神经节(占40.5%)和T2~T7交感干神经节(占18.4%),在交感干神经节中标记细胞的峰值位于T5、T6交感干神经节。所有的标记细胞以位于右侧的占优势。