霍山石斛多糖对动脉粥样硬化小鼠脂质代谢的影响及菌群结构改变

目的 探索霍山石斛多糖(Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng polysaccharides,DHP)对动脉粥样硬化模型小鼠的降脂作用并探讨其对肠道菌群的调节作用及变化特征。方法 8周龄ApoE^(-/-)小鼠12只,随机分为H-1组和H-2组。两组均给予高脂饮食喂养(HFD),8周后H-2组DHP(400 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃6周,H-1组灌胃生理盐水,期间两组分别于0、4、8、14周采集血样;并采集H-2组粪便,分别编号B、E、F、D;在第14周处死所有小鼠后收集肝肾组织。试剂盒检测血液指标,宏基因组学分析粪便样本。结果DHP灌胃后明显降低小鼠血脂水平(P<0.05)且对肝肾无明显损伤。宏基因组学结果显示,与B组相比,EF组Deferribacterota、Faecalibaculum相对丰度增加,Bacteroidota、Prevotella、Lachnoclostridium相对丰度降低(P<0.05);D组相较于EF组Bacteroidota、Prevotella、Lachnoclostridium相对丰度增加,Deferribacterota、Bacillota、Oscillibacter、Faecalibaculum相对丰度减少(P<0.05)。另Actinomycetota、Faecalibaculum_rodentiumen等菌群随HFD喂养时间的增加而增加(P<0.05),Parbacteroides和Lachnoclostridium等随HFD喂养时间的增加而减少(P<0.05)。结论 随着动脉粥样硬化的发展,小鼠肠道菌群结构发生明显变化;DHP的干预有改善小鼠菌群结构及脂质代谢的趋势。

霍山石斛枫斗溯源及不同贮藏年份挥发性成分分析

目的:对霍山石斛与枫斗的关系进行溯源,并探讨贮藏年份对霍山石斛枫斗(以下简称霍斗)挥发性成分的影响。方法:通过文献考证结合实地观察进行溯源;采用气相色谱-质谱法(GC-MS)对贮藏年份为0、2、4、6年的霍斗挥发性成分进行分析,根据峰面积计算各成分的相对质量分数,并进行GC-MS图谱相似度分析。结果:枫斗最早来源于霍山石斛,霍斗应具备完整的“龙头凤尾”特征,绿毛枫斗多指霍斗;12批不同贮藏年份霍斗中均鉴定出25个主要共有挥发性成分,其中脂肪酸类8个、烷烃类6个、醇类4个、酚类3个、酯类2个及其他类2个;12批样品GC-MS图谱的相似度为0.851~0.997,各样品与对照图谱的相似度为0.949~0.996,相似度良好;主成分分析结果表明,贮藏年份为0、2年的枫斗聚为一类,4、6年的聚为另一类,采用正交偏最小二乘法-判别分析进一步筛选出导致差异的成分主要是亚油酸、亚麻酸等脂肪酸类成分。结论:霍斗“龙头大、凤尾小”的特征易与其他枫斗区分;不同贮藏年份霍斗挥发性成分的种类基本一致,但相对质量分数存在一定差异,贮藏年份在6年之内挥发性成分基本稳定。

霍山石斛2种真菌病害病原菌分离鉴定及抑菌药剂筛选

为了提高霍山石斛Dendrobium huoshanense品质和产量,通过对霍山县多地进行田间调查,发现霍山石斛茎部病害主要为白绢病,叶部病害主要为炭疽病。采集发病典型的新鲜病株作为样本,通过柯赫氏法则验证、形态学观察以及分子生物学鉴定证明了白绢病的致病菌为齐整小核菌Sclerotium rolfsii Sacc.的有性态罗氏阿太菌Athelia rolfsii;炭疽病的致病菌为胶孢炭疽菌复合种下的Colletotrichum cameliae。同时测定了12种防治药剂对白绢病及炭疽病的室内抑菌效果,发现25%吡唑嘧菌酯悬浮剂2000倍液、37%苯醚甲环锉水分散粒剂3000倍液、80%乙蒜素乳油2000倍液对白绢病病原菌菌丝生长的抑制效果最好,37%苯醚甲环锉水分散粒剂3000倍液、80%乙蒜素乳油2000倍液对炭疽病病原菌菌丝生长的抑制效果最好。目前,关于霍山石斛病害病原菌种类鉴定及防控药剂的研究未见任何报道,本文通过试验为霍山石斛种植过程中绿色防控提供了理论基础。

霍山石斛产业发展现状及建议

霍山石斛是六安市最具代表性的中药材,药用历史悠久,健康价值独特,文化底蕴深厚。霍山石斛产业在中药产业和农业的高质量发展中具有重要的带动引领作用。在大农业和大健康背景下,系统梳理了霍山石斛产业发展现状,分析了当前霍山石斛产业发展的机遇和面临的挑战,并从霍山石斛的药食标准、科研支撑、精深产品开发、创新要素集聚和品牌效应方面提出了建议,以期为霍山石斛产业高质量发展提供参考和决策依据。

霍山石斛内生真菌Trichoderma sp.次生代谢产物研究

目的研究霍山石斛内生真菌Trichoderma sp.的次生代谢产物。方法采用正相硅胶、葡聚糖凝胶、反相C-18及制备液相结合二极管阵列检测器等多种色谱技术分离纯化,所获得的化合物经紫外光谱、核磁共振波谱和质谱数据鉴定。结果从霍山石斛内生真菌Trichoderma sp.中定向分离并鉴定了1个新化合物及8个色原酮和蒽醌类化合物,分别为trichphenoid(1),2,3-dialkylchromone(2),5-hydroxy-2,3-dimethyl-7-methoxychromone(3),7-hydroxy-2-(2'-hydroxypropyl)-5-methylchromone(4),2,5-二甲基-7-羟基色酮(5),1,7-dihydroxy-3-hydroxymethyl-9,10-anthraquinone(6),1-hydroxy-3-hydroxymethyl-9,10-anthraquinone(7),pachybasin(8),大黄酚(9)。结论所有化合物均为首次从霍山石斛内生真菌Trichoderma sp.中分离得到,化合物1为新化合物。

霍山石斛多糖抑制帕金森病模型神经炎性损伤作用研究

目的研究霍山石斛多糖(DHP)对帕金森病(PD)模型神经炎性损伤的作用。方法2022年6月至2023年2月,将小胶质细胞BV-2分为正常组(不做任何干预正常培养)、模型组[以1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导]、DHP组(先行2~400 mg/L DHP干预,后加模型组相同剂量MPP+诱导),应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞白细胞介素(IL)-1β含量;30只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组、DHP组,每组10只。设置DHP等效治疗剂量即350 mg/kg为DHP组。造模完成后,正常组和模型组灌胃双蒸水0.5 mL,1次/天,持续2周;DHP组灌胃0.5 mL DHP溶液,浓度为15.4 g/mL,1次/天,持续2周。通过平衡木实验和转棒试验观察小鼠平衡能力、肌力以及运动协调力;ELISA检测小鼠中脑组织IL-1β和IL-18炎症因子表达水平;免疫荧光染色检测小鼠中脑黑质离子钙结合衔接分子1(Iba-1)和黑质酪氨酸羟化酶(TH)表达水平。结果实验结果显示,与正常组比较,BV-2细胞模型组IL-1β水平显著升高[(76.32±6.18)ng/L比(51.12±4.72)ng/L,P<0.05];与模型组比较,DHP组IL-1β水平降低(P<0.05),且在2.0~100.0 mg/L内呈剂量依赖性下降。与正常组比较,模型组通过平衡木时间显著延长(P<0.05),在棒时间缩短(P<0.05),中脑组织IL-1β[(190.10±14.68)ng/L比(80.46±15.18)ng/L]和IL-18水平升高(P<0.05);与模型组比较,DHP组通过平衡木运动时间缩短(P<0.05),在棒时间延长(P<0.05),DHP组中脑组织IL-1β[(89.69±14.31)ng/L]和IL-18水平降低(P<0.05)。免疫荧光结果显示,与正常组比较,模型组中脑黑质Iba-1表达显著升高(P<0.05),TH表达下降(P<0.05);与模型组比较,DHP组中脑黑质Iba-1表达显著降低(P<0.05),TH表达升高(P<0.05)。结论DHP可能通过抑制小胶质细胞过度活化,进而降低PD模型神经炎性损伤,发挥神经保护作用。

霍山石斛对脾阴虚型慢性萎缩性胃炎大鼠免疫功能的影响

目的探讨霍山石斛对脾阴虚型慢性萎缩性胃炎大鼠免疫功能的影响。方法将36只SD大鼠随机分为正常组,模型组,霍山石斛低、中、高剂量组,每组6只,通过灌服N-甲基-N-硝基-亚硝基胍复合温热药(附子、干姜、肉桂)及劳倦法建立脾阴虚型慢性萎缩性胃炎大鼠模型。霍山石斛低、中、高剂量组大鼠分别按0.7、1.4、2.8 g/kg灌胃霍山石斛水悬液,正常组和模型组大鼠灌胃等容积生理盐水,持续灌胃21 d。比较各组大鼠的活动情况,体质量变化,脾脏指数和胸腺指数变化,脾脏组织形态学变化,外周血T淋巴细胞亚群、白细胞计数和分类,血清中免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG),以及血清和胃黏膜组织中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)水平。结果各给药组大鼠脾脏指数和胸腺指数均显著上升(P<0.05);脾脏组织病理状态改善;血清IgA、IgM、IgG水平显著上升(P<0.05);血清和胃黏膜组织IL-2、TNF-γ水平均有不同程度的升高(P<0.05),IL-4和IL-10水平均有不同程度下降(P<0.05)。此外,霍山石斛可提高大鼠外周血白细胞计数、淋巴细胞计数和中性粒细胞计数(P<0.05);能上调外周血中CD3+T淋巴细胞水平、CD4+T淋巴细胞水平、CD4+/CD8+,下调CD8+T淋巴细胞水平(P<0.05)。结论霍山石斛可提高脾阴虚型慢性萎缩性胃炎大鼠的免疫功能。

一种霍山石斛露酒的研制

本文研究了霍山石斛露酒的最佳调配工艺,通过单因素和正交试验,获得最佳配方为:基酒B、酒精度52%vol、提取液4%。该霍山石斛露酒具有“微黄,香气协调,醇甜柔和,甘润净爽,余味怡畅”的风格特点。产品质量符合国家标准要求,且富含多糖、多酚和生物碱类健康性成分。

霍山石斛种植技术及其比较分析

霍山石斛目前成熟的种植技术有大棚种植、贴树种植、林下碎石仿原生态种植以及林下山谷原石拟境种植,其种植所用的种苗均来自植物组培苗,植物组培苗生产成本高,且在培育过程都存在变异倾向。本文对大棚种植、贴树种植、林下碎石仿原生态种植以及林下山谷原石拟境种植这4种种植技术进行了总结,并从投资成本、收获产量、品质等方面对4种种植技术进行比较,提出了利用共生菌让种子在野外环境下自然萌发的新技术,以期为霍山石斛的高效种植提供参考。

霍山石斛与其他中药材协同作用的研究现状与趋势

霍山石斛是中国国家重点二级保护野生植物,具有极高的价值。其主要活性成分包括多糖、生物碱、氨基酸等,具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用。随着对霍山石斛研究的不断深入,人们发现霍山石斛与其他中药材联合使用时,往往能够产生协同作用,增强治疗效果。因此,研究霍山石斛与其他中药材的协同作用具有重要的理论和实际意义。

霍山石斛多糖对糖尿病性白内障大鼠眼球晶状体组织抗氧化作用的研究

目的研究霍山石斛多糖对糖尿病性白内障大鼠眼球晶状体组织的抗氧化作用。方法采用链脲佐菌素对SD大鼠腹腔注射制造糖尿病性大鼠白内障模型,酶法测定各组大鼠眼球晶状体组织的谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、蛋白质羰基化产物的含有量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物岐化酶(SOD)的酶活力。结果霍山石斛多糖能够显著增加糖尿病性白内障大鼠晶状体组织中GSH水平、降低MDA及羰基的含有量,提高其GSH-PX、GR、GST、SOD、CAT酶活力。结论霍山石斛多糖可能通过干预氧化应激途径延缓糖尿病性白内障的发展。

霍山石斛不同分子量多糖体外抗氧化研究

以霍山石斛苗总多糖(ST)和40%、50%、60%、80%终浓度的乙醇连续沉淀4种多糖组分(S1、S2、S3和S4)为材料,在超氧自由基、H2O2、羟基自由基、还原力、Fe2+-VC诱导的脂质过氧化和H2O2诱导的红细胞溶血等不同体系下进行霍山石斛多糖体外抗氧化研究。结果表明:不同相对分子质量霍山石斛多糖均有抗氧化作用,其中相对分子量最大的S1对H2O2、·OH的清除作用强于其他多糖组分,IC50分别为0.15mg/ml和1.81mg/ml,并具有显著的还原力和抑制Fe2+-VC诱导脂质过氧化能力,最大效应分别为0.312和45.67%,表明霍山石斛多糖的抗氧化能力与其相对分子质量大小有关。

霍山石斛杂交种与其亲本生长生理指标及药效成分含量的比较

目的:对霍山石斛杂交种与其亲本进行生长、生理指标及主要药效成分含量的比较,为霍山石斛种质资源改良提供理论依据。方法:叶绿素含量用无水乙醇法,光合速率用CI-310便携式光合作用测定系统测定;多糖含量用浓硫酸-苯酚比色法,总生物碱含量用溴甲酚绿酸性染料比色法测定。结果:杂交种生长量积累表现为近铜皮石斛的特性,较霍山石斛有极大优势;一年生杂交种叶绿素含量及光合速率均极显著高于其亲本;杂交种二年茎与三年茎多糖含量和总生物碱含量均与霍山石斛接近。结论:杂交种在生长和药效成分积累方面结合了2个亲本之间的优势,具有很大的开发利用前景。

霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用

研究霍山石斛多糖对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,探讨多糖抗肿瘤作用与肿瘤相关基因表达之间的相关性。胃癌细胞SGC-7901生长的MTT检测表明,霍山石斛总多糖(DHP)、阴离子交换色谱水洗组分(DHP-1)及0.05 mol/L盐洗组分(DHP-2)能显著抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,并呈时间和剂量依赖性,其中以DHP-2效果最好。光学及激光共聚焦显微镜观察发现,DHP-2处理过的胃癌细胞形态固缩,凋亡显著。荧光定量RT-PCR技术检测表明,DHP-2不仅能明显下调原癌基因c-myc的表达,其表达仅为对照的42.34%,而且能显著提高抑癌基因野生型p53的表达,其表达比对照高1.04倍。结果表明:霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用与其组分、浓度及作用时间相关,其可能的作用机制是多糖通过下调c-myc基因和上调p53基因的表达来发挥抑制效果。

香蕉提取物对霍山石斛试管苗壮苗的影响

研究了不同香蕉品种的提取物及其添加方式和质量分数对霍山石斛试管苗壮苗的影响,并对香蕉上清液的可溶性糖质量浓度进行了检测.结果表明:当1/2MS附加质量分数为20%菲律宾香蕉上清液时,对霍山石斛试管苗壮苗的促进作用最佳,而且试管苗可溶性糖质量浓度也最高,附加海南香蕉时促进作用次之,广东芝麻香蕉作用效果最差,这与三种香蕉品种可溶性糖质量浓度高低的检测结果相一致.

霍山石斛原球茎的诱导及培养方式对原球茎增殖的影响

以霍山石斛试管苗带节的茎段为材料,研究不同激素组合对霍山石斛原球茎诱导的影响,并比较4种不同培养方式对霍山石斛原球茎增殖的影响。结果表明,生长物质2,4-D是霍山石斛原球茎诱导的关键因子,霍山石斛原球茎诱导的适宜培养基为Knudson+2,4-D 0.1 mg.L-1+KT 0.05 mg.L-1;霍山石斛原球茎增殖培养阶段,主要采用液体振荡培养方式,适时转接于固体培养基上交替培养,调节原球茎生长状态,采用这种改进的培养方式生产的原球茎可用于生物反应器的大规模培养。

Box-Behnken法优化提取霍山石斛活性多糖的研究

目的:为获得较高的多糖提取率,本文探讨了霍山石斛多糖的提取工艺及多糖脱色方法。方法:研究了多糖提取过程中影响浸提的几个因素。包括提取温度、提取时间、料液比、提取次数和提取pH,并通过Box-Behnken法优化了工艺条件,建立了工艺模型。结果:当提取温度为69.4℃,pH值为5.9,料液比为1∶20,提取次数为2次,提取时间为1.57 h时,霍山石斛多糖提取率最高,达到0.1821 g/g。DEAE-52脱色法效果较佳,色素脱除率达到65.47%。结论:采用Box-Behnken法建立的多糖提取工艺模型能很好地预测实验结果,偏差1.6%。通过模型方程求得最佳工艺条件,多糖提取率高,脱色效果好。

道地药材霍山石斛及其相似种的分子鉴定

为检测霍山石斛与霍山产铜皮石斛、霍山产铁皮石斛及其它产地的几种药用石斛的差异,对霍山石斛及其相似种进行ISSR分子标记比较研究。结果表明,尽管霍山石斛及其相似种的外部形态差异较小,但在ISSR分子标记指纹图谱上却存在着显著而稳定的差异。因此,根据ISSR分子标记指纹图谱所显示的多态性位点差异,能准确鉴别霍山石斛及其相似种植物及药材。此方法简单、稳定性高、可重复性好,在霍山石斛的分子鉴定研究中有较大的应用价值。

霍山石斛多糖的肠黏膜免疫调节活性及在小肠中的吸收分布

目的 :研究霍山石斛多糖(Dendrobium huoshanense polysaccharide,DHP)的小鼠肠黏膜免疫调节活性以及在小肠内的吸收分布。方法:通过溴化氰活化法对DHP进行荧光标记,检测荧光标记前后的肠黏膜免疫调节活性;通过口服和离体小肠培养以及Peyer’s结细胞培养,用激光共聚焦显微镜检测DHP在小肠内的吸收分布以及与Peyer’s结细胞的结合。结果:DHP在质量浓度为25、50、100μg/mL和200μg/mL时,其肠黏膜免疫调节活性分别提高到对照组的112.8%、131.1%、137.6%和160.5%,荧光标记不改变DHP肠黏膜免疫活性;DHP在体内和体外均可被小肠吸收,分布于肠黏膜固有层内,并可与Peyer’s结内细胞结合。结论:DHP具有肠黏膜免疫调节活性,可以通过Peyer’s结细胞被小肠吸收,并分布于固有层内。

霍山石斛人工种子包埋繁殖体和萌发

以腋芽、原球茎、不定芽为繁殖体,制作霍山石斛人工种子,利用正交设计探讨麦芽糖、6-BA/NAA、活性炭、海藻酸钠、离子交换时间五个因素对霍山石斛人工种子萌发的影响;并对人工种皮的糖分泄漏率以及pH的变化进行测定,另外对霍山石斛人工种子的贮藏和防腐做了初步研究。结果表明:麦芽糖是影响霍山石斛人工种子萌发的主要因素,适宜的处理组合为麦芽糖含量为4%、6-BA/NAA10:1,活性炭浓度0.1%,海藻酸钠浓度4.0%,将含有繁殖体的此配方溶液滴入2%CaCl2溶液中,进行离子交换反应,反应时间10min。以腋芽,原球茎,不定芽为繁殖体的霍山石斛人工种子萌发率分别可达到65.6%、90.1%、75.2%,萌发后幼苗的存活率分别为16.1%、80.6%和19.1%。4°C下贮藏20d后,霍山石斛人工种子以腋芽,原球茎,不定芽为繁殖体的萌发率分别为3.3%、10.6%、5.2%。包埋剂加入多菌灵后,自然条件下萌发率分别可以达到6.8%,13.8%,7.9%。