开口箭提取物对荔枝霜疫霉菌的抑制作用及其对荔枝果实的贮藏效果

目的寻找植物源抗菌物质用于果蔬采后病害的控制。方法对开口箭(Tupistrachinensis)根茎甲醇提取物进行了液-液分部萃取,利用生长速率法和果实接种病原菌的方法测定了提取物(萃)对荔枝霜疫霉菌(Peronophythoralitchii)的离体与活体抗菌活性,并用提(萃)取物处理荔枝进行了贮藏试验。结果开口箭甲醇提取物及其乙酸乙酯分部萃取物和正丁醇分部萃取物抑制荔枝霜疫霉菌菌丝生长的EC50分别为1598.10、662.86和1147.31μg.ml-1,用甲醇提取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物溶液处理,荔枝果实接种感病率明显降低,并且上述提(萃)取物具有防治荔枝贮藏病害发生和延缓主要品质性状劣变的作用。结论开口箭甲醇提取物及其乙酸乙酯分部萃取物和正丁醇分部萃取物对荔枝霜疫霉菌具有明显的离体和活体抗菌活性,对荔枝果实具有较好的贮藏效果。

开口箭甾体皂甙元的分离鉴定及其抗荔枝霜疫霉菌活性

在以荔枝霜疫霉菌为指示菌的生物活性测定导向跟踪下,运用TLC、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析和凝胶柱层析等分离纯化方法,从开口箭(Tupistra chinensis)甲醇提取物的乙酸乙酯分部萃取物中分离纯化得到2个抗菌化合物。经现代光谱(MS、IR、1D NMR和2D NMR)分析,确定化合物1为1β,2β,3β,4β,5β,7α-六羟基螺甾-25(27)-烯-6-酮,化合物2为螺甾-25(27)-烯-1β,2β,3β,4β,5β,6β,7α-七醇。离体抗菌活性测定化合物1和化合物2抑制荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchii)孢子囊萌发的EC50分别为100.28 mg.mL-1和124.37 mg.mL-1。用质量浓度为500 mg.mL-1的两个化合物分别处理后接种霜疫霉菌,供试荔枝果实的发病率分别为16.7%和18.9%。

17种植物提取物对荔枝霜疫霉菌的抑制作用

为寻找果树病害防治的植物源抑菌物质,以乙醇为溶剂,采用超声波辅助提取法获得17种植物的提取物,并用提取物对荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchii Chen ex Ko et al.)进行抑菌试验,结果显示,丁香(Syringa aramaticum)、黄连(Coptischinensis Franch)、细辛(Asarum sieboldii)提取物5 mg/mL浓度处理药后7 d抑菌率均为100%,1 mg/mL浓度处理抑菌率则分别为60.68%、51.88%、15.64%,黄柏(Cortex Phellodendri)、苦参(Sophora flavescens)、花椒(Pricklyash Peel)提取物5 mg/mL浓度处理药后7 d抑菌率均达60%以上;5 mg/mL浓度处理花椒、黄连、黄柏、细辛提取物对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发抑制率都在60%以上,而花椒的抑制率最高,达73.08%。不同植物提取物抑菌效果受温度和pH的影响明显。

21种植物提取物对荔枝霜疫霉菌和芒果炭疽病菌的抑菌活性

采用菌丝生长速率法测定了巴核桃等21种植物甲醇提取物对荔枝霜疫霉菌和芒果炭疽病菌的抑菌活性。结果表明,以10 mg(干粉)/ml溶剂处理后5 d对荔枝霜疫霉菌抑菌活性较高的是巴核桃、大杨柳和甘草提取物,抑菌率分别为100%、87.72%、87.20%;对芒果炭疽病菌抑菌活性较好的是水茄提取物,其抑菌率为69.74%。

霜疫霉菌侵染对荔枝氧化作用的影响

淮枝、桂味和糯米糍 3种荔枝经接种霜疫霉菌后 ,果皮超氧化物歧化酶 (SOD)和过氧化氢酶 (CAT)活性下降 ;而过氧化氢 (H2 O2 )含量升高 ,超氧阴离子自由基 (O2 .)产生速率增加 ,丙二醛 (MDA)积累增多 ,与果实感病指数增加相一致 ,表明霜疫霉菌侵染加速荔枝氧化作用的进程。

食品防腐剂对荔枝霜疫霉菌抑制效果的研究

采用食品防腐剂———丙酸钙、山梨酸钾、苯甲酸钠、尼伯金甲酯、乙酯、丙酯、反丁烯二酸桂醇甘醇酯对造成荔枝果实腐烂的主要病菌———荔枝霜疫霉菌的抑制效果进行了研究.结果表明:在所用的7种食品防腐剂中,丙酸钙对荔枝霜疫霉菌的生长无抑制作用,反丁烯二酸桂醇甘醇酯的抑菌效果最好.

仙人掌苷对荔枝霜疫霉菌的生物活性和蛋白组学分析

活性测定表明仙人掌苷对荔枝霜疫霉菌菌丝生长具有良好的抑菌活性,EC50达到173.52μg/mL。为了从蛋白质水平探讨仙人掌苷对荔枝霜疫霉菌的抑菌机制,利用蛋白质双向电泳方法分析仙人掌苷处理前后荔枝霜疫霉菌蛋白质组表达的差异,结合飞行质谱以及数据库检索鉴定差异蛋白。结果发现,仙人掌苷处理后荔枝霜疫霉菌有16个蛋白发生了显著变化,其中11个下调表达蛋白,4个上调表达蛋白,1个诱导表达蛋白。其中鉴定的5种差异蛋白质为：线粒体二羧酸载体蛋白（DIC 1）、半胱氨酸合成酶A、ABC转运蛋白（ABCF-EF-3）、Class III stress response-re-lated ATPase以及假定蛋白BSU31030。功能分析发现这些蛋白在药物胁迫反应、氨基酸与硫代谢、细胞膜药物运输外排、能量代谢等方面发挥重要的作用。这为阐明仙人掌苷对荔枝霜疫霉菌抑制作用的分子机理提供了重要参考。

荔枝霜疫霉菌对烯酰吗啉的敏感性测定

荔枝霜疫霉病是荔枝最重要的病害之一,烯酰吗啉用于防治该病害.采用生长速率法测定了烯酰吗啉对2009-2012年采自广东、广西、福建和云南等地区的115个荔枝霜疫霉菌菌株的有效抑制中浓度值（EC50值）,结果表明：各菌株的EC50值介于0.0977～0.2226μg/mL之间,平均为0.1702 （±0.0026） μg/mL,最不敏感菌株的EC50值是最敏感菌株的2.28倍;所有菌株的EC50值频率分布呈连续单峰曲线,表明无抗药性亚群体.

31种植物甲醇提取物对荔枝霜疫霉菌和炭疽病菌的抑菌活性测定

以荔枝霜疫霉菌（Peronophythora litchii）和荔枝炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）两种荔枝上最为重要的病原真菌为供试菌,采用含毒介质的生长速率培养法,对采自广东省的31种植物的甲醇提取物对病原菌菌丝线性生长的抑菌活性进行离体测定。结果表明：在0.01 g/mL浓度下,对荔枝霜疫霉菌抑菌率大于60%的植物有9种,其中黄石斛（Dendrobium tosaense）、毛唇芋兰（Nervilia fordii）、葛（Pueraria phaseoloides）和土牛七（Thunbergia grandiflora）4种植物甲醇提取物的抑菌率达到100%;对荔枝炭疽病菌抑菌率大于60%的植物有2种,其中一点红（Emilia sonchifolia）的抑菌率达到100%,地丁草（Corydalis bungeana）的抑菌率为71.35%;同时对两种病原菌的抑菌率都大于50%的是地丁草（C.bungeana）。

多粘类芽孢杆菌CP7对荔枝霜疫霉菌的抗菌活性及其作用机制

多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa CP7菌株分泌的抗菌物质对荔枝霜疫霉菌等真菌具有很强的抑杀作用。用光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察发现,荔枝霜疫霉菌菌丝体经CP7菌株的抗菌物质处理后,菌丝发生不规则扭曲、萎蔫、干瘪,菌丝端部膨大等形态变化;经处理的菌体细胞组织结构受损,细胞膜结构模糊不清,看不到完整的外膜结构,细胞器消溶。处理后的荔枝霜疫霉菌孢子囊出现凹陷、干瘪、畸形;孢子囊外壁严重受损,原来厚实的外壁只剩一薄层,孢子囊内原有的微细结构消失,结构模糊不清,细胞器溶解,孢囊内物质大量外泄。抗菌物质还引起菌体细胞内磷的外泄,并对细胞呼吸速率和NADH氧化酶活力有抑制作用。

两种植物粗提物对荔枝霜疫霉菌的抑制作用

采用化学提取法获得大蒜(Allium sativum)、阴香(Cinnamomum burmannii)两种植物粗提物,并就粗提物对荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchii)的抑菌效果及其在不同pH和温度条件下的稳定性进行了研究.结果显示,大蒜和阴香粗提物对荔枝霜疫霉菌生长的抑制率分别为85.89%和95.39%,对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的抑制率分别为65.72%和87.34%;在一定pH和温度范围内,大蒜粗提物对荔枝霜疫霉的抑菌效果不受pH和温度的影响,阴香粗提物适宜抑菌pH为9,适宜温度为40℃.

荔枝霜疫霉的生防菌株与化学制剂的筛选

结果表明:枯草芽孢杆菌BS-2、解淀粉链芽孢杆菌TB2和枯草芽孢杆菌TL2菌株对荔枝霜疫霉有明显的抑制作用,108cfu.mL-1的TB2和BS-2菌液对荔枝霜疫霉菌丝生长和孢子囊萌发的抑制率最高,分别为63.34%和79.29%;化学农药烯酰吗啉对荔枝霜疫霉的菌丝生长和孢子囊萌发具有较好的抑制效果,其EC50分别为1.70和0.84μg.mL-1.

荔枝果实对霜疫霉侵染抗性评价体系建立及初步应用

为建立稳定的荔枝果实对霜疫霉侵染抗性评价体系,研究不同浓度孢子囊悬浮液浸染、不同症状调查时间对不同荔枝品种病情指数的影响,并用建立的方法研究部分荔枝品种对霜疫霉侵染抗性的初步评价。结果表明:以4×104个/m L孢子囊浓度悬浮液为接种浓度,‘妃子笑’和‘大丁香’离体果实病征发生速度适中,侵染第72小时的病情指数比较稳定,能够更好地区分品种间的抗病性差异。2012~2016年,用该指标体系先后评价了15个荔枝品种对霜疫霉侵染的抗性,结果发现不同年份这些品种的抗性分级基本相同,‘黑叶’和‘桂味’是表现最为稳定的抗病和感病品种,证实了建立的抗性评价体系的稳定性。

植物粗提物对荔枝霜疫霉的抑菌活性研究

为寻找植物源抑菌物质对果树病害进行防治,采用超声波提取法获得16种植物的乙醇粗提物,通过菌丝生长法和孢子囊萌发法测定粗提物对荔枝霜疫霉(Peronophythora litchi)的抑制作用。结果表明,白鲜、虎杖和蛇床粗提物抑菌活性较强,5mg/m L条件下白鲜、虎杖和蛇床在抑菌率分别是71.87%、54.03%和53.79%,对孢子囊萌发抑制率分别9.40%、90.95%、61.93%,白鲜和虎杖的复配物抑荔枝霜疫霉菌丝生长起增效作用。不同植物的乙醇粗提物对荔枝霜疫霉的抑菌效果不同,植物粗提物的复配能增强植物的抑菌活性。

生防细菌PP19和SI17菌悬液对荔枝霜疫病的防病作用初探

【目的】筛选新型高效的生防有益细菌防治果树病害如采后荔枝霜疫病,减少在运输过程中的损失,延缓褐变;揭示生防菌发挥防病作用的可能机制。【方法】将前期优选的生防解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)PP19和生防乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)SI17,分别制备其菌体悬浮液,喷雾预处理采后荔枝果实,24 h后喷雾接种霜疫霉菌(Peronophythora litchii)SC18,随后观察果实病害严重度,检测不同时间点果皮对应的酶活性或物质含量。【结果】生防菌PP19和SI17菌悬液均显著降低采后荔枝霜疫病的发生,防效分别达到39.59%~88.76%和18.08%~91.01%;菌悬液提高果皮CAT、SOD、GLU、PAL、PPO活性,增加果皮花色素苷含量;同时,降低果皮花色素苷酶活性、H2O2含量及总酚含量。SI17比PP19更能提高植物几丁质酶活性。【结论】通过上述结果,推测两个生防菌发挥生防效果可能与改变了果皮抗病相关酶活性或物质含量有关。

海洋真菌的筛选及其对离体荔枝果霜霉病和炭疽病的防效

从广西北部湾红树林区的近海海底沉积物与海水样品中分离出64株海洋真菌,以荔枝霜疫霉菌Peronophythora litchii和荔枝炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides为拮抗对象,发现有8株菌株对病原菌菌丝生长有较强的抑制作用,其中菌株MF-3、MF-13、MF-15和MF-16的发酵滤液对荔枝霜疫霉菌的抑制效果较好,菌丝生长抑制率达到94%以上;菌株MF-3和MF-16的发酵滤液对荔枝炭疽病菌抑制效果较好,菌丝生长抑制率均在70%以上。用菌株MF-3、MF-6、MF-8、MF-13和MF-9的发酵滤液进行荔枝离体果防病保鲜试验,结果表明常温下保鲜处理2~4d后,鲜果的褐变指数小于对照组,其中菌株MF-9防褐变效果最好。在26~32℃下,用5株菌的发酵滤液分别浸泡鲜果1d后接种荔枝霜疫霉,3d后菌株MF-6、MF-8、MF-9和MF-13处理的发病率分别是68.3%、71.67%、66.18%和80%,显著低于对照组的87.2%和烯酰玛琳的84.2%（P〈0.05）,能推迟鲜果晚发病1d。接种炭疽菌3d后,菌株MF-6处理的发病率仅为64.44%,与多菌灵（62.76%）和代森锌（62.54%）效果相当。形态学观察结合分子鉴定,确定菌株MF-3、MF-6、MF-8、MF-9和MF-13分别为布雷正青霉Eupenicillium brefeldianum、微紫青霉Penicillium janthinellum、阿达青霉Penicillium adametzii、草酸青霉Penicillium oxalicum和短棒曲霉Aspergillus clavatonanicus。

链霉菌4301菌株的抑菌活性与液体发酵的优化

从土样中分离筛选链霉菌4301菌株的代谢产物,固体培养4301菌株.结果表明,4301菌株对荔枝霜疫霉菌Peronophythora litchii和荔枝炭疽病菌Glomerella cingulata的抑菌圈透明,对荔枝霜疫霉菌的抑菌圈直径达到25.5mm.以荔枝霜疫霉菌为指示菌,对菌株4301发酵培养基和发酵条件进行优化研究,得到的最佳培养基组成(w)为:葡萄糖2%、可溶性淀粉2%、黄豆饼粉浸液3%、蛋白胨0.3%、FeSO40.001%、NaCl 0.2%、CaCO30.25%、K2HPO40.02%;优化后的培养条件:发酵时间为96 h、发酵温度为28℃、接种量(w)为8%、装液量为75 mL,优化后4301菌株对荔枝霜疫霉菌的抑菌圈直径达到28.8 mm.

荔枝霜霉病生物防治研究进展

【目的】对荔枝霜霉病生物防治研究现状及存在问题进行总结和分析,以期为后续研究及生产应用提供参考。【方法】以现有文献为依据,从植物活性筛选、微生物活性筛选、有效成分分析和产品开发4个方面总结荔枝霜霉病生物防治研究进展。【结果】自然界拥有丰富的荔枝霜霉菌生防资源。我国对荔枝霜霉病生物防治研究比较活跃,但现行研究以对拮抗植物、微生物的初筛为主要目的,停留在对拮抗生物代谢产物的活性测试水平,对活性物质的生化性质探讨不够深入,阻碍了荔枝霜霉病生防药物的开发与应用,资源价值没有真正得到实现。【建议】以拮抗荔枝霜疫霉菌活性成分为核心,加强对其结构鉴定、化学构效分析及其诱抗和抑菌机理等研究,为研制新型生物农药奠定更坚实的理论基础和物质基础。

枯草芽胞杆菌对离体荔枝果实霜疫霉病、炭疽病的防治效果

为了进一步明确从土壤中筛选得到的拮抗细菌OR-1、OR-2、OR-3、ON-6的分类地位和生防效果,采用形态学观察、理化特性结合分子生物学方法,鉴定这4株细菌皆为枯草芽胞杆菌Bacillussubtilis。拮抗菌对荔枝霜疫霉菌、炭疽菌菌丝生长均具有明显抑制作用,ON-6菌株的发酵液对菌丝生长的抑制率最高,分别为92.34%和70.36%,其次是OR-1菌株。拮抗菌处理组褐变指数均小于对照组以及杀菌剂处理组,且差异达显著水平(P<0.05),OR-1菌株防褐变效果最好。常温下,拮抗菌发酵液对离体鲜果病害防治效果优于对照组和杀菌剂处理组,其中ON-6菌株的防治效果最佳;4℃低温储藏处理40天后,拮抗菌发酵液处理组的防治效果高于对照和杀菌剂处理组,且差异显著(P<0.05),以ON-6和ON-3菌株的防治效果最佳。表明拮抗菌发酵液对荔枝鲜果上的霜疫霉菌和炭疽病菌有一定的抑制作用。

副干酪乳杆菌FX-6产抗菌肽粗提物对荔枝贮藏品质的影响

通过离体实验研究了副干酪乳杆菌FX-6产抗菌肽粗提物对荔枝霜疫霉菌生长的抑制作用,并且以施保克咪鲜胺处理作为对照,研究了两种质量浓度的抗菌肽粗提物在25℃条件下对荔枝贮藏品质的影响。结果表明,抗菌肽粗提物能显著抑制荔枝霜疫霉菌的生长,改善荔枝的贮藏品质,抑制霉变及褐变,维持果肉的营养成分含量;0.5 mg/m L的抗菌肽粗提物效果优于相同质量浓度的施保克咪鲜胺,且1.0 mg/m L抗菌肽粗提物的效果更佳。可见,副干酪乳杆菌FX-6产抗菌肽粗提物能有效延长荔枝的常温贮藏期,具有潜在的应用价值。