香青兰总黄酮调控TMAO介导的JAK/STAT轴抗大鼠动脉粥样硬化及RAW264.7细胞炎症的研究

目的探讨香青兰总黄酮(total flavonoids of Dracocephalum Moldavica L.,TFDM)抗大鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)及三甲胺氮氧化物(trimethylamine N-oxide,TMAO)加剧的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症的保护作用及其可能的作用机制。方法采用高脂饲料喂养联合腹腔注射维生素D3的方法建立SD大鼠AS模型,分为对照组、模型组、辛伐他汀组(15 mg·kg^(-1))、TFDM组(60、30、15 mg·kg^(-1)),建模同时进行给药处理,持续8周。生化检测方法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。HE染色检测主动脉组织病理变化,ELISA试剂盒检测血清中TMAO、IL-1β、IL-6及肝脏组织中TNF-α的表达,Western blot法检测主动脉中JAK、STAT、TNF-α蛋白的表达。此外,体外培养RAW264.7巨噬细胞,采用LPS+TMAO建立巨噬细胞炎症模型,TFDM(100、50、25 mg·L^(-1))进行干预。CCK-8测定细胞活力及增殖,RT-qPCR法检测细胞中TNF-α、IL-6、JAK、STAT mRNA的表达。结果TFDM可明显下调大鼠血清TC、TG、LDL-C水平及血清TMAO、IL-1β、IL-6和肝脏TNF-α的水平,减少主动脉的斑块沉积,下调主动脉中TNF-α、JAK、STAT的蛋白表达。此外,TFDM干预可明显下调TNF-α、IL-6、JAK、STAT mRNA的表达及JAK、STAT蛋白的表达。结论TFDM可降低血清中TMAO的含量,从而抑制JAK/STAT炎症信号通路,减缓炎症的发生,发挥抗AS作用。

香青兰总黄酮灌胃对博来霉素诱导大鼠肺纤维化的抑制作用及其机制

目的观察香青兰总黄酮灌胃对博来霉素诱导大鼠肺纤维化(PF)的影响,并基于肠道菌群和血清代谢组学方法探讨其可能的机制。方法将32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、香青兰总黄酮高剂量组及香青兰总黄酮低剂量组,每组8只。除对照组外,其余各组均采用气管内滴入博来霉素的方法建立PF模型;香青兰总黄酮高、低剂量组建模后分别给予香青兰总黄酮400、100 mg/kg灌胃,对照组和模型组分别给予等体积生理盐水灌胃,1次/天,连续21 d。各组末次给药后处死,采用HE染色及Masson染色观察肺组织病理情况,实时荧光定量PCR法检测肺组织胶原蛋白Ⅲ(COLⅢ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA相对表达量,16 S rRNA测序技术进行肠道菌群α、β多样性分析并检测其相对丰度,超高效液相色谱串联质谱分析并筛选血清关键差异代谢产物,并导入京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行代谢途径的富集分析。结果与对照组比较,模型组大鼠肺泡结构被破坏,肺泡间隔增宽,炎症细胞浸润明显,肺泡壁变厚,肺泡之间的距离增宽,可见蓝色条索状胶原纤维沉积;与模型组比较,香青兰总黄酮高、低剂量组大鼠上述病理改变减轻。与对照组比较,模型组大鼠肺组织COLⅢ、α-SMA mRNA相对表达量均升高(P均<0.05);与模型组比较,香青兰总黄酮高、低剂量组肺组织COLⅢ、α-SMA mRNA相对表达量均降低(P均<0.05)。α多样性分析结果显示,与对照组比较,模型组、香青兰总黄酮高剂量和香青兰总黄酮低剂量组大鼠肠道菌群Chao1、Ace均升高(P均<0.05)。β多样性分析结果显示,对照组、香青兰总黄酮高剂量和香青兰总黄酮低剂量组大鼠肠道菌群组成接近,与模型组大鼠肠道菌群组成比较均差异明显。在门水平上,与对照组比较,模型组大鼠拟杆菌门相对丰度降低而厚壁菌门/拟杆菌门升高(P均<0.05);与模型组比较,香青兰总黄酮高剂量组和香青兰总黄酮低剂量组大鼠拟杆菌门相对丰度升高而厚壁菌门/拟杆菌门降低(P均<0.05)。在属水平上,与对照组比较,其余三组大鼠嗜酸乳杆菌属相对丰度均降低(P均<0.05);与对照组、模型组比较,香青兰总黄酮高剂量组和香青兰总黄酮低剂量组大鼠乳杆菌属相对丰度均升高(P均<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠关键差异菌群为大肠杆菌种;与模型组比较,香青兰总黄酮高剂量组大鼠关键差异菌群为假长双歧杆菌种、双歧杆菌属、瘤胃球菌属等;与模型组比较,香青兰总黄酮低剂量组大鼠关键差异菌群为约翰逊乳杆菌种、嗜黏蛋白阿克曼菌种。模型组和香青兰总黄酮高、低剂量组之间分别筛选出30、49个血清差异代谢产物,均主要富集在AMP活化蛋白激酶(AMPK)信号通路等。结论香青兰总黄酮可减轻博来霉素诱导的大鼠PF,其作用机制可能与调控肠道菌群组成和AMPK相关代谢通路等有关。

蒙药香青兰总黄酮对大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带区血管内皮生长因子受体2表达的影响

目的:观察蒙药香青兰总黄酮(total flavones of dracocephalum moldavica,TFDM)对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带区血管内皮生长因子2(vascular endothelial growth factor 2,VEGFR2)表达的影响,探讨其对血管生成的作用。方法:SD大鼠线栓法制备大脑中动脉闭塞再灌注模型,TFDM 50 mg/kg灌胃给药,在手术后第1、3、7、14天4个时相进行取材,免疫组织化学染色观测VEGFR2阳性标记的细胞及新生血管在缺血半暗带区的分布情况,Western blot检测缺血半暗带区VEGFR2的表达情况。结果:免疫组织化学染色结果显示,再灌注术后第3~14天时,TFDM给药组阳性细胞表达数量显著高于模型组(P<0.05),且在微血管、微动脉和微静脉附近表达增多;Western blot检测结果也显示,TFDM给药组VEGFR2表达上调。结论:TFDM可能通过上调VEGFR2蛋白的表达,促进脑缺血半暗带区微血管的生成,改善微循环功能。

香青兰总黄酮通过调控TGF-β/BMP信号通路对肺动脉高压大鼠的保护作用

目的 通过野百合碱诱导的肺动脉高压(PH)大鼠模型,探讨香青兰总黄酮(DMTF)对PH大鼠的保护作用及作用机制。方法 建立野百合碱诱导的PH大鼠模型,采用超声法检测大鼠心脏功能,观察肺的病理变化并评估PH的发展状态以及肺血管重构程度。使用ELISA法检测血清相关指标,评价DMTF抗炎、抗氧化应激能力;使用Western blot法检测BMPR2、TGF-β1、Smad1/5/8、p-Smad1/5/8、Smad2/3和p-Smad2/3的蛋白表达。通过低氧诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖模型,并用CCK-8法检测细胞增殖能力;使用流式细胞术检测细胞周期及凋亡,并采用Western blot法检测BMPR2、TGF-β1、Smad1/5/8、p-Smad1/5/8、Smad2/3和p-Smad2/3的蛋白表达。结果 心脏超声和病理检查结果显示,PH大鼠平均肺动脉压力(mPAP)显著升高,血管壁增厚,α-SMA表达增加,血清中ET-1、IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA含量升高,SOD、GSH-Px和NO含量降低(P <0.05)。DMTF药物干预后降低mPAP,并减轻或延缓肺动脉血管重构;升高血清SOD、GSH-Px和NO含量,降低ET-1、IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA含量;下调PH大鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3蛋白的表达,并上调BMPR2、p-Smad1/5/8蛋白的表达(P <0.05)。CCK-8和流式细胞术结果显示DMTF抑制了低氧诱导的PASMCs过度增殖,并下调TGF-β1、p-Smad2/3蛋白的表达,上调BMPR2、p-Smad1/5/8蛋白的表达(P <0.05)。结论 DMTF可降低肺动脉压,改善肺血管重构,对PH大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症反应、减轻氧化应激反应和调节TGF-β/BMP信号通路有关。

环杷明与香青兰总黄酮联合用药对肺纤维化小鼠的影响

研究环杷明(Cyc)和香青兰总黄酮(TFDM)联合用药对肺纤维化(PF)小鼠的影响及作用机制。将C57BL/6小鼠随机分成5组,每组10只,即正常对照组、模型组、TFDM组(360 mg/kg)、Cyc组(5 mg/kg)和TFDM组(360 mg/kg)+Cyc组(5 mg/kg)。采用气管内滴注博来霉素(4 mg/kg)构建小鼠PF模型,正常对照组给予等量蒸馏水,建模第二天,给予相应药物干预,连续给药28 d。肺功能检测采用AniRes2005动物肺功能分析系统进行。肺组织进行冰冻切片的制作,使用HE染色和Masson染色观察肺组织病理情况;水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用Western blot检测各组小鼠1型胶原蛋白(Col-1)、纤维连接蛋白(FN1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、SHH、Ptch1、SMO、Gli1和SUFU蛋白表达。结果显示与正常对照组比较,HE染色中模型组肺组织结构异常,出现炎性细胞浸润;Masson染色中出现较多被染成蓝色的胶原纤维化组织,肺组织被严重损伤;HYP含量显著升高(P<0.01);肺功能检测显示吸气相气道阻力(RL)、呼气相气道阻力(RE)和FEV0.1/FVC显著升高,肺动态顺应性(Cdyn)、用力肺活量(FVC)和呼气峰流速(PEF)显著降低(P<0.01);Western blot的结果可得知模型组肺组织中Col-1、FN1、α-SMA、SHH、Ptch1、SMO和Gli1蛋白表达水平显著升高,SUFU蛋白表达水平显著减低(P<0.01)。与模型组相比,Cyc组和TFDM组肺组织结构正常,几乎无炎性细胞浸润;Masson染色可以看出,蓝色纤维组织较少,肺组织纤维化程度得到缓解;HYP含量上调(P<0.01);肺功能检测显示RL、RE和FEV0.1/FVC显著下降,Cdyn和FVC和PEF显著升高(P<0.01);Western blot显示PF小鼠肺组织中Col-1、FN1、α-SMA、SHH、Ptch1、SMO和Gli1蛋白表达水平显著下调,SUFU蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。TFDM可以在一定程度上改善小鼠PF,进一步得出结论Cyc和TFDM联合用药能更好地发挥作用。

香青兰总黄酮对RAW264.7巨噬细胞泡沫化及炎症反应的调控作用

目的研究香青兰总黄酮(total flavonoids of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)泡沫化及炎症的影响,进一步阐明TFDM抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,采用ox-LDL刺激诱导使其成为泡沫细胞,TFDM(25、50、100 mg·L^(-1))及辛伐他汀(10μmol·L^(-1))进行干预,油红O染色法观察胞内脂滴的聚集情况,CCK-8法检测细胞活力,活性氧试剂盒测定ROS的生成,实时荧光定量PCR测定细胞中NF-κB、NLRP3、caspase-1、IL-18和IL-1βmRNA的表达,免疫蛋白印迹法检测巨噬细胞中IκBα、NF-κB p65、NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β以及IL-18蛋白的表达,ELISA法检测TNF-α和IL-10的表达。结果TFDM可以减少泡沫巨噬细胞的形成,降低炎症因子IL-1β、IL-18和TNF-α的表达,增加抑炎因子IL-10的表达;并且下调NF-κB p65、NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,上调IκBα的蛋白表达。结论TFDM能够减轻巨噬细胞的泡沫化,抑制炎症因子的表达,从而可能延缓动脉粥样硬化的发展进程。其作用机制可能是通过抑制NF-κB途径,减少ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中炎症介质的产生。

香青兰总黄酮通过介导自噬改善帕金森病模型小鼠的神经损伤的作用

目的:研究中药香青兰总黄酮(TFD)改善帕金森病模型小鼠神经损伤的作用机制。方法:120只小鼠被随机分为正常对照组20只和观察组100只,观察组小鼠腹腔注射30 mg/(kg·d)MPTP以制备PD小鼠模型,对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,连续7 d后再将观察组小鼠随机分为5组,分别为模型组和TFD治疗组25、50、75、100 mg/(kg·d):。治疗组按照小鼠的体重灌胃给药,正常对照组和模型组小鼠给予等容量的生理盐水,连续1个月。通过行为学实验评价小鼠运动功能,通过免疫荧光组织化学技术检测小鼠中脑黑质区组织细胞酪氨酸羟化酶(TH)和选择性自噬接头蛋白(P62)阳性染色的细胞数,采用荧光定量PCR和Western-blot技术检测小鼠黑质区组织的微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)、P62、自噬效应蛋白(Beclin1)和TH mRNA和蛋白表达水平。结果:TFD治疗显著增加PD模型小鼠的悬挂运动评分、运动距离和下落潜伏期(P<0.05);TFD治疗增加PD模型小鼠黑质区组织表达P62和TH的阳性染色细胞数,TFD治疗增加PD模型小鼠黑质区组织表达PINK1、Parkin、P62、和TH蛋白的阳性染色细胞数(P<0.05)。结论:TFD可能通过上调LC3B、P62、Beclin1改善自噬,促进多巴胺能神经元受损线粒体及其他细胞器的清除,从而对MPTP诱导的PD模型小鼠产生神经保护作用。

香青兰总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的观察香青兰总黄酮预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制。方法采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。记录心电图S-T段变化,观察心肌组织病理学改变,测定各组血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草转氨酶(AST)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和髓过氧化物酶(MPO)的活性及血清中丙二醛(MDA)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果与模型组比较,香青兰总黄酮能抑制缺血再灌注时心电图S-T段的抬高及缺血心肌病理学改变,降低血清中LDH、CK、CK-MB、AST和MPO的活性及MDA、IL-1、IL-6和TNF-α的水平,并能够提高血清T-SOD和GSH-Px的活性。结论香青兰总黄酮对心肌缺血再灌注损伤心肌具有明显的保护作用,这种作用可能与抗氧化损伤和抑制炎症反应机制有关。

香青兰总黄酮促进脑缺血再灌注大鼠室管膜下区巢蛋白表达

目的:观察香青兰总黄酮(TFDM)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤后室管膜下区(SVZ)巢蛋白(nestin)表达的影响,并研究其与Notch信号通路的相关性。方法:8周龄雄性SD大鼠随机分成为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)及I/R大鼠TFDM治疗组(I/R+TFDM)。采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法制备大鼠I/R模型,免疫组织化学法检测各组大鼠梗死侧SVZ部位巢蛋白(nestin)阳性标记的神经干细胞(NSGs)的分布,Western Blot检测各组大鼠梗死侧SVZ部位nestin和Notch信号通路的中间产物Notch1细胞内域(NICD)的表达。结果:再灌注后3 d和7 d时,I/R+TFDM组大鼠梗死侧SVZ部位nestin的表达较I/R组显著增加(P <0.05),NICD的产生亦较I/R组显著增加(P <0.05)。结论:TFDM可促进脑缺血再灌注大鼠SVZ部位nestin的表达,其机制可能是通过激活Notch信号通路实现的。

香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠Th1/Th2免疫失衡的调节作用

目的观察香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠辅助T淋巴细胞1(Th1)/辅助T淋巴细胞2(Th2)细胞因子失衡的调节作用。方法采用卵白蛋白致敏和激发建立大鼠哮喘模型,给予香青兰总黄酮进行干预后,ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌流液中白介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)及嗜酸粒细胞趋化蛋白1(Eotaxin-1)的水平。结果香青兰总黄酮可剂量依赖性的降低哮喘大鼠支气管肺泡灌流液中IL-4和Eotaxin-1含量,升高IFN-γ含量,减小IL-4/IFN-γ比值(P<0.05或0.01)。结论香青兰总黄酮对支气管哮喘Th1/Th2免疫失衡有一定调节作用。

香青兰总黄酮在大鼠体内的药代动力学研究

为探讨香青兰总黄酮在大鼠体内的药代动力学。采用以田蓟苷为指标,HPLC法测定大鼠灌胃给药后血浆中田蓟苷的浓度,并采用DAS2.0软件计算药代动力学参数。结果显示,血浆中田蓟苷浓度在0.031～39.68μg/mL范围内线性关系良好（R=0.9990）,日内精密度（RSD）〈5%,日间精密度（RSD）〈10%,方法回收率在98.01%～103.23%之间,提取回收率在72.67%～90.35%之间。香青兰总黄酮在大鼠体内呈二室分布,大鼠灌胃香青兰总黄酮提取物3个剂量（300,600,1200 mg/kg）后,t1/2β分别为（6.904±0.922）,（6.512±3.302）,（9.820±3.116）h,AUC（0-t）分别为（0.527±0.018）,（0.980±0.097）,（1.215±0.108）mg/L/h,Tmax分别为（0.292±0.083）,（0.139±0.048）,（0.222±0.048）h,Cmax分别为（0.177±0.018）,（（0.451±0.064）,（0.656±0.115）mg/L。由此可知,该法适用于测定香青兰总黄酮在大鼠体内的血药浓度并进行药代动力学研究。

香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠肺功能的影响

目的观察香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠肺功能及肺组织Ⅲ型胶原的影响。方法 SD大鼠60只随机分为正常对照组、模型组、地塞米松组和香青兰总黄酮低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余各组采用卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立大鼠哮喘模型。模型建立后,正常对照组和模型组给予双蒸水灌胃,各给药组分别给予香青兰总黄酮和地塞米松灌胃,1次/d,连续30 d。末次给药后,采用美国Buxco公司的整体体积描记系统,检测香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠呼吸频率(F)、每分钟通气量(MVb)、吸气流量峰值(PIFb)及呼气流量峰值(PEFb)及增强的呼吸间歇(Penh)的影响,ELISA法检测肺组织Ⅲ型胶原含量变化。结果香青兰总黄酮180、360 mg/kg可降低支气管哮喘大鼠F和Penh(P<0.05,P<0.01),升高MVb、PIFb和PEFb(P<0.05),降低肺组织Ⅲ型胶原含量(P<0.05,P<0.01)。结论香青兰总黄酮可改善支气管哮喘大鼠肺功能,降低气道反应性,改善哮喘气道重塑。

香青兰总黄酮抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用的研究

为研究香青兰总黄酮对体外培养心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。采用体外原代培养Wistar大鼠乳鼠心肌细胞建立H/R损伤模型,实验分为正常组、模型组、香青兰总黄酮高、中、低剂量组及丹参滴丸阳性药物对照组。采用MTT法测定香青兰总黄酮对心肌细胞的毒性作用;比色法测定培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的含量;HE染色法检测细胞形态;免疫组化法测定Bcl-2、Bax蛋白表达。结果表明,香青兰总黄酮各给药组均能降低心肌细胞损伤程度,与模型组比较,香青兰总黄酮高、中剂量组均能够明显降低MDA含量(P<0.01,P<0.05),降低LDH释放量(P<0.01,P<0.05),增加Bcl-2表达,减少Bax表达;香青兰总黄酮高剂量组可以提高SOD活性(P<0.01),降低CK释放量(P<0.05)。香青兰总黄酮对大鼠心肌细胞H/R损伤有保护作用,其作用机制可能与清除氧自由基和调节凋亡蛋白的表达有关。

香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠血管内皮生长因子和细胞间黏附分子-1的影响

目的观察香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)水平的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠60只随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组(1 mg/kg)及香青兰总黄酮低(90 mg/kg)、中(180 mg/kg)、高(360 mg/kg)剂量组。除空白对照组外,其余各组采用卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立大鼠哮喘模型。模型建立后,空白对照组和模型组予以双蒸水灌胃,各给药组灌胃香青兰总黄酮和地塞米松,1次/d,连续30 d。未次给药后,酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肺组织VEGF水平及支气管肺泡灌流液(BALF)中ICAM-1含量;放射免疫法和硝酸还原酶法测定BALF中ET-1和NO含量。结果香青兰总黄酮180、360 mg/kg可降低支气管哮喘大鼠肺组织VEGF水平及BALF中ICAM-1、ET-1和NO含量(P<0.05,P<0.01)。结论香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠VEGF、ICAM-1、ET-1和NO异常升高具有一定调节作用。

香青兰总黄酮的分离纯化及其初步药效学实验研究

为优化香青兰总黄酮分离纯化的最佳工艺。采用田蓟苷等6种黄酮成分的转移率和含量为指标,以聚酰胺柱层析为分离纯化方法,单因素优选香青兰总黄酮的纯化工艺。采取结扎大鼠冠状动脉前降支造心肌缺血模型,评价香青兰总黄酮纯化物抗心肌缺血再灌注损伤作用。结果显示,浸膏与聚酰胺用量比为1∶3,乙醇洗脱的浓度为50%,洗脱溶剂倍量为10BV,香青兰总黄酮分离纯度提高到32.94%,转移率为83.34%。香青兰总黄酮纯化物在20-40 mg/kg给药范围内,对心肌缺血性损伤具有一定保护作用。由此可知,该工艺合理、简便、可行,纯化后的香青兰总黄酮对心肌缺血性损伤模型具有明显保护。

基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路研究香青兰总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护机制

目的:研究香青兰总黄酮(TFDM)对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)信号通路的影响,探究其保护大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法:将50只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TFDM组[60 mg/(kg·d),以提取物计]、Compound C+TFDM组[灌胃60 mg/(kg·d)TFDM+再灌注前15 min尾静脉注射250μg/kg Compound C(AMPK抑制剂)]、EX-527+TFDM组[灌胃60 mg/(kg·d)TFDM+再灌注前20 min腹腔注射5 mg/kg EX-527(SIRT1抑制剂)],每组10只。每天灌胃给药1次,连续7 d。末次灌胃给药后,假手术组大鼠行假手术,其余4组大鼠均采用结扎冠状动脉左前降支缺血30 min、再灌注2 h构建MIRI模型。再灌注结束后,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠心肌组织病理学变化;采用反相高效液相色谱法测定其心肌组织中腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)、腺苷一磷酸(AMP)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^+)的含量;采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测大鼠心肌组织中AMPK、SIRT1和PGC-1αmRNA表达水平;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织中AMPK蛋白的磷酸化水平和SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维排列紊乱、横向条纹消失,细胞肿胀破裂、坏死,细胞核变形移位;心肌组织中ATP、NAD^+含量和AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平以及SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),ADP、AMP含量及AMPK蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,TFDM组大鼠心肌病理学形态明显改善;心肌组织中ATP、NAD^+含量和AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平以及AMPK蛋白的磷酸化水平和SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),ADP、AMP含量均显著降低(P<0.01)。与TFDM组比较,Compound C+TFDM组和EX-527+TFDM组大鼠上述指标的改善作用均被逆转(P<0.05或P<0.01)。结论:TFDM可能是通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路,调节能量代谢,从而发挥其对心肌的保护作用。

香青兰总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠氧化应激和线粒体的保护作用

目的研究香青兰总黄酮对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)过程中氧化应激和线粒体损伤的影响。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支缺血30 min,再灌注灌2 h构建MIRI模型。SD大鼠随机分为假手术组、模型组、香青兰总黄酮组、香青兰总黄酮+AMPK抑制剂Compound C组、香青兰总黄酮+SIRT1抑制剂EX-527组,每组10只。TTC染色法检测心肌梗死面积,检测ROS、MDA水平及SOD活性反映抗氧化能力,免疫组化法检测AMPK、SIRT1及PGC-1α蛋白表达,透射电镜检测线粒体超微结构。结果与模型组比较,香青兰总黄酮可以减轻大鼠心肌梗死面积(P<0.01),降低ROS和MDA水平(P<0.01),增加SOD活性(P<0.01),上调AMPK、SIRT1和PGC-1α蛋白表达(P<0.05,P<0.01),改善线粒体的超微结构损伤;与香青兰总黄酮组比较,香青兰总黄酮+Compound C组和香青兰总黄酮+EX-527组大鼠上述指标的改善作用均被逆转(P<0.05,P<0.01)。结论香青兰总黄酮具有保护心肌缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与AMPK/SIRT1/PGC-1α信号转导通路的激活有关。

香青兰总黄酮对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化及TGF-β 1/Smad通路的影响

目的探索香青兰总黄酮对高脂饲料诱导ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化及TGF-β 1/Smad通路的影响。方法C57BL/6J小鼠为正常对照组,ApoE-/-小鼠随机分为模型组、香青兰总黄酮低、中、高剂量组(21、42、84 mg/kg/d)和辛伐他汀组(3.5 mg/kg/d)。小鼠给药12周后处死,观察主动脉病理形态学变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测了血清中白介素1β(IL-1β),白介素6(IL-6),肿瘤坏死因子α(TNF-α)及单核细胞趋化因子1(MCP-1)的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测了各组主动脉TGF-β1,Smad2/3及P-Smad2/3蛋白的表达情况。结果与模型组相比,各给药组动脉粥样硬化病变减轻,斑块面积与管腔面积比值明显降低(P<0.05或P<0.01),血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1浓度显著低于模型组(P<0.05或P<0.01)。Western Blot显示各给药组主动脉中TGF-β1、p-Smad2/3以及Smad2/3的蛋白水平显著低于模型组(P<0.01)。结论香青兰总黄酮具有抗动脉粥样硬化的作用,其机制可能与抑制炎症因子表达和干预TGF-β 1/Smad信号通路的转导有关。

香青兰总黄酮对心肌缺血-再灌注损伤线粒体保护作用的研究

为研究香青兰总黄酮(TFDM)对大鼠急性心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)线粒体的保护作用。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法复制MIRI的模型的方法。测定心肌梗死程度和心肌组织内ATP的含量,电镜观察线粒体超微结构变化,检测线粒体活性。结果显示,与模型组比较,TFDM不仅能够明显减轻大鼠心肌梗死程度,提高心肌ATP含量,还能有效保护线粒体的结构完整性,并且TFDM能够显著升高线粒体活性(P<0.05或P<0.01)。由此可知,TFDM具有保护缺血-再灌注损伤的心肌组织以及线粒体的作用。

香青兰总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠mTOR信号通路及相关自噬蛋白水平的影响

目的研究香青兰总黄酮调控AMPK/mTOR和PI3K/AKT/mTOR信号通路抗心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的药效学机制。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支缺血30 min,再灌注2 h构建MIRI模型;TTC染色法测定心肌梗死面积;HE染色法测定心肌病理学形态;蛋白免疫印迹法检测LC3、Beclin1、Bcl-2、mTOR、p-mTOR、AMPK、p-AMPK、AKT和p-AKT蛋白表达。结果与模型组相比,香青兰总黄酮可以减轻心肌梗死面积(P<0.001),改善心肌病理学形态,下调LC3和Beclin1的蛋白水平(P<0.05或P<0.01),上调Bcl-2、p-mTOR、p-AMPK和p-AKT的蛋白水平(P<0.05或P<0.01)。但香青兰总黄酮分别联用mTOR抑制剂Rapamycin、AMPK抑制剂Compound C和PI3K抑制剂LY294002之后,香青兰总黄酮的保护作用消失了。结论香青兰总黄酮具有抗心肌缺血再灌注损伤的保护作用,其机制可能与AMPK/mTOR和PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。