秋水仙素诱导青岛百合四倍体研究

以青岛百合试管苗为试验材料,采用浸泡法和混培法研究了秋水仙素对青岛百合进行染色体加倍的诱导效果。结果表明:以0.05%的秋水仙素浸泡处理24h的诱导效果最佳,诱导频率高达53.3%;经秋水仙素诱导的多倍体与正常二倍体植株比较,植株叶片变大,根系粗壮,气孔显著增大而单位面积气孔数减少。对变异材料的细胞学研究发现,四倍体植株的染色体数目为2n=4x=48。

青岛百合组织培养研究

以青岛百合叶片为外植体,研究了消毒时间、培养基、生长调节物质对青岛百合叶片不定芽发生、增殖和生根的影响。结果表明:用0.1%氯化汞对青岛百合叶片消毒5min时效果最好,污染率为31%,萌动率为79%,诱导率为65.2%。青岛百合最佳叶片不定芽分化培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L;最佳不定芽增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L;最佳生根的培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L,形成了较为完善的组织培养再生体系。

青岛百合的组织培养技术研究

以青岛百合鳞片为外植体诱导不定芽的最适培养基为MS+0.3mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA;以再生苗切段为外植体诱导不定芽的最适培养基为MS+0.1 mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA;最适生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA;最佳移栽配方土为草炭土∶蛭石∶园土按1∶1∶1比例混合的营养土。

青岛百合生境特点和分布现状研究

青岛百合(Lilium tsingtauense Gilg)是中国百合科植物的特有种,这一物种作为小种群的代表具有一定的普遍意义。根据已有文献资料和野外调查结果,分析了青岛百合的生境特点和分布现状。结果显示,目前青岛百合的集中分布地位于崂山北九水以南海拔400～1000m的区域内,一般生长于阴坡或半阴坡的森林中,具有充足的水分和光照等条件。在这一区域可见到成片呈斑块状分布的种群,斑块之间的距离依地形、地貌及人类活动的强度不同而远近不一。斑块大小各异,以离散斑块形式存在,生境斑块间的连通性较好,推测这一种群是较为典型的植物复合种群的代表。

青岛百合有性杂交试验

以青岛百合为亲本,与其他几种百合种(或品种)正反杂交,并测定了各亲本花粉活力。结果表明,各亲本花粉活力差异显著,TTC染色法及萌发法测定结果符合度较高。青岛百合×有斑百合、青岛百合×精粹、精粹×青岛百合3个杂交组合结实率较高,分别达到40%、30%和27%。

青岛百合复合种群遗传多样性的RAPD分析

对青岛百合（Lilium tsingtauense Gilg）复合种群6个局部种群的遗传多样性进行了RAPD分析.通过11个引物扩增到117个显性位点,其中多态性位点平均为62.86％,各百合群体多态性位点多少顺序为Y5、Y1、Y4、Y6、Y2、Y3.把RAPD多样性指标与样地的基本状况进行相关分析,发现海拔高度、样地坡度和植被类型与各个多样性指标呈正相关,样地坡向与各个多样性指标呈负相关.Nei＇s基因多样度指数（h）和Shannon信息指数（I）的统计结果表明,种群内h和I的平均值分别为0.203 4和0.309 0,这两个指数均为Y5最高,其次为Y1,Y3最低.不同位点在种群间的分化程度差别很大,基因分化度的波动范围为0.016 5～0.942 7,平均为0.378 3.种群间平均基因流为0.821 6,说明有遗传漂变的存在.6个百合种群间遗传一致度与遗传距离的无偏估计表明,最小的遗传距离在Y4和Y6之间,最大的遗传距离在Y3和Y5之间,遗传一致度则相反.种群聚类分析表明,Y1和Y2比较近;Y4和Y6比较近又和Y5联系在一起.Y3比较特殊,单独为一类.

青岛百合扦插繁殖技术的研究

以野生的青岛百合鳞茎为扦插材料,将鳞茎分为内中外三层剥取其鳞片,观察鳞片在不同温度、不同基质中扦插的效果。结果表明:影响扦插效果的重要因子是温度和基质,在温度为25℃,珍珠岩基质中,内层鳞片扦插效果最好。

青岛百合高效离体快速繁殖体系的建立

以青岛百合及麝香百合的鳞片和茎尖为试验材料,研究了外植体的放置方式、鳞片的不同部位、不同的激素浓度及活性炭对百合再分化的影响,成功建立了青岛百合的高频再生体系。结果表明两种百合的最佳外植体部位为中层鳞片的基部,放置方式为凸面接触培养基,青岛百合的最适再生培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L,麝香百合的最佳再生培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L,两种百合的最高再生率均达到100%。

青岛百合包埋-玻璃化法超低温保存技术研究

以青岛百合茎尖为试材,研究了外植体的选择、预培养的蔗糖浓度、预培养时间、包埋预处理方法、PVS2处理时间对百合存活率的影响。结果表明:小鳞茎在4℃冷锻炼培养28d后,剥取2～3mm的茎尖为试验材料,在蔗糖浓度0.4mol/L的MS+100g/L海藻糖+1mg/LABA的培养基上,预培养3d,然后加0.4mol/L蔗糖和2mol/L甘油、3%褐藻酸钠进行包埋预处理,在0℃条件下用PVS2处理60min,投入液氮保存1h,38℃解冻2min、洗涤后转接至恢复培养基上暗培养7d,用TTC检测存活率最高可达到67.5%。

青岛百合小孢子发生和雄配子体的形成

采用石蜡切片技术和铁矾-苏木精染色方法,研究了珍稀濒危植物青岛百合小孢子发生和雄配子体形成过程。结果表明:青岛百合有6枚雄蕊,每个花药具4个花粉囊。花粉囊壁发育属基本型,由6层细胞构成,即表皮、药室内壁、中层和绒毡层,绒毡层细胞发育为腺质绒毡层。小孢子母细胞减数分裂的胞质分裂为连续型。小孢子在四分体中的排列为四面体型、左右对称型和十字型。成熟花粉粒为2-细胞型,具1个萌发沟。花粉粒在整个发育时期有不同步现象,相差1～2个时相。

青岛百合生药学特性的研究

青岛百合药材比目前使用的百合商品药材鳞片小,颜色稍深。其粉末的显微特征中,淀粉粒最为普遍,并常见梯纹增厚的导管碎片和薄壁组织碎片,表皮细胞碎片少见。硅胶 G 薄层层析显示,青岛百合水提取液与商品百合水提取液的荧光斑点数量近于相等,并且对应斑点处的亮度,青岛百合的较强。青岛百合鳞茎富含淀粉,并从样品检测出17种氨基酸,其中7种氨基酸为人体必需的。

关于青岛百合的调查及其生物学特性的初步研究

对胶东半岛8个山区及其所属县、市的调查发现,崂山为青岛百合的分布中心,海阳招虎山有少量分布,其它地区尚未见有分布。对其生态学、形态解剖学及生物学特性的研究表明,青岛百合属阴生植物,对生长条件要求严格,生态适应能力差,其主要限制因子是光照和土壤,即需要弱光和肥沃土壤。在适宜的环境条件下,用鳞片或小鳞茎作种引种栽培青岛百合可获成功。

微环境对‘青岛百合’生根的影响

以‘青岛百合’为试验材料,研究组培微环境中NAA、蔗糖、活性炭、矮壮素及光照/黑暗条件等因素对‘青岛百合’生根的影响.结果表明:蔗糖对‘青岛百合’鳞茎的膨大影响较大,添加60g/L蔗糖溶液时,鳞茎长势最好;黑暗处理或添加3g/L活性炭可创造根系生长的最佳黑暗微环境,有助于促进根原基的分化,能提前生根2～3d;2g/L矮壮素有助于鳞茎干物质含量的增加累积,提高增强组培苗抗性;1/2MS+0.1mg/L NAA+60g/L蔗糖溶液+3g/L活性炭或进行暗处理可在短时间内获得大量组培苗;1/2 MS+0.1mg/L NAA+60g/L蔗糖+2g/L矮壮素+光照培养可获得健壮的组培苗.

青岛百合次生鳞茎形态发生学研究

采用解剖学方法研究了青岛百合次生鳞茎的形态发生过程。结果表明：次生鳞茎形态发生起源于鳞片近轴面基部向上第5～10层薄壁细胞，而非愈伤组织，为器官型形态发生。次生鳞茎发生过程可分为细胞脱分化阶段、生长锥形成阶段、小鳞片原基和根原基形成阶段、次生鳞茎形成阶段。

濒危植物青岛百合种子的形态特征与萌发特性

研究了温度、低温层积以及赤霉素处理对青岛百合种子萌发特性的影响。结果表明：青岛百合种子黄褐色，扁平，鲜种子千粒质量为5．513 g。种子萌发的最适温度为20℃，发芽率在70％以上，初始萌发时长为10～13 d。低温储藏和赤霉素浸泡对种子的发芽率、发芽势以及萌发时长均有影响：在-10℃冷藏环境中储藏30 d的种子发芽率为97．5％，在500 mg/L赤霉素溶液中浸泡24 h的种子发芽率为95％，二者初始萌发时长为8～9 d。

青岛百合花发育E类基因LtSEP3的克隆及表达分析

为研究青岛百合花发育问题的分子调控机理,以青岛百合花朵为材料,克隆得到一个MADS-box家族E类基因SEPALLATA3(SEP3),命名为LtSEP3,开放阅读框为687 bp,预测编码228个氨基酸。生物信息学分析结果表明,LtSEP3蛋白的相对分子质量为26 179.58 D,理论等电点在8.68,不稳定系数为33.66,属于稳定蛋白,总平均亲水性(GRAVY)为-0.819,脂肪系数为79.96。氨基酸序列比对显示,LtSEP3基因编码的蛋白具有典型的MADS结构域和K-box区。LtSEP3与同为百合属植物的岷江百合的MADS蛋白的氨基酸序列亲缘关系最近;qRT-PCR分析显示,LtSEP3具有组织表达特异性,主要在花中表达,在鳞茎、茎、叶中几乎不表达,在花朵开放的中后期,LtSEP3表达量达到峰值。本研究认为,LtSEP3基因可能在青岛百合花朵开放和花发育过程中具有重要作用。

青岛百合LtXTH5的克隆及VIGS表达载体构建

以青岛百合(Lilium tsingtauense)的花被片作为试材,采用了RT-PCR的方法从青岛百合中分离到LtXTH5基因,并进行生物信息学分析和病毒诱导沉默表达载体的构建,研究了花发育基因LtXTH5的基本理化性质和载体构建方法,以期为后期LtXTH5生物学功能的验证奠定基础。结果表明:LtXTH5基因(登录号MN245449)的开放阅读框包含882 bp,编码293个氨基酸;生物信息学分析预测LtXTH5蛋白相对分子量为33.8 kDa,分子式为C(1536)H(2283)N(407)O(436)S(12),理论等电点(pI)为7.03,脂肪指数68.23,不稳定指数为31.68,LtXTH5是亲水性蛋白,具有信号肽;基序分析发现不同植物XTH中的保守基序数目不同,LtXTH5含有9个基序;序列比对结果表明LtXTH5氨基酸序列含有DEIDFEFLG催化活性位点和GH16XET结构域,是典型的XTH家族成员;系统进化树分析表明LtXTH5与拟南芥AtXTH5亲缘关系最近,属于I/II亚家族,并且具有转糖基酶或水解酶活性。利用LtXTH5的5′端537 bp片段和pTRV2载体质粒成功构建了沉默载体(TRV2-LtXTH5),并将TRV2-LtXTH5载体成功转至农杆菌GV3101中,下一步拟用已转入TRV2-LtXTH5载体的农杆菌菌液对烟草进行侵染,进一步探究LtXTH5基因的功能。

珍稀濒危植物青岛百合的繁殖技术研究

研究了珍稀濒危植物青岛百合的自我繁殖方式和人工繁殖方法。通过对崂山范围内5个野生种群的调查研究,发现青岛百合可以通过自身种子繁殖和子球繁殖2种方式进行增殖,子球由根盘、内部基根、地下茎、散开或是断裂的鳞片基部等部位发生,具有一定的自我繁衍能力。而对于珍稀濒危植物,人工干预繁殖是保护种质资源的有效手段:通过20℃恒温催芽可以提高种子发芽的整齐度,提前进入生长期;通过25℃埋片催芽技术,能更好地控制利于子球形成的环境因子,提高繁殖系数,延长绿期,缩短成球时间,对保护种质资源具有重要意义。

海阳发现濒危植物“青岛百合”

山东省海阳市云顶自然风景旅游区近日发现已被列入国家稀有濒危植物名录的青岛百合，株高最高的达110厘米，花箭最多达6枝。青岛百合又名崂山百合、山百合等，属百合科百合属，为多年生单子叶草本植物。因其分布范围狭窄，对生长条件要求高，现已逐渐稀少，被列入国家第二批稀有濒危植物名录。