烟草根系提取物及碳水化合物对拮抗菌GZYCT-4根际定殖及青枯病菌抑菌活性的影响

在前期获得1株对青枯病菌有拮抗效果的贝莱斯芽胞杆菌GZYCT-4的基础上,通过细菌趋化性、生物膜形成及其粗脂肽抑菌活性等试验,分析抗、感病烟草根系提取物和烟草根系分泌物中的碳水化合物对活性菌株GZYCT-4根际定殖能力及抑菌活性的影响。结果表明:GZYCT-4对烟草K326根系提取物有明显的趋化反应;烟草K326根系提取物及乳糖可促进GZYCT-4生物膜的形成,其中,添加乳糖后GZYCT-4生物膜形成基因epsD、yqxM和kinC的相对表达量分别是对照组的1.64、1.28、2.06倍。此外,蔗糖及木聚糖的添加可提高GZYCT-4脂肽粗提物对烟草青枯病菌的抑菌活性,诱导bmyB、ituC、fenD等脂肽合成基因的表达,其中蔗糖处理的GZYCT-4中bmyB、ituC、fenD相对表达量分别是对照的24.83、6.67、4.76倍。综上,这一研究为进一步阐明拮抗菌株GZYCT-4在烟草植株中的定殖特征及其生防机制提供了一定的理论基础。

2个烟草青枯病菌菌株的致病力差异与基因组比较分析

【目的】探索比较2个不同青枯病菌菌株之间致病力差异和基因组差异,分析影响菌株致病力差异的关键基因,为烟草青枯病的防治提供理论参考。【方法】从烟草青枯病发病烟株上分离获得不同的青枯病菌菌株并进行鉴定,通过侵染试验比较2个菌株之间的致病力差异,并对2个菌株的基因组进行测序,比较二者之间基因组序列差异,分析影响菌株致病力差异的基因。【结果】从江西省抚州市广昌县和南丰县分离到2株青枯病菌菌株RsTP2和RsTY2,egl测序表明菌株RsTP2和RsTY2均属于亚洲分支演化型Ⅰ中的序列变种13,其中菌株RsTP2对云烟87致病力较强,而菌株RsTY2致病力较弱。通过对2个菌株进行基因组测序,获得二者的基因组框架图,其基因组大小分别为5.43MB和5.23MB。将获得的基因和蛋白序列与相关数据库进行比对,获得基因的功能及物种注释信息。通过分析发现,菌株RsTY2有52个蛋白和菌株RsTP2的44个蛋白比对后序列存在差异,其相似度在50.00%~99.88%,其中存在较大差异的编码蛋白主要是凝集素类蛋白,其次是细胞溶素分泌激活蛋白和穿孔素家族蛋白。【结论】通过比较不同致病力青枯病菌株RsTP2和RsTY2的基因组序列差异,发现二者基因组中编码凝集素类蛋白、细胞溶素分泌激活蛋白和穿孔素家族蛋白等蛋白序列差异较大,这类编码蛋白主要参与细菌的黏附、膜溶解、穿透等功能,与细菌侵入宿主细胞的能力关系密切。这几类编码蛋白的差异推测是导致菌株RsTP2和RsTY2致病力差异的重要因素之一。

茄青枯病菌引起的新病害—罗汉果青枯病

罗汉果为葫芦科(Cucurbitaceae)罗汉果属[Siraitia grosvenorii(Swingle)C.Jeffrey]植物.罗汉果中含有0.8%～1.0%的罗汉果甜甙,其甜度为蔗糖的300倍,是肥胖症、高血压、高血脂、糖尿病等患者最理想的甜味剂与保健品.罗汉果甜甙远销美国、日本等国外市场,产品供不应求.

联合固氮菌对桉树青枯病菌的抑制作用研究

采用纸碟法和液体比浊法研究了联合固氮菌对桉树青枯病菌茄拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum(E.F.Smith)Yabuuchi)的抑制作用。结果表明两株联合固氮菌1和固氮菌2及其培养物上清液对青枯菌Ra均有不同程度的抑制作用,上清液抑制效果好于菌悬液抑制效果,混合菌株的抑制作用高于单一菌株的抑制作用。温室接种结果表明,接种固氮菌1和同时接种固氮菌1及青枯菌Ra的处理比不接种对照(CK)桉树苗高增加33.19%和31.09%;单接种固氮菌1的桉树苗地上干质量比对照(CK)增加123.23%,同时接种固氮菌1及青枯菌Ra的桉树苗比对照(CK)地上干质量增加93.22%;接种固氮菌1和同时接种固氮菌1及青枯菌Ra的处理比对照(CK)桉树苗地下干质量分别增加101.52%和71.81%。接种固氮菌可以降低桉树苗木死亡率38.24%。桉树幼苗温室接种试验证明接种固氮菌的桉树苗木生长旺盛,茎干较对照粗壮,长势整齐,固氮菌可以提高桉树苗木对青枯病的抗性。

四种杀菌剂对烟草青枯病菌的毒力比较

为筛选对烟草青枯病菌更具抑菌作用的杀菌剂,采用"改良抑菌圈法"测定了4种杀菌剂对烟草青枯病菌的毒力。结果表明:4种杀菌剂抑菌率随浓度提高,青枯灵、农用硫酸链霉素和克菌康在1450.0、310.0和700.0 mg·L-1浓度下,72 h时抑菌率分别达到94.3%、89.1%和84.4%,辛菌胺醋酸盐的抑菌率在48 h时达到最高78.1%。4种药剂对烟草青枯病菌的毒力大小依次为农用硫酸链霉素>辛菌胺醋酸盐>青枯灵>克菌康,前两者EC50分别为274.57 mg·L-1和148.25 mg·L-1。表明辛菌胺醋酸盐和农用硫酸链霉素是防控烟草青枯病较为理想的杀菌剂。

七株抗青枯病菌生防菌的初步鉴定

为了有效地利用有益微生物 ,对从湖南省 2 3个烟草区 62块烟地烟草根际和根表土壤以及苎麻土中分离筛选的 7个抗青枯病菌而相互之间无颉抗作用的生防细菌菌株进行了细菌学性状的研究和 DNA(G+C)含量测定 .初步鉴定出这 7个菌株分别为 :2 3 - 3为真养产碱菌 (Alcaligene eutrophus) ;湘 1- 2为不动杆菌 (Acinetobactersp.) ;湘 2 - 3为蜡质芽胞杆菌 (Bacillus cereus) ;弯 2 - 2为欧文氏菌属的一种 (Erwinia sp.) ;弯 2 - 4为气单胞菌属的一种 (Aeromonas sp.) ;2 -轻 - 9为侧胞芽孢杆菌 (Bacillus.laterosporus) ;1- 1- 8为黄杆菌属的一种 (Flavobacter sp.)

甘薯青枯病菌毒素产生条件的研究

用致病力不同的甘薯青枯菌株(Pseudom onassolanacearum )进行毒素产生条件研究。试验结果表明,不同pH值、培养天数、菌株浓度及不同致病力的菌株所制备的毒素毒力差异达显著和极显著,但不同培养温度所制备的毒素毒力差异不显著。用Lotus1-2-3 电脑软件综合分析以上产毒条件对所制备的甘薯青枯菌毒素的毒力影响程度,计算出强、弱和混合菌株产生毒素的3 个最优回归方程。分别用Basic和Fortran 语言编写程序,求出强、弱和强弱混合的甘薯青枯病菌产生毒素的3 个最优模式为:①强菌株:pH= 7,菌株浓度108 菌细胞/m l,培养天数3 d。②弱菌株:pH= 7,菌株浓度1012菌细胞/m l,培养天数2 d。③混合菌株:pH= 7,菌株浓度1014菌细胞/m l,培养天数1 d。

利用甘薯青枯病菌及其粗毒素测定甘薯品种抗瘟性的相关性研究

用甘薯青枯菌液及其粗毒素在温室内测定甘薯幼苗的抗病性 ,结果表明青枯菌菌株侵染甘薯幼苗的病情指数与其粗毒素的致萎度之间呈正相关 ,相关系数为 0 .945 8(n=88) ,达极显著水平 ;用 5个不同致病力 (强、中、弱 )甘薯青枯菌株及其粗毒素分别接种抗、中、感甘薯品种华北 48、广薯 15、惠红早 ,结果表明甘薯品种对不同致病力青枯病菌菌株及其粗毒素的抗性呈极显著正相关 ,相关系数在 0 .9992～ 1.0 0 0 0之间 ;以不同致病力甘薯青枯菌混合菌株及其粗毒素接种抗、中、感甘薯品种 97- 10、广薯 15、惠红早 ,结果表明不同抗性甘薯品种病情指数与致萎度之间也存在极显著正相关 ,相关系数为 0 .92 5 7～ 0 .96 5 1。说明在室内用粗毒素检测甘薯幼苗的致萎度 ,能够反映甘薯对甘薯瘟病的抗病或感病水平。

海南生姜青枯病菌对农用链霉素的敏感性测定

从海南白沙、文昌等市县生姜主要种植区采样,经分离、纯化,获得生姜青枯病菌（Ralstonia solanacearum）菌株27株,采用抑菌圈法对72%农用链霉素可湿性粉剂进行了敏感性测定。结果表明：不同地理来源的生姜青枯病菌对农用链霉素敏感性差异明显,同一来源地的不同菌株也有一定的差异。EC50值分布在3.22-71.07μg/m L,平均EC50为34.69μg/m L;其中,白沙荣邦RB-2菌株最敏感,EC50为3.22μg/m L;而白沙邦溪BX-3菌株敏感性最低,EC50为71.07μg/m L。敏感性分布频率呈连续性单峰曲线,EC50值表现连续,符合正态分布,其平均EC50值34.69μg/m L可作为海南生姜青枯病菌对农用链霉素的敏感性基线,用于海南生姜青枯病菌对农用链霉素的抗药性监测。

几种杀菌剂对生姜青枯病菌的毒力测定

为了对生姜青枯病的大田防治提供理论指导,采用抑菌圈法测定春雷·王铜、春雷霉素、可杀得、噻唑锌、壬菌铜、噻菌铜、农用链霉素和新植霉素共8种抗细菌药剂对生姜青枯病菌的毒力。结果表明:农用链霉素、春雷·王铜和春雷霉素对生姜青枯病的抑制效果最明显,其EC50分别为27.19μg/mL、33.28μg/mL和58.17μg/mL;噻菌铜抑菌效果较好,EC50值为774.28μg/mL;壬菌铜、新植霉素和可杀得抑菌效果较差,EC50值分别为1 125.4μg/mL、1 173.82μg/mL和1 593.7μg/mL;噻唑锌无明显抑制作用,终浓度为8 000μg/mL时,抑制率接近于0。

广州地区番茄青枯病菌的系统发育分析及致病力评价

2012～2013年,于广州地区采集番茄青枯病病样并进行病原分离工作,经分子鉴定后获得9个菌株.通过PCR扩增获得了其中9个菌株的egl基因序列,采用国际新兴的青枯菌演化型分类框架进行系统发育分析,以NCBI数据库中分离自不同寄主的青枯菌菌株egl基因序列为参考序列进行系统发育树构建.结果表明：9个菌株属于青枯菌演化型Ⅰ型即亚洲分支菌株的4个序列变种,分别为序列变种13、14、34、44.以高抗青枯病番茄材料‘兴农021’和敏感材料‘金冠3号’为试材,评价了其中5个菌株的致病力,结果表明3-1和18-6致病力较高.

豫南烟区烟草青枯病菌拮抗内生细菌的筛选及其防病效果初探

为了获得烟草青枯病菌的稳定拮抗内生细菌菌株,从豫南烟区烟草栽培品种中烟100和云烟87的根茎中共分离到208株细菌,利用平板共培养法筛选出9株对烟草青枯病菌具有拮抗效果的菌株。其中菌株Rsa3对烟草青枯病菌的抑菌效果最好,抑菌圈半径达7 mm,且在转移5~6代后仍具有较强的抑制效果。依据16S r DNA序列,将拮抗菌Rsa3鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。该细菌发酵液对烟草青枯病菌有明显的抑制作用,其作用主要在于菌体本身,在温室盆栽试验中发酵液的防病效果可达79.17%,同时具有促进烟苗根系生长的能力。以上结果表明,拮抗菌Rsa3对烟草青枯病具有较好的抑菌和防病作用,同时对烟苗的根系有明显的促生长效果,具有潜在的应用价值。

一株抗花生青枯病菌海洋放线菌的分类鉴定及其活性产物研究

从2 200多个海洋放线菌株中筛选得到菌株H41-26对花生青枯病菌(Pseudomonas solanacearum)有较强的拮抗作用。通过菌株形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁化学组分及16S rDNA序列分析,初步确定菌株H41-26为链霉菌属金色(Aureus)类群中的新种-闸坡链霉菌(Streptomyces zhapoensis)。采用硅胶柱层析和高效液相半制备的分离纯化技术,主要活性成分鉴定为放线菌素V。首次报道了放线菌素V对花生青枯病菌的最小抑制浓度为3.91 mg/mL,8%放线菌素V乳油稀释1 000倍施药7 d和10 d后对花生青枯病的盆栽试验防治效果均在70%以上,具有较好的防治效果,为放线菌素V在植物病害防治方面的研究应用奠定了基础。

福建省花生青枯病菌遗传多态性分析

利用RAPD分子标记对37个福建省花生青枯病菌菌株遗传多样性进行分析,从150条随机引物中筛选出9条具有多态性的引物,共扩增出85条带,其中84条为多态性条带,多态检测率为98.82%。UPGMA聚类分析显示:供试的37个菌株划分为7个遗传聚类组(RAPD Group),其中31个菌株集中在RG2和RG6两个聚类组中;菌株间遗传距离变化较大,变化范围从0.08到0.95。结果表明:供试的福建省不同地理来源的花生青枯病菌菌株之间具有明显的遗传差异。37个花生青枯病菌菌株间存在一定遗传相似性,原因可能是不同地域之间病原菌远距离传播的结果。

拮抗番茄青枯病菌株的筛选

番茄青枯病(Bacterial wilt of tomato)是由青枯病菌(Pseudomonas solanacearum)引起的一种细菌性土传病害,为我国南方部分番茄种植区的一种重要病害。运用平皿相互拮抗筛选模型,筛出一组拮抗番茄青枯病的菌株,经田间试验,证实菌株4-2-2有良好的防效。

发生于中国的青枯病菌生化变种研究

从8种不同寄主上分离纯化得青枯病菌181个菌株,根据Hayward划分青枯病菌生化变种的标准,进行归类划型。研究结果表明:发生于中国的青枯病菌生化变种以3和4为主,分别占54.7%和33.7%;而生化变种2、5和3-1分别只占3.9%、1.7%和6.1%;未发现1型生化变种。

烟草青枯病菌巢式PCR检测方法的建立及应用

利用细菌16S-23S r DNA内源转录间隔区通用引物L1/L2扩增烟草青枯病菌基因组DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,经与近缘种序列多重比对分析后,设计1对特异性引物Rs F/Rs R,用于包括烟草青枯病菌在内的15种不同细菌、5种真菌、3种卵菌基因组DNA的PCR扩增。结果表明:在优化的反应体系与程序条件下,该对引物只能从烟草青枯病菌中扩增出241 bp的特异片段,并通过序列测定验证了其准确性;将引物Rs F/Rs R与细菌通用引物L1/L2进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达0.4 fg/μL,较常规PCR提高1 000倍,表明该对引物能有效地用于烟草组织及土壤中青枯病菌的检测。此结果对烟草青枯病的早期诊断、快速检测及病害流行学研究具有重要意义。

广东烟草青枯病菌菌系研究

广东主要烟区南雄县和梅州市的烟草青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）没有本质上的差异。供试的菌株对烟草、茄子、番茄、辣椒都有强致病力，均为小种１，对２个花生品种（汕油７１，蔓生型）的致病力均分化为３个类型。所有菌株都能利用３糖３醇产酸，为生化型Ⅲ。琼脂双扩散试验结果表明，绝大部分菌株都能与南雄菌株和大埔菌株的抗血清形成３条吻合相连的沉淀带，说明这两个烟草青枯病菌菌株的亲缘关系十分密切。

豫南烟区烟草青枯病菌的致病力及遗传多样性分析

为有效防控豫南烟区烟草青枯病,对来自信阳市罗山县、驻马店市确山县和遂平县的烟草青枯病菌的致病力和遗传多样性进行了测定分析。人工接种试验表明,豫南烟区烟草青枯病菌的致病力分为强、中和弱3种,不同寄主来源的烟草青枯病菌具有显著的致病力差异。从100个随机引物中筛选出8个扩增条带清晰且具有丰富多态性的引物用于不同地区烟草青枯病菌菌株DNA的RAPD分析,共扩增出720条带,其中多态性带占88.9%。聚类结果和遗传相似系数分析显示,供试菌株可分为A、B两大类,遗传相似系数范围为0.49~1.00,且供试菌株间的遗传相似性与其地理来源有一定的相关性。综上所述,豫南烟区烟草青枯病菌的致病力存在明显差异且其DNA具有丰富的遗传多样性。

广东农作物青枯病菌的生化型

比较了１３种寄主植物１２９个青枯病菌株对３种双糖（乳糖、麦芽糖、纤维二糖）和３种己醇（甘露醇、山梨醇、甜醇）的利用情况，结果表明它们大部分（８７．５％）分属于Ｈａｙｗａｒｄ的４个生化型，以生化型Ⅲ为优势生化型（约６５％）。除Ｈａｙｗａｒｄ的４个生化型外，还存在４个其它的生化类型：（１）１个能利用３种双糖和甘露醇、山梨醇而不利用甜醇产酸的马铃薯菌株；（２）３个能利用３种双糖和山梨醇、甜醇而不利用甘露醇产酸的烟草菌株；（３）能利用３种己醇和麦芽糖而不能利用乳糖和纤维二糖产酸的花生、姜和甘薯菌株；（４）７个能利用３种双糖和甘露醇而不利用山梨醇、甜醇产酸的桑菌株。前二者暂定为生化型Ⅲ的２个亚型，分别为Ⅲ－２，Ⅲ－３，第３个暂定为生化型Ⅳ的亚型（Ⅳ－１），第４个（曾被Ｈｅｅｔａｌ．定为生化型Ⅴ）则暂定为生化型Ⅱ的亚型之一（Ⅱ－２）。