甘薯青枯菌粗毒素的制备及热、紫外线、酶对粗毒素生物活性的影响

将有致病力的甘薯青枯菌在液体肉汁胨培养基中２８～３０℃培养４８～７２ｈ，在无菌条件下经２０００ｒ／ｍｉｎ离心；取上清液再经过０．４５μｍ的细菌过滤膜过滤，获得甘薯青枯菌粗毒素（代谢产物）。粗毒素对热效应较为敏感，在５０℃下水浴１ｈ，生物活性不变；７０℃下水浴１ｈ，生物活性降低２８．７％；１００℃下水浴１ｈ，生物活性几乎完全丧失。粗毒素对紫外线不敏感，在２５Ｗ紫外光下照射３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎ均不影响生物活性。粗毒素对蛋白酶和溶菌酶敏感，加入木瓜蛋白酶４～１６ｕ／ｍｌ或加入胰蛋白酶１０～４０ｕ／ｍｌ时生物活性均受破坏，丧失毒力；加入溶菌酶１５０００～６００００ｕ／ｍｌ时生物活性降低了９１．６％～９２．０％，几乎丧失了毒力。

广藿香抗青枯病离体筛选技术的研究

以广藿香叶片及带节茎为材料，研究青枯菌粗毒素不同制备方法、青枯菌不同培养时间及不同菌液浓度对外植体离体再生的影响。结果表明：过滤灭菌法制备的青枯菌粗毒素致毒性比湿热灭菌法处理更强，外植体成活率明显降低；以培养12h的青枯菌粗毒素对外植体有较大的致毒性，外植体变褐死亡现象较突出，培养30d后，叶片及带节茎出芽率分别为10．33％及36．11％；浓度在1．41×10^8cfu／ml以上的菌液粗毒素对外植体有明显的毒害作用，大多外植体枯黑死亡，出芽率较低，同时在该浓度时，大多数无根苗难以生根，植株基部变黑，叶片变黄，生长不良。确定了青枯菌粗毒素对广藿香不同离体培养阶段的致毒性，建立了以青枯菌粗毒素为选择压力的广藿香离体筛选体系。

广藿香抗青枯病鉴定方法的研究

【目的】对广藿香幼苗接种青枯菌粗毒素,观察其感病状况,建立广藿香苗期抗性鉴定方法,为广藿香抗病育种奠定基础。【方法】测定不同培养时间的青枯菌菌液浓度,绘制青枯菌的生长曲线;分别设置不同广藿香苗龄、不同浓度青枯菌制备粗毒素及不同接种方法等试验,探讨影响致病性的因素。【结果】青枯菌的生长曲线呈"S"型,青枯菌菌液浓度在稳定期最高可达12.46×108cfu/mL。对于广藿香抗青枯病的苗期鉴定,以100 d左右苗龄的植株较适宜;在0.4×108～0.6×108 cfu/mL浓度范围内,接种植株表现渐进的发病过程,适于进行抗性鉴定。浸根法接种能较快表现青枯病的症状,发病程度也较重,并能缩短抗病鉴定的过程。【结论】初步建立了广藿香抗青枯病的室内鉴定方法。