青石斑鱼池塘标准化养殖技术

随着社会经济的不断发展,公众愈发关注饮食的绿色与健康,尤其是质量优越的水产品已成为众多家庭饮食构成中蛋白质的主要来源,其中青石斑鱼凭借良好的补身补益作用和较高的营养价值在数量众多的水产品中脱颖而出。青石斑鱼因其适应性强,在养殖过程中能适合多种水体、多种方式的养殖,再加上北方地区的环境、资源等各方面的优势,为实现青石斑鱼池塘标准化养殖提供了良好的条件。养殖青石斑鱼是一项很有前景的产业,青石斑鱼因其营养丰富、肉质鲜美而广受消费者的喜爱,而又因在养殖过程中,在养殖周期短的条件下,青石斑鱼的生长速度较快,养殖成本较低,且利润较大,因此备受广大养殖户的青睐。基于此,本文针对青石斑鱼池塘标准化养殖技术进行重点分析。

网箱养殖青石斑鱼的溃疡病病原

2002年夏季厦门同安湾一带气候炎热,降雨量少,海水盐度偏高,同安湾刘五店的网箱养殖石斑鱼大面积暴发溃疡病。本研究调查了石斑鱼溃疡病暴发的特征和症状,主要表现为肌肉溃疡坏死、眼球脱落、鱼骨暴露等。从病鱼体表及内脏分离出优势菌群命名为TS 628,经回归感染证实TS 628就是引发本次石斑鱼溃疡病的病原菌。对病原菌进行鉴定发现,该菌革兰氏染色呈阴性,电镜下观察菌体呈短杆状,极端单鞭毛,综合研究该菌在形态、生理生化、16SrDNA同源性及药物敏感性等方面的特性,基本确认分离到的病原菌为哈维氏弧菌(Vibrioharveyi),该菌对氯霉素、壮观霉素等多种抗生素敏感,对万古霉素、青霉素G等抗生素不敏感。哈维氏弧菌是水产养殖病害常见病原菌,但作为养殖石斑鱼的病原菌在国内属首次报道。

青石斑鱼微卫星DNA标记的筛选及群体遗传多样性分析

以中国南海海域青石斑鱼(Epinephelus awoara)为材料,构建青石斑鱼小片段部分基因组DNA文库。以M13通用引物和设计合成的微卫星核心序列引物(CA)15,用PCR法对文库进行筛选,共获得96个微卫星序列,分别分布于28个阳性重组克隆中,其中perfect(完美型)共39个(占40.6%),imperfect(非完美型)30个(占31.3%),compound perfect(混合完美型)7个(占7.3%),compound imperfect(混合非完美型)20个(占20.8%)。同时发现(CA/GT)n序列在青石斑鱼的基因组DNA中含量非常丰富。根据微卫星侧翼序列设计28对引物扩增青石斑鱼基因组DNA,有26对引物能扩增出目的片段,选用其中13对多态性稳定的引物对19尾青石斑鱼进行遗传多样性分析。结果显示,13个位点共检测到48个等位基因,平均观测杂合度(Ho)为0.5982,平均期望杂合度(He)为0.5080,平均多态信息含量(PIC)为0.4722,平均Hardy-Weinberg遗传偏离指数(D)为0.1503。实验初步表明中国南海海域青石斑鱼的遗传多样性较为丰富,但在某种程度上受到了人为的干扰。

循环水养殖模式下养殖密度对青石斑鱼生长及生理指标的影响

研究了循环水养殖模式下,不同养殖密度对青石斑鱼Epinephelus awoara生长及肝脏、鳃相关酶活性和血液指标的影响。试验设10、20、30 kg/m33个养殖密度组,每组设3个重复,在闭合循环水养殖系统(70 cm×40 cm×40 cm)中养殖初始体质量为(108.7±4)g的青石斑鱼50 d。结果表明:1)10、20 kg/m3养殖密度组青石斑鱼的增重率、特定生长率均高于30 kg/m3密度组(P<0.05),但30 kg/m3密度组鱼的饲料系数高于其他两组(P<0.05);2)各组试验鱼血清的谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性及肝脏和鳃的GPT活性均随着养殖密度的增加而明显升高,且组间有极显著性差异(P<0.01);3)各组试验鱼血清中的皮质醇含量随着养殖密度的增加而明显升高(P<0.01),而红细胞数则明显减少(P<0.01),30 kg/m3密度组鱼的血红蛋白含量低于10、20 kg/m3密度组(P<0.05);4)各组鱼的肌肉营养组成均无显著性差异(P>0.05)。本试验结果表明,养殖密度过高对青石斑鱼生长不利,但从经济收益角度考虑,适宜的养殖密度应为20 kg/m3。

青石斑鱼骨骼发育异常的形态特征

采用二重染色法对青石斑鱼Epinephelus awoara幼鱼的脊柱、尾鳍、背鳍和臀鳍骨骼发育异常进行观察。结果显示:脊柱发育异常包括脊柱前凸、脊柱后凸和脊柱侧凸以及椎骨的愈合、变形等症状;臀鳍畸形症状主要是近端支鳍骨的分叉;背鳍发育异常除了近端支鳍骨的末端发生分叉外,还有近端支鳍骨之间有软骨片存在;尾鳍骨发育异常主要表现为尾上骨数目不等,比正常鱼少一块或两块尾上骨。

青石斑鱼微卫星标记的筛选及群体多态性分析

微卫星DNA，又称短串联重复序列（STR）或简单序列重复（SSR），是广泛存在于真核生物基因组中的简单重复DNA片段，一般每个重复单位仅1～6个碱基，重复数为10～20次，其中动物体中以双核苷酸（CA／GT）n最为常见。根据微卫星DNA核心序列两端的保守序列设计引物扩增基因组DNA便可以找到相应的微卫星标记。微卫星标记已广泛应用于人类和动植物遗传育种、遗传图谱绘制、数量性状位点定位、标记辅助选择、遗传多样性评估等方面的研究。

基于高通量测序的青石斑鱼基因组微卫星开发及评价

本研究采用基因组高通量随机测序的方法对青石斑鱼(Epinephelus awoara)微卫星标记进行了发掘,结果共获得青石斑鱼(Epinephelus awoara)基因组原始数据2.860G。采用MISA(MIcroSAtellite)软件进行微卫星位点搜索,获得967 657条微卫星序列。随机选取了96条微卫星序列设计引物并利用8尾青石斑鱼个体进行多态性位点筛选,共获得60个具有多态的微卫星标记。利用其中16个微卫星标记对一个青石斑鱼亲鱼群体的种群遗传学特征进行评价,共检测到129个等位基因,单个标记的表观等位基因数(NA)分布范围为2~14,平均为7.167;表观杂合度(HO)分布范围为0.422~1.000,平均为0.678 6;期望杂合度(HE)分布范围为0.481~0.893,平均为0.676 8。有5个标记的等位基因频率不符合"哈迪-温伯格平衡",其中EAW-55596、EAW-21755、EAW-30334 3个标记表现为杂合子显著缺失(P<0.05),而EAW-33674和EAW-52520 2个标记表现为杂合子显著过剩(P<0.05)。连锁不平衡检测表明各位点间无连锁不平衡现象。多态信息含量(PIC)分布范围为0.362 3~0.872 2,平均PIC=0.639 7>0.5,说明该亲鱼群体的遗传多样性比较高。而这些微卫星标记将对于青石斑鱼的遗传变异分析、亲缘关系鉴定提供了技术支持,这也将为青石斑鱼的分子遗传育种奠定了基础。

青石斑鱼肠道菌群研究

以中国沿海重要经济鱼类青石斑为研究对象,分别以营养琼脂和脑心浸液琼脂培养基检测其肠道中总的好气和兼性厌氧菌及专性厌氧菌的数量,以TCBS(Thiosulfate Citrate Bile Salts Su-crose)、麦康凯、NAC(Nalidixic acid-cetri mide)、锰营养盐、TPY(Tryptone-phytone-yeast extract)和SL(Rogosa SL.)琼脂等6种选择性培养基对青石斑肠道菌群进行计数和选择性分离,并对分离的优势菌株进行16S rRNA基因同源性分析。结果表明,青石斑鱼肠道内好气及兼性厌氧菌的总量可达5.3×105CFU/g。在6种选择性培养基中TCBS培养基上生长的菌落数量最多,约占总好气菌及兼性厌氧菌的36%,优势菌与牙鲆弧菌(Vibrio olivaceussp.nov.)同源性最高;麦康凯琼脂平板中生长的菌落数量次之,约占总好气菌及兼性厌氧菌的24%,优势菌与阿氏肠杆菌(E.asburiae)同源性最高;而NAC和锰营养盐琼脂平板中生长的菌落数量较少,优势菌分别与假单胞菌属(Pseudomonassp.)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的同源性最高。厌氧菌的数量很少,约为总好气和兼性厌氧菌数量的1%,其中TPY培养基中生长的菌落数量约占总厌氧菌数量的53%,优势菌与拟杆菌(Bacteroidessp.)同源性最高;SL培养基中没有检测到细菌。

4种硝基呋喃类代谢物在青石斑鱼肌肉中的富集与消除规律

实验通过连续7 d投喂各含有100 mg·kg^(-1)呋喃西林、呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃妥因的饲料,研究4种硝基呋喃药物在青石斑鱼(Epinephelus awoara)肌肉中的消除规律。采用超高效液相色谱串联质谱(UPLCMS/MS)检测青石斑鱼肌肉中的氨基脲(SEM)、3-氨基-2-恶唑基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)和1-氨基-2-内酰脲(AHD)的质量分数,并用内标法定量。结果表明,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在石斑鱼背肌的峰浓度最大值依次为1 104.10μg·kg^(-1)、781.09μg·kg^(-1)、679.75μg·kg^(-1)和437.18μg·kg^(-1)。4种硝基呋喃代谢物在石斑鱼肌肉组织中的消除规律大致相似。SEM、AHD、AOZ和AMOZ半衰期时间的长短顺序为23.90 d、23.10 d、22.35 d和21.00 d。SEM在肌肉中消除最慢。消除到第163天时,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在肌肉中的质量分数仍然高于液质检出限(0.5μg·kg^(-1))。建议硝基呋喃药物应禁止用于石斑鱼疾病的预防或治疗中。

网箱养殖青石斑鱼Epinephelus awoara鳃及体表粘附菌群的PCR-DGGE比较分析

采用免培养的16S rDNA梯度凝胶电泳技术(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)对海水网箱养殖青石斑鱼Epinephelus awoara鳃和体表粘附菌群结构进行了比较分析。结果表明青石斑鱼鳃粘附菌群结构相对简单,存在绝对优势种群,体表粘附菌群结构较为复杂,无绝对优势种群,聚类分析表明青石斑鱼鳃与体表粘附菌群结构存在较大差异性(相似度52%),而个体间鳃或体表的粘附菌群结构相似性较好。测序结果表明青石斑鱼鳃与体表粘附菌群以未培养菌为主,鳃的绝对优势菌为Pantoeasp.,体表相对优势菌为Meio-thermussp.、UnculturedAcinetobactersp.、Wautersiella falsenii与未培养菌,提示在生产实践中采用复合菌制剂似乎更为可行。PCR-DGGE技术能区别青石斑鱼鳃与体表粘附菌群的多样性,在可定植益生菌筛选上具指导意义。

青石斑鱼人工配合饵料中蛋白质适宜含量的研究

本文探讨了不同蛋白质含量的配合饵料对青石斑鱼（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓａｗｏａｒａ）增重的影响。试验设五组，配合饵料组的蛋白质梯度分别为４２．２５％、４７．４６％、５２．５５％和５６．０２％，对照组则投喂鱼类（巴浪鱼）。在水温２０．０～２７．５℃，比重１．０１８５～１．０２２０的条件下，经３５天的试验得出：在配合饵料组中，蛋白质含量为５２．５５％的试验组在鱼体相对增重率（１６．２０％），蛋白质效率（６１．６０％）和饵料转化率（３２．３６％）等试验指标均为最佳。经回归方程分析，青石斑鱼人工配合饵料中蛋白质适宜含量为５０．９１～５４．７８％。

青石斑鱼人工配合饵料中脂肪适宜含量的研究

本文探讨了不同脂肪含量的配合饵料对青石斑鱼（Ｅｐｉｎｅｐｈｌｕｓａｗｏａｒａ）生长的影响。试验设五组：配合饵料组中在蛋白质最适含量（５２．５５％）下分设脂肪梯度为：６．３１％、９．８７％、１３．１７％和１６．２５％；对照组投喂冰冻科鱼类（巴浪鱼）（脂肪约１６．５６％）。试验期间水温２０．０～２７．５℃，比重１．０１８５～１．０２２０。历经３５天的喂养试验得出：在配合饵料中脂肪含量为９．８７％的试验组鱼体相对增重率最高（１６．２０％）、饵料系数最低（３．０９）。因此认为，青石斑鱼人工配合饵料中脂肪适宜含量为９．８７％左右。

投喂小杂鱼和人工配合饲料对青石斑鱼生长和肌肉营养成分的影响

青石斑鱼（Epinephelus awoara）为海水名贵鱼类之一，肉质细嫩，味道鲜美。近几年来，青石斑鱼作为海水养殖的高档品种在广东、福建、海南等沿海地区的养殖规模不断扩大。然而养殖户饲养青石斑鱼还是以小杂鱼为主，营养不够全面，而且很容易引起水质污染和疾病发生。

青石斑鱼细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因的克隆鉴定及表达分析

细胞色素氧化酶(Cytochrome oxidase,COX)是线粒体内呼吸链电子传递的终末复合物,是线粒体氧化能力的关键调节物质。细胞色素C氧化酶亚基I(COXⅠ)是细胞色素C氧化酶具有酶催化活性的3个亚基之一。本研究以本实验室构建的青石斑鱼消减杂交cDNA文库中长587bp的EST序列为基础,采用RACE-PCR方法克隆鉴定出青石斑鱼(Epinephelus awoara)细胞色素C氧化酶亚基I基因。研究结果表明:青石斑鱼COXⅠ全长1659bp,5'端非编码区3bp,3'端非编码区105bp,开放阅读框1551bp,编码516个氨基酸。序列分析表明,青石斑鱼COXⅠ与线纹刺尾鲷COXⅠ同源性最高,达96.9%。采用半定量RT-PCR方法研究COXⅠ基因在青石斑鱼各组织中的表达特征,结果表明COXⅠ基因在正常的青石斑鱼和注射了副溶血弧菌灭活疫苗的青石斑鱼的脾、肝、心、头肾、肾、肌肉和鳃中都有转录表达。注射副溶血弧菌灭活疫苗后,除了鳃组织,其他组织中COXⅠ基因表达量较对照组都有显著提高(P<0.05),而鳃组织中的COXⅠ基因表达量没有显著变化。

饵料维生素C对青石斑鱼的非特异性免疫调节作用

调查了饵料维生素C对青石斑鱼Epinephelusawoara非特异性的体液和细胞免疫调节作用。在冰冻饵料小杂鱼中添加不同剂量的维生素C(每公斤饵料鱼含量分别为 0 ,50 0 ,1 0 0 0 ,1 50 0和 2 0 0 0mg) ,连续投喂青石斑鱼 2 0周后 ,青石斑鱼血液白细胞总数及不同种类白细胞 (包括淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞 )组成比例不受饵料维生素C的影响。青石斑鱼血清补体经典型溶解羊红细胞的能力随饵料维生素C添加量的提高而显著增强 (p<0 .0 1 )。然而 ,维生素C对血清的杀菌活性没有作用。鱼体非特异性的细胞免疫活动 (包括血液白细胞和头肾细胞的吞噬活动 )

磺胺甲噁唑和磺胺嘧啶在青石斑鱼组织中的分布及代谢规律

通过一次性投喂各含有200 mg/kg磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole,SMZ)和磺胺嘧啶(sulfadiazine,SDZ)的饲料,研究两种药物在青石斑鱼中各组织分布与消除规律。采用超高效液相色谱-串联质谱检测青石斑鱼各组织中SMZ和SDZ的含量,并用内标法定量。结果表明,SMZ在青石斑鱼各组织中的最大含量:肝脏、背肌、血浆、肾脏和鳃依次为827.97μg/kg、776.70μg/kg、610.29μg/L、432.14μg/kg和345.18μg/kg。SDZ在青石斑鱼各组织中的最大含量:肝脏、背肌、鳃、血浆和肾脏依次为895.30μg/kg、660.55μg/kg、431.88μg/kg、419.56μg/L和310.67μg/kg。SMZ在青石斑鱼各组织中的半衰期:肾脏、鳃、背肌、血浆和肝脏半衰期依次为26.65、21.00、20.38、18.73 h和16.90 h。SDZ在青石斑鱼各组织中的半衰期:肾脏、血浆、鳃、背肌和肝脏依次为31.50、27.72、24.75、21.66 h和18.24 h。SMZ和SDZ在青石斑鱼肝脏中半衰期最短,代谢速度最快;在肾脏中半衰期最长,代谢速度最慢。在水温(25±2)℃条件下,SMZ和SDZ各200 mg/kg的剂量同时单次投喂青石斑鱼,建议休药期不低于3 d。SMZ和SDZ代谢规律研究为磺胺类药物在水产品中的合理使用提供了参考。

青石斑鱼耗氧率研究

本文研究了青石斑鱼成鱼的耗氧率和窒息点。青石斑鱼的耗氧率有昼夜变化规律，夜间平均耗氧率（０．２０３ｌｍｇ／ｇ．ｈ）大于白天平均耗效率（０．１０３８ｍｇ／ｇ．ｈ）。浮头时水中溶氧量为０．８４８６ｍｇ／ｌ，窒息点为０．８１６０ｍｇ／ｌ。

一例引起青石斑鱼严重死亡的病因探讨

在福建罗源一例寄生虫、细菌、病毒综合感染引起的青石斑鱼 Epinephelusawoara严重死亡的病例中 ,发现一种寄生于病鱼脾脏的病毒可能是引起死亡的主要致病因子 .经电镜观察 ,这种病毒粒子为多面球状体 ,其平面观为六角形 ,大小约 2 0 0 nm,类似于真鲷虹彩病毒 ( Iridovirus)和鳜病毒 ( Siniperca chuastsivirus) .

青石斑鱼的标志放流

青石斑鱼(Epinephelus awoara)是我国东、南海沿岸名贵鱼种。本文通过标志放流，研究青石斑鱼的洄游分布和移动习性，供人工增殖及合理利用参考。