青紫颗粒抑制卵蛋白致过敏性紫癜大鼠血清免疫复合物保护肾组织作用

目的观察青紫颗粒对卵蛋白(OVA)所致过敏性紫癜大鼠血清免疫球蛋白A(IgA)、循环免疫复合物(CIC)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、白介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)水平及肾脏组织病理学的影响。方法SPF级SD大鼠,随机分为正常组,模型组,青紫颗粒低剂量组(4.58 g·kg^-1)、中剂量组(9.16 g·kg^-1)、高剂量组(18.32 g·kg^-1),地塞米松组(0.55 mg·kg^-1),芦丁片组(12.05 mg·kg^-1)。采用中西医结合方法,复制过敏性紫癜病证结合模型。除正常组外,其余各组以胡椒∶干姜∶荜茇=1∶1∶1的水煎液(0.125 g·mL^-1)1.2 mL灌胃,每日两次,连续灌胃21 d,模拟中医血热证模型。第22日大鼠腹腔注射含OVA、氢氧化铝凝胶、脂多糖(LPS)及伊文思蓝的生理盐水溶液,每只1 mL,并于当日按剂量灌服药液,正常组、模型组灌服等量溶媒,连续7 d。第29日大鼠腹腔注射上述生理盐水溶液10 min内,皮肤外涂含OVA、氢氧化铝凝胶及LPS的生理盐水1 mL以激发过敏反应。30 min后取血,ELISA法检测血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平;取肾脏,HE染色法观察组织病理学变化。结果与正常组比较,模型组血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平升高(P<0.05或P<0.01),肾组织病理损伤明显。青紫颗粒可降低OVA所致过敏性紫癜大鼠血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),减轻肾脏病理损伤。结论青紫颗粒能降低OVA所致过敏性紫癜大鼠血清免疫复合物从而改善肾脏组织病理。

青紫颗粒制备工艺及质量控制方法研究

目的建立HPLC法用于青紫颗粒制备工艺过程的质量控制,并对中试样品中丹酚酸B和绿原酸含量进行测定。方法丹酚酸B和绿原酸测定条件:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱,流速为1 mL/min,柱温为30℃,检测波长为286 nm(丹酚酸B)和327 nm(绿原酸);以绿原酸及丹酚酸B转移率为指标,选取提取次数、提取时间、加水倍量为影响因素,采用正交设计优选最佳提取工艺,并优选浓缩温度和干燥温度。结果丹酚酸B和绿原酸分别在0.16~0.63μg(r=1.000 0)、0.03~0.14μg(r=1.000 0)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.05%、103.72%;最优提取工艺为:加12倍水,提取2次,每次1 h,浓缩温度控制在80℃以下,干燥温度控制在70℃以下。所测中试样品中丹酚酸B和绿原酸质量分数分别为(3.04±0.046)mg/g和(0.74±0.006)mg/g。结论建立的液相方法准确稳定,可用于青紫颗粒制备过程的质量控制,优选的提取工艺稳定可行,适合批量生产。

青紫颗粒对Arthus反应动物模型皮肤损害的保护作用及机制研究

目的观察青紫颗粒对Arthus反应大鼠、兔皮肤损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法通过肌内注射卵蛋白-弗氏完全或不完全佐剂,皮内注射1%卵蛋白溶液,复制Arthus反应大鼠和家兔模型。采用卵蛋白-弗氏完全佐剂致敏,1%卵蛋白溶液攻击,复制Arthus反应兔模型。观察抗原攻击后皮肤反应程度、局部红肿斑点最大直径,检测血清IgA、IgG、CIC等指标的含量,并观察皮肤病理改变。结果在抗原攻击后4 h,青紫颗粒低剂量可减小大鼠背部斑点直径;抗原攻击后24 h,中、高剂量可减小背部斑点直径,中剂量可减轻皮肤反应程度。青紫颗粒各剂量可降低大鼠血清IgA、IgG、NO含量;中、高剂量可降低CIC含量;高剂量可降低血清IL-6、TNF-α含量。青紫颗粒各剂量可减轻大鼠皮肤组织静脉血管淤血扩张、出血情况。在抗原攻击后2、3、4、5 h,青紫颗粒高剂量可减小兔背部皮肤斑点直径;高、低剂量可减轻皮肤反应程度。青紫颗粒中剂量可降低兔血清IgG含量,中、低剂量组可降低血清CIC含量。青紫颗粒各剂量组均可减轻兔皮肤血管扩张,低剂量组可缓解皮肤水肿。结论青紫颗粒对Arthus反应动物模型皮肤损害具有一定保护作用,该作用可能与其降低血清IgA、IgG、CIC、IL-6、TNF-α、NO水平有关。

青紫颗粒对麦胶蛋白致小鼠肾损伤的保护作用

目的:观察青紫颗粒对麦胶蛋白致小鼠肾损伤的保护作用。方法:84只SPF级KM小鼠随机分为7组:正常对照组、模型组、青紫颗粒低(4.11 g·kg^(-1))、中(8.22 g·kg^(-1))、高剂量组(16.44 g·kg^(-1))、地塞米松组(0.63 mg·kg^(-1))、芦丁片组(12.54 mg·kg^(-1)),每组12只。除正常对照组外,其余各组采用口服麦胶蛋白抗原法建立肾损伤小鼠模型。从第15周开始,各给药组灌胃给与相应药物,1次/d,连续3周,正常对照组和模型组灌胃相同体积蒸馏水。采用ELISA法检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、晚期氧化蛋白产物(AOPPs)、循环免疫复合物(CIC)水平;免疫荧光法检测肾脏单纯免疫球蛋白A(IgA)沉积,PAS染色法观察肾组织IgA_(1)异常糖基化情况,免疫荧光法检测小鼠肾脏补体C3、C4及转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))的表达,HE染色法观察肾组织病理学变化。结果:与正常对照组相比,模型组血清BUN、Cr、AOPPs、CIC水平显著升高(P<0.05或P<0.01),肾脏IgA、补体C4及TGF-β_(1)表达显著增加(P<0.05或P<0.01),肾组织出现IgA_(1)异常糖基化,病理损伤明显。青紫颗粒可降低麦胶蛋白所致肾损伤小鼠血清BUN、Cr、AOPPs、CIC水平(P<0.05或P<0.01),下调肾脏IgA、补体C4及TGF-β_(1)表达(P<0.05或P<0.01),减轻IgA_(1)异常糖基化及肾脏病理损伤。结论:青紫颗粒对麦胶蛋白所致肾损伤小鼠具有保护作用,该作用可能与其降低AOPPs、CIC水平,下调IgA、补体C4及TGF-β_(1)表达,减轻IgA_(1)异常糖基化有关。

青紫颗粒单次及重复给药毒性试验研究

目的观察青紫颗粒单次给药以及重复给药13周对大鼠产生的毒性反应,评价临床前安全性。方法单次给药毒性试验:SD大鼠随机分为溶媒对照组(去离子水),青紫颗粒组(18 g·kg^(–1)),给药体积为每次30 mL·kg^(–1),24 h内灌胃给药2次(间隔至少4 h),给药后观察14 d,通过临床观察体质量变化和病理解剖等确定毒性反应。重复给药毒性试验:幼龄SD大鼠(4日龄)随机分为溶媒对照组(去离子水),低、中、高剂量青紫颗粒组(1,2,4 g·kg^(–1)),给药13周,给药体积每次10 mL·kg^(–1),每天给药2次,恢复期4周。检查项目包括临床观察、体质量、摄食量、血液学、生物化学、免疫学和尿液分析检测、激素水平、幼鼠发育指标、组织病理学检查等。结果单次给药毒性试验:青紫颗粒灌胃给予SD大鼠,无明显毒性,最大耐受量>18 g·kg^(–1)。重复给药毒性试验:幼龄SD大鼠灌胃给予青紫颗粒重复给药13周,最大无毒性反应剂量为2 g·kg^(–1)。潜在毒性靶器官为肝脏,主要毒性作用表现为肝细胞炎性坏死,没有剂量依赖关系。结论青紫颗粒对受试动物在拟临床使用剂量范围内未见有明显的毒性作用。

青紫消斑颗粒抗炎抗过敏作用机制研究

目的研究青紫消斑颗粒对皮肤急性炎症与过敏反应的药理作用机制。方法设立空白对照组,模型对照组,青紫消斑颗粒高、中、低剂量组,阳性对照组,并以巴豆油致小鼠耳炎模型测定药物对耳肿胀的抑制率,以小鼠迟发性变态反应(DTH)模型测定药物对耳肿胀的抑制率和对免疫脏器指数的影响,以大鼠被动皮肤过敏(PCA)模型测定药物对皮肤蓝斑直径和吸光度值的影响。结果青紫消斑颗粒高剂量组对巴豆油致耳炎小鼠耳肿胀抑制率为15.8%,与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);对DTH模型耳肿胀的抑制率为17.5%,胸腺指数和脾指数分别为(1.35±0.22)mg/g、(4.40±0.47)mg/g,与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);PCA模型皮肤蓝斑大小最终为(12.5±2.0)mm,与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论青紫消斑颗粒具有显著的抗炎、抗过敏作用。

正交试验法优选青紫消斑颗粒的醇提工艺

目的优选青紫消斑颗粒中青黛、紫草、丹参的醇提工艺。方法以β,β-二甲基丙烯酰胺阿卡宁转移率为考察指标,采用L_9(3~4)正交试验优选紫草等醇提工艺。采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatogra-phy,HPLC)测定阿卡宁含量,流动相乙腈∶水∶甲酸(70∶30∶0.05),检测波长:275 nm。结果最佳提取工艺为95%乙醇,40℃温浸2次,第1次加10倍量,第2次加8倍量,每次24 h。结论该工艺稳定可行,适用于青紫消斑颗粒的工业化生产。