青葙苷Ⅰ通过调节ROS介导的JNK/c-Jun信号通路增强视神经损伤模型视网膜神经节细胞的线粒体自噬

目的:探讨青葙苷Ⅰ通过调节活性氧(ROS)介导的c-Jun氨基末端激酶(JNK)/c-Jun信号通路增强视神经损伤模型视网膜神经节细胞(RGCs)线粒体自噬的作用机制。方法:选取24只SPF级新西兰大白兔,随机分为4组,每组6只,分别为假手术组、模型组、甲钴胺组、实验组。模型组、甲钴胺组、实验组复制视神经损伤模型,假手术组仅切开球结膜后缝合。模型复制成功后,甲钴胺组给与0.15 mg/kg甲钴胺水溶液灌胃,实验组30 mg/kg青葙苷Ⅰ溶液灌胃,假手术组与模型组给与等体积生理盐水灌胃,各组每日干预一次,连续干预28 d。干预结束后,采用内窥镜检测各组大白兔眼底;苏木精-伊红(HE)染色法检测各组视网膜形态学变化;TUNEL法检测各组RGCs凋亡;免疫荧光染色法检测各组视网膜ROS、parkin及P62表达,Western blot检测各组视网膜JNK、c-Jun、parkin、P62及微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达。结果:内窥镜结果显示,假手术组大白兔眼底表现正常,模型组可见眼底血供减少,视野呈现灰白色。与模型组比较,甲钴胺组与实验组可见眼底血流增加。HE结果显示,假手术组RGCs排列整齐,细胞形态规则,模型组可见RGCs数量减少、排列紊乱,与模型组相比,甲钴胺组与实验组RGCs形态改善,甲钴胺组仍存在部分RGCs形态异常,实验组RGCs总体数量较甲钴胺组多,RGCs形态异常少。与模型组相比,甲钴胺组与实验组视网膜凋亡指数较低(P<0.05),与甲钴胺组相比,实验组视网膜凋亡指数较低(P<0.05);免疫荧光法结果显示,与模型组相比,甲钴胺组与实验组视网膜组织中ROS、P62表达较低,parkin表达升高(P<0.05),与甲钴胺组比较,实验组视网膜组织中ROS、P62表达较低,parkin表达较高(P<0.05);Western blot结果显示,与模型组比较,甲钴胺组与实验组JNK、c-Jun、P62及LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白表达降低,parkin蛋白表达升高(P<0.05),与甲钴胺组比较,实验组JNK、c-Jun、P62蛋白表达及LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ较低,parkin表达较高(P<0.05)。结论:青葙苷Ⅰ能够减少视神经损伤模型RGCs中ROS产生,抑制JNK/c-Jun信号通路,进而增强线粒体自噬,减少细胞凋亡,对视神经损伤模型RGCs起到一定的保护作用。

基于DNA条形码鉴别青葙子及其混伪品绿穗苋种子

目的:基于DNA条形码对青葙子、绿穗苋种子进行鉴定。方法:基于ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL常用DNA条形码的通用引物对样品进行扩增、测序,并从NCBI数据库下载ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL碱基序列。利用MEGA 11.0软件构建NJ系统发育树、计算遗传距离及比较种间差异,并基于ITS2序列构建二级结构。结果:基于上述序列构建的NJ树均独立聚为一支,其中ITS2的种间遗传距离最大,基于ITS2构建的二级结构具有明显差异。结论:基于DNA条形码ITS2碱基序列及其二级结构可准确鉴别出青葙子及其混伪品绿穗苋种子,psbA-trnH碱基序列可以作为辅助鉴别序列。

青葙皂苷对动脉粥样硬化的影响及机制研究

目的探讨青葙皂苷对动脉粥样硬化的抑制作用及其机制。方法33只4周龄ApoE-/-实验小鼠先适应性喂养1周,随机选取22只小鼠高脂肪饮食喂养12周建立动脉粥样硬化模型,成模小鼠随机分为模型组和青葙皂苷组,每组各11只。青葙皂苷组给予腹腔注射青葙皂苷60 mg/(kg·d),模型组给予生理盐水,连续给药12周,12周后处死实验小鼠并采集血液及其主动脉组织标本。采用HE染色方法观察动脉粥样斑块形成;全自动生化分析仪分别检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的水平;利用RT-qPCR检测小鼠主动脉组织中过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)、清道夫受体以及脂质相关代谢相关基因mRNA的表达水平。结果与模型组比较,青葙皂苷组巨噬细胞泡沫化抑制,血清中TC、TG及LDL-C的水平降低(P<0.05);HDL-C水平增加(P<0.05);主动脉组织中清道夫受体A(SR-A)及分化簇36(CD36)的表达下调(P<0.05),清道夫受体B(SR-B)的表达上调(P<0.05),导致脂质蓄积的胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)、固醇调节元件结合蛋白-1C(SREBP-1C)的表达下调(P<0.05),促进脂质代谢的肉碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)、脂蛋白脂酶(LPL)的mRNA上调(P<0.05);并且PPAR-α的表达上调(P<0.05)。结论青葙皂苷通过激活PPAR-α信号通路调节巨噬细胞清道夫受体及脂质代谢相关基因表达,减轻组织中巨噬细胞泡沫化,抑制动脉粥样硬化的发生发展。

青葙吸收富集土壤重金属Cd、Zn、Cu、As和Pb的特性研究

为探究青葙(Scirpus triqueter)修复重金属污染土壤的性能,通过对安徽铜陵某矿山流域内农田自然生长的青葙和土壤取样并检测其根、茎和花中镉(Cd)、铜(Cu)、砷(As)锌(Zn)和铅(Pb)的含量,结合相关文献分析了青葙富集和转运重金属Cd、Cu、As、Zn和Pb的特性。结果表明:青葙不同部位和重金属平均含量表现出Zn>Cu>As>Pb>Cd和花>根>茎的规律,各部位富集系数(BCF)和转运系数(TF)分别介于0.03~18.10、0.84~1.63之间,青葙对Cd有极强的富集能力;对Zn富集能力相对较好,除花对Cu有一定的富集能力外,青葙整体对Cu、As和Pb的富集能力较差。青葙花部对Cu和Zn的表现出较高的转运能力,茎部对Cu、Cd和Pb的转运能力较强。

桑黑青葙子治早期白内障

取桑叶、黑芝麻各100克,青葙子25克,上药一同研成细粉备用。服用时,每次取药粉5克,温开水送服,每日服用2次,连服2周,对早期白内障有效。四川彭州胡佑志成都中医药大学副研究员蒲昭和点评:白内障属中医“圆翳内障”范畴,与肝血不足、肝经郁热、肾精亏损等密切相关。早期白内障适当选用补肾活血、益气养血、清肝明目类中药,有一定防治效果。

海水胁迫对青葙种子发芽的影响

[目的]研究海水胁迫对青葙种子发芽的影响。[方法]以青葙种子发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数为指标,采用配置成的5个浓度的海水对青葙种子的萌发进行胁迫,观察青葙种子的萌发情况,研究青葙种子的耐盐性。[结果]随海水浓度的提高,青葙种子的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数等均表现下降趋势;但海水浓度达到25%时,萌发率仍有近41%;而10%以内浓度的海水对青葙种子发芽势、发芽指数、活力指数的影响不大。[结论]青葙种子在萌发时,可以耐受一定程度的盐碱胁迫。

青葙对土壤锰的耐性和富集特征

通过盆栽试验,研究了青葙(Celosia argentea Linn.)对不同浓度(0、50、100、200、300、500 mg/kg)锰(Mn)污染土壤的吸收和积累特性。结果表明,青葙的锰含量、生物富集系数和生物量均随着土壤锰浓度的增加而增加。当土壤锰含量为300 mg/kg时,青葙生长良好。在锰浓度500 mg/kg时,青葙叶片边缘出现轻微褪绿现象,但是植株的生长未受到抑制,并且叶片生物量显著增加(P<0.05)。此时,叶片中锰含量达到最大值42927 mg/kg,生物富集系数为69.20。青葙吸收的锰有95%—97%被转移到地上部分,表明该植物对锰具有很强转运能力。本研究的结果为利用青葙修复锰污染土壤提供了有力证据。

青葙子提取物降血糖活性的研究

目的研究青葙子提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠降血糖作用。方法采用体积分数95%乙醇和水连续浸提青葙子获得醇提(A)和水提浸膏(B)。醇提浸膏用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇连续萃取,获得不同部分。水提物采用3倍乙醇沉淀分为醇溶部分和粗多糖。尾静脉注射四氧嘧啶建立小鼠糖尿病模型,给予青葙子提取物灌胃,1 g·kg-1或800 mg·kg-1,连续3周, 测定血糖、血清中胰岛素含量及饮水量和耗食量,测定小鼠肝、肾、脾和胰腺重量指数。结果青葙子醇提物和水提物均有一定降血糖活性,其中醇提物的正丁醇部分(A-c)和水提物中粗多糖部分(B-b)具有显著降血糖活性,粗多糖部分具有明显促进胰岛素分泌作用,效果优于格列本脲(2 mg·kg-1)。A-c和B-b能使四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠肾脏和肝脏的肿胀恢复接近正常。结论青葙子提取物时四氧嘧啶糖尿病小鼠具有降血糖作用。

青葙子化学成分研究

目的:对青葙子的化学成分进行研究。方法:采用溶剂法、硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析及重结晶等方法进行成分分离及纯化,并利用UV、IR、IH-NMR、13C-NMR、MS等波谱技术鉴定提取物的化学结构。结果:从青葙子乙醇提取物的石油醚部位分离得到化合物1～3,分别鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol)、棕榈酸(palmitic acid)、豆甾醇(stigmasterol);从乙酸乙酯部位分离得到化合物4、5,分别鉴定为胡萝卜苷(daucosterol)和齐墩果酸(oleanolic acid)。结论:化合物3、4和5为首次从青葙子中分离得到。

HPLC-ELSD法测定青葙子中青葙苷A和青葙苷B的含量

目的:测定青葙子中青葙苷A和青葙苷B的含量。方法:HPLC-ELSD法,色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%冰乙酸水溶液梯度洗脱,以蒸发光散射检测器(ELSD)检测。结果:青葙苷A在2.5～30.0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,回收率为99.89%,RSD为1.85%(n=6);青葙苷B在1.25～15.0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,回收率为98.98%,RSD为1.78%(n=6)。8个市售青葙子样品中青葙苷A和青葙苷B的含量存在显著差异,分别在(0.0512±0.0016)%～(0.1143±0.0008)%和(0.0109±0.0019)%～(0.0815±0.0009)%范围内。结论:本研究首次建立了用HPLC-ELSD法测定青葙子有效成分的方法,该方法定量准确、操作简便。

青葙根氯仿提取物对多种植物的生物活性及抑菌作用

以水稻Oryzasativa L.等6种植物和油菜菌核病Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary等4种植物病原菌为受试材料,采用生物测定的方法观察了青葙Celosia argenteas Linn.根氯仿提取物对植物的生物活性及抑菌作用。结果表明:与对照相比,在质量浓度为250～4000μg/mL时,提取物对水稻种子萌发的影响不显著,在4000μg/mL时,其相对抑制率仅为3.33%;在相同浓度范围内,提取物对丁香蓼Ludwigia prostrata Roxb.种子的萌发、烟草Nicotiana tabacum L.、醴肠Eclipta prostrateL.和丁香蓼幼苗的根长、水稻和三叶鬼针草Bidens pilosaL.幼苗的苗高均有显著抑制作用;对6种植物相对应的其它生长特性方面,只有在质量浓度高于250μg/mL时才受到显著抑制;在质量浓度为250～4000μg/mL时,提取物对小麦赤霉病Fusariumgra-minearum Schw.病菌的生长无显著抑制作用,在4000μg/mL时,其抑制率仅为10.30%;在相同的浓度范围内,提取物能显著抑制番茄早疫病Alternariasolani Jones et Grout.病菌的生长,抑制率为23.63%～61.01%;只有在质量浓度大于1000μg/mL时,提取物才能显著抑制油菜菌核病和杨树溃疡病Dothiorella gregariaSacc.病菌的生长。

锰胁迫对青葙生长及叶绿素荧光特性的影响

通过温室水培实验,研究在不同锰质量浓度(2.5、50、100、150、200、300 mg·L-1)胁迫下青葙(Celosia argentea Linn.)的叶绿素含量、叶绿素荧光参数的变化,及对其生长的影响,探究青葙对锰毒的耐性。结果表明,随着Mn2+质量浓度的升高,青葙叶片的叶绿素含量和叶绿素荧光参数值都出现不同程度下降。当Mn处理浓度大于50 mg·L-1时,叶绿素a、叶绿素b含量和总叶绿素含量显著下降,但在Mn质量浓度为100-300 mg·L-1的范围内,叶绿素b含量变化不明显(p>0.05)。青葙的最大光化学量子产量(Fv/Fm)、最大荧光产量(Fm)、最小荧光产量(Fo)、光合量子产量(EQY)、表观光合电子传递速率(ETR)、光合化学淬灭系数(qP)均随Mn2+质量浓度的增加显著降低,说明锰胁迫抑制了青葙的电子传递过程。但在150、200、300 mg·L-1质量浓度锰处理下ETR、EQY、qP下降趋势变缓,且ETR、EQY不存在显著差异。青葙株高与ETR、EQY的变化规律基本相似,根长则与对照组相比下降不显著,到300 mg·L-1才出现明显降低。试验结果证明青葙对锰毒具有耐性。

青葙根乙酸乙酯相提取物化感活性及抑菌活性的研究

以水稻(Oryza sativa L.)等6种植物和油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiovum (Lib.) de Bary)等4种植物病原病菌为受试材料,通过生物测定的方法研究了青葙(Celosia argenteas Linn.)根乙酸乙酯相提取物化感活性及抑菌活性.结果表明:与对照相比,在250～4 000μg/mL浓度范围内,提取物对水稻和千金子(Lep-tochloa chinensis (Linn.) Nees)种子的萌发以及三叶鬼针草(Bidens pilosaL.)幼苗的鲜重不产生显著影响,而在相同的浓度范围内,对烟草(Nicotiana tabacum L.)、丁香蓼(Ludwigia prostrata Roxb.)和千金子幼苗的根长、千金子幼苗的苗高以及醴肠(Eclipta prostrate L.)和丁香蓼幼苗的单株鲜重产生显著抑制作用,对6种植物相对应的其它生长特性方面,只有在高于250μg/mL浓度时才能受到显著抑制.在25～400μg/mL的浓度范围内,提取物对油菜菌核病病菌的生长不产生显著抑制作用,在最高浓度400μg/mL时,其抑制率仅为16.56%.只有在浓度大于100μg/mL时,提取物才能显著抑制烟草灰霉病(Botrytis cinerea Pers.)、小麦赤霉病(Fusarium graminearum Schw.)和杨树溃疡病(Dothiorella gregaria Sacc.)病菌的生长,当提取物浓度为400μg/mL时,其抑制率分别为35.64%、33.24%和24.19%.

青葙提取物对红脉穗螟产卵忌避及杀卵作用研究

为探讨青葙在有害生物防治上的应用潜力,同时为红脉穗螟的防治提供新的思路,采用室内生物测定法,研究青葙提取物对红脉穗螟的产卵忌避作用和杀卵活性。产卵忌避试验结果表明:甲醇和石油醚提取物的驱避效果最大。对卵孵化率的影响结果显示,各溶剂提取物处理均对红脉穗螟具有一定的杀卵活性,其中甲醇、乙醇、蒸馏水、乙酸乙酯、正己烷和石油醚提取物处理的死亡率之间无明显差异,保持在20%左右,显著高于三氯甲烷和丙酮提取物处理;甲醇、石油醚和乙醇提取物对红脉穗螟初孵幼虫的影响最大,其1龄幼虫的校正死亡率可达到53%、51.75%和45.54%。此外,在青葙甲醇提取物的不同溶剂萃取物中,乙醚萃取物对红脉穗螟的产卵忌避、杀卵活性及对初孵1龄幼虫的毒力水平均显著高于其他溶剂萃取物。

基于连续小波变换FTIR鉴定青葙子及鸡冠子的研究

借助OMNI采样器,应用傅里叶变换红外光谱方法直接、快速、准确地测定青葙子及其伪品鸡冠子的红外光谱。利用连续小波变换对真伪品的红外光谱进行放大处理,以有效突出真伪品间的红外光谱差异程度,从而提高鉴定正确率。采用对信号奇异性具有良好探测能力的Morlet小波做小波母函数,对青葙子真伪品的红外光谱进行若干尺度的一维连续小波变换,在各个尺度下观察青葙子的真伪品的红外光谱的差异程度,从中选择一个差异程度最为明显的尺度来区分青葙子真伪品。结果表明:基于连续小波变换的傅里叶红外光谱分析方法能够有效鉴别同科同属不同种植物中药材。

青葙SRAP体系的建立和优化

目的探讨影响青葙SRAP(sequence-related amplified polymorphism)扩增的各种因素,建立并优化青葙SRAP反应体系,为分子水平鉴定青葙子及其伪品,探讨青葙不同种质间的亲缘关系奠定基础。方法用CTAB法提取青葙DAN,设计Taq酶浓度(0.02、0.04、0.06U/μL)、dNTP浓度(0.10、0.20、0.30mmol/L)、Primer浓度(0.15、0.30、0.45μmol/L)3水平3因素试验和Mg2+浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mmol/L)8水平单因素试验。在25μL体系中加入模板DNA20ng,对体系进行优化,用琼脂糖进行检测。结果建立了适合青葙的SRAP体系,在25μL体系中,DNA为20ng,Taq酶浓度为0.04U/μL,dNTP浓度为0.30mmol/L,Primer浓度为0.30μmol/L,Mg2+浓度为2.5mmol/L,优化后的体系目标条带增多,且比较稳定,重现性好,得到了较好的扩增效果。结论本研究建立的反应体系适合青葙SRAP的研究。为从分子水平鉴定青葙子正品与伪品以及鉴定青葙不同种质资源奠定了基础。

青葙子药材的HPLC指纹图谱分析

目的:研究不同产地青葙子药材的HPLC指纹图谱,为青葙子药材的鉴别及质量控制提供依据。方法:采用Elite Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1%冰醋酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1mL.min-1,以蒸发光散射检测器(ELSD)检测,记录70 min色谱图。结果:22个不同产地青葙子药材的指纹图谱相似度较高,有12个共有峰,各共有峰之间的分离度较好;聚类分析将产于我国中部地区的青葙子聚为1类,而产于我国南部地区的青葙子被聚为另1类。结论:青葙子药材指纹图谱的特征性及专属性强,可用于青葙子药材的鉴别及质量控制;不同产地青葙子的化学组成存在一定差异,固定产地来源对保障青葙子药材质量的稳定性极为重要。

青葙提取物对螺旋粉虱的杀虫活性研究

采用室内生物测定方法研究6种植物提取物对螺旋粉虱的生物活性,并对青葙提取物生物活性进行研究。结果表明,供试6种植物甲醇提取物均对螺旋粉虱表现出一定的生物活性,其中以青葙和假臭草活性最高,浓度为1%水平时对螺旋粉虱成虫处理5 h后校正死亡率分别为69.87%和64.94%;青葙的不同溶剂提取物中,以甲醇和乙醇提取物活性最高,对螺旋粉虱3龄若虫处理后24 h的LC50值分别为13.14 mg/mL和14.96 mg/mL;青葙甲醇提取物的不同极性萃取物活性测定结果中,乙醚和乙酸乙酯萃取物活性最高,对螺旋粉虱3龄若虫处理后24 h的LC50分别为5.35 mg/mL和9.66 mg/mL。

螯合剂对青葙吸收富集土壤中镉、铅、锌和铜的影响

【目的】探究螯合剂[乙二胺二琥珀酸(EDDS)、氨三乙酸(NTA)和乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)]对青葙镉(Cd)、铅(Pb)、锌(Zn)和铜(Cu)吸收累积的影响,为螯合剂和青葙在环境修复中的应用提供数据支撑。【方法】采用大棚内盆栽种植青葙试验方法,以不添加螯合剂作对照(CK),研究螯合剂EDDS(1.0、2.0和3.0 mmol/kg)、NTA(1.0、2.0和3.0 mmol/kg)和EGTA(1.0、2.0和3.0 mmol/kg)作用下青葙对土壤Cd、Pb、Zn和Cu的吸收与转运。【结果】与CK相比,1.0和2.0 mmol/kg EDDS、1.0~3.0 mmol/kg NTA、1.0和2.0 mmol/kg EGTA能显著促进青葙生长(P<0.05,下同),其中1.0 mmol/kg EGTA促进效果最大,其干重较CK增加37.5%。1.0和2.0 mmol/kg EDDS、2.0和3.0 mmol/kg NTA、1.0和2.0 mmol/kg EGTA能显著促进青葙对Cd的吸收累积,且2.0 mmol/kg EGTA作用下,青葙中Cd的生物富集系数和转运系数提升最大,分别是CK的1.55和1.61倍;2.0和3.0 mmol/kg EDDS、1.0~3.0 mmol/kg NTA及1.0~3.0mmol/kg EGTA均能显著促进青葙对Pb的吸收累积,且Pb在青葙中的生物富集系数和转运系数较CK均有明显提升,以3.0 mmol/kg EGTA处理的青葙地上部富集系数和转移系数最大,分别是CK的1.63和1.47倍;1.0和2.0 mmol/kg EDDS、2.0 mmol/kg EGTA能显著促进青葙对Zn的吸收累积,以1.0 mmol/kg EDDS处理的富集系数最大,是CK的1.18倍,2.0 mmol/kg NTA处理的转移系数最大,是CK的1.22倍;1.0~3.0 mmol/kg EDDS、1.0~3.0 mmol/kg NTA和1.0~3.0 mmol/kg EGTA均能显著促进青葙对Cu的吸收累积,以2.0 mmol/kg EDDS处理的青葙地上部富集系数最大,是CK的2.07倍,3.0 mmol/kg EGTA处理的青葙地上部转移系数最大,是CK的2.52倍。【结论】在本研究螯合剂施用剂量范围内,除3.0 mmol/kg EGTA减少青葙吸收累积Cd和3.0 mmol/kg EDDS、3.0 mmol/kg NTA、1.0 mmol/kg EGTA及3.0 mmol/kg EGTA减少青葙吸收累积Zn外,3种螯合剂的其余剂量均可促进青葙对Cd、Pb、Zn和Cu的吸收富集。因此,适当剂量的螯合剂作为诱导活化剂,可强化青葙吸收累积重金属Cd、Pb、Zn和Cu。

不同产地青葙子及其混淆品的差热分析法鉴别

目的：不同产地青葙子及其混淆品鸡冠花子的鉴别。方法：应用TG／DTA联用热分析仪分别对不同产地的青葙子和鸡冠花子进行差热图谱扫描与分析。实验条件为差热量程：±50uV；升温速率：15℃／min；升温范围：30℃～700℃；气氛为N2，流速：50mL／min。结果：青葙子及其混淆品鸡冠花子的热谱曲线各具特征性且差异明显，取得了良好的鉴别效果。结论：差热分析方法用于中药鉴别准确、简便、快速，值得推广应用。