艾蒿、青蒿花粉变应原组分的研究

目的 对艾蒿、青蒿花粉变应原进行分离、鉴定。方法 采用不同的提取方式得到艾蒿、青蒿花粉的粗浸液 ,通过饱和 (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分离蛋白质组分 ,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量 (Mr) ;采用Western blotting鉴定 2种花粉的主要及次要变应原。结果 艾蒿、青蒿花粉分别分离到二十和十多种蛋白质组分。其中艾蒿花粉的组分中有 9种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合 ,Mr 为 6 2 0 0 0、4 30 0 0、380 0 0的蛋白条带的结合率最高。青蒿花粉的组分中有 11种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合 ,Mr 为 4 30 0 0、380 0 0的蛋白条带结合率最高。结论 艾蒿花粉的主要变应原Mr 分别为 6 2 0 0 0、4 30 0 0和 380 0 0 ,青蒿花粉的主要变应原Mr 分别为 4 30 0 0和 380 0 0 ;2种花粉变应原组分存在很大相似性 。

青蒿花粉变应原Art a1基因的克隆、表达及特性鉴定

目的克隆、表达和鉴定青蒿花粉变应原Arta1。方法在成功构建青蒿花粉cDNA文库的基础上,用蒿属花粉过敏患者的阳性混合血清进行免疫学筛选,所获阳性克隆亚克隆入pET24a(+),经IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,并采用Westernblot和ELISA检测其IgE结合活性。结果选用阳性血清从青蒿花粉cDNA文库中筛选到1个阳性克隆,经序列测定,该基因与GenBank中已知基因无明显同源性,含有长度为609bp的开放阅读框,编码203个氨基酸,命名为Arta1;该重组变应原在大肠杆菌中高效表达为相对分子质量(Mr)为22.7×103蛋白,进一步在Ni2+亲和层析柱得到高度纯化;免疫学分析表明重组变应原有良好的IgE结合活性。结论本研究克隆和鉴定了一个青蒿花粉主要变应原Arta1(登录号为:CK700713),为花粉过敏性疾病的诊断和免疫治疗及进一步的实验研究奠定基础。