基于UPLC-Q-Exactive和HPLC-PDA的青钱柳叶总黄酮化学成分的鉴定分析

目的:基于UPLC-Q-Exactive和HPLC-PDA技术定性鉴别青钱柳叶总黄酮中的化学成分。方法:通过UPLC-Q-Exactive技术初步分析青钱柳叶总黄酮部位的化学成分,采用HPLC-PDA技术将其中与保肝作用相关的7种成分与对照品进行比对,进一步确证。结果:初步鉴定出青钱柳叶总黄酮中7大类共44种化学成分,其中黄酮类21种,并进一步确证了异槲皮苷、鞣花酸、槲皮素、异绿原酸C、山奈酚、金丝桃苷、绿原酸7种化学成分。结论:本文建立的方法可为青钱柳叶总黄酮的质量评价和控制提供依据。

微生物二段发酵技术同步提取青钱柳叶中黄酮和多糖的工艺研究

青钱柳叶是一种重要的药食同源植物,但提取其中丰富的多糖和黄酮的过程受到其致密细胞结构的限制,严重影响提取效率。本项目使用微生物二段发酵技术,以单因素试验和正交实验进行工艺优化研究,有利贮藏在叶片细胞中的多糖及黄酮类物质溶出,提升发酵液中含量,从而实现高效提取,提高了资源利用效率。实验结果表明,青钱柳叶粉以1∶25(g/mL)的料液比与水进行混合,在第一段发酵时接种3%的里氏木霉种子液,32℃发酵12 h;在第二段发酵中,使用5%的接种物(里氏木霉与枯草芽孢杆菌的菌种比例为1∶3),在32℃发酵提取2 d,最终青钱柳叶中多糖的提取率达7.62%,黄酮的提取率达7.00%,相比于此前技术分别提高了2.71%和4.05%。可见,青钱柳中的多糖和黄酮的提取效率可以利用微生物二段发酵技术进一步提高,为后续的开发和研究工作提供参考。

青钱柳叶总黄酮超声辅助提取工艺优化

为研究以乙醇为溶剂超声波辅助提取青钱柳叶总黄酮的工艺,在单因素试验的基础上,采用四因素二次回归正交旋转组合设计,以液料比、超声处理时间、超声功率、溶剂体积分数为考察因素,优选了超声波辅助提取青钱柳叶总黄酮的最佳工艺。结果表明各因素对提取率的影响大小依次为:超声处理时间、溶剂体积分数、液料比、超声功率。最佳工艺条件为液料比55 mL/g,超声处理时间34 min,超声功率720 W,溶剂体积分数60%,在此最佳条件下,总黄酮的得率为86.63%,优化工艺稳定,提取率也较高,试验验证结果与模型预测值相符。

青钱柳叶总黄酮大孔树脂纯化工艺

为提高青钱柳叶总黄酮的纯度,筛选适宜青钱柳叶总黄酮纯化的大孔树脂,确定青钱柳叶总黄酮纯化工艺参数,选用大孔树脂材料,采用静态与动态吸附—解吸方法对青钱柳叶总黄酮进行纯化,以吸附量与洗脱率为考察指标对树脂进行选择与工艺研究,并利用紫外可见分光光度计测量青钱柳叶总黄酮的含量。结果表明:AB-8型大孔树脂纯化效果最好,其最佳工艺为进样速度2 BV/h、进样质量浓度1.0 mg/mL,洗脱剂最适宜体积分数与洗脱速度分别为70%和2 BV/h。表明AB-8型大孔树脂适合青钱柳叶总黄酮的纯化。

青钱柳叶与葛根水提物对糖尿病大鼠模型的降血糖作用及其机制研究

目的研究青钱柳叶与葛根水提物(CPPL)对糖尿病大鼠模型的降血糖作用及其机制研究。方法雄性SD大鼠110只,按体重随机区组法分为空白对照组和造模组,其中空白对照组喂养普通饲料,造模组喂养高能饲料加链脲佐菌素注射复制大鼠模型,选择造模组造模成功的大鼠,根据空腹血糖值采用随机区组法分为模型组,二甲双胍组,CPPL低、中、高剂量组。空白对照组和模型组灌同体积的生理盐水,二甲双胍组灌胃同体积的二甲双胍溶液,CPPL低、中、高剂量组分别灌胃CPPL水提物0.14 g/kg、0.28 g/kg、0.86 g/kg。检测大鼠体重、空腹血糖、糖耐量、空腹胰岛素含量(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素作用指数(IAI)、胰腺病理切片、血糖曲线下面积、肾脏8-羟基脱氧鸟苷(8-Ohd G)和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)情况。结果 CPPL低剂量组从治疗第1周开始即表现出良好的降糖作用,至第4周降糖效果持久稳定,和模型组相比均具有明显的统计学意义(P<0.05,P<0.01)。CPPL低剂量组血糖曲线下面积显著降低(P<0.01),HOMA-IR显著降低(P<0.05),CPPL对胰岛细胞形态萎缩现象有一定的改善作用,能使胰岛素含量显著升高(P<0.05)。CPPL中、高剂量组肾脏8-Ohd G水平显著下降(P<0.01),高剂量组肝脏SOD、CAT、GSH-px水平显著升高(P<0.05),中剂量组SOD水平显著升高(P<0.01)。结论 CPPL具有良好的降血糖功效,其作用机制与提高机体酶类抗氧化系统的活性有关。

固相微萃取-气相色谱-质谱分析青钱柳叶挥发性成分

采用固相微萃取(SPME)和气相色谱-三重串联四极杆质谱联用仪(GC-QQQ-MS)相结合的方法对两个产地(江西修水野生和浙江文成人工栽培)的青钱柳叶挥发性成分进行研究,并比较了它们在挥发性化学成分及含量上的差异。结果表明:在两个产地的青钱柳叶中共鉴定出91种挥发性成分,其中两者共有挥发性成分45种,且主要是碳氢化合物类、醇类、醛类、酯类、酮类、醚类和萘类化合物,但两个样品在挥发性成分的具体组成和含量上存在一定的差异。野生青钱柳叶的挥发性成分主要是β-瑟林烯(18.52%)、石竹烯(8.11%)、β-甜没药烯(6.01%)、β-榄香烯(5.36%)、顺-香叶基丙酮(4.02%)等,人工栽培青钱柳叶的挥发性成分主要是β-波旁烯(11.05%)、β-瑟林烯(10.91%)、石竹烯(7.03%)、苯甲醇(7.01%)、2,6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯基)-双环[3.1.1]庚-2-烯(5.36%)、2,6,11-三甲基十二烷(5.16%)等。

青钱柳叶提取物对2型糖尿病模型大鼠的治疗作用

目的:研究青钱柳叶提取物对2型糖尿病模型大鼠的治疗作用。方法:以高脂饲料合并链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠模型,连续6 w分别口服给予不同剂量青钱柳叶提取物(30、60、120mg/kg),观察青钱柳叶提取物对模型大鼠体质量、血糖、糖耐量、血清胰岛素及糖化血红蛋白的影响。结果:连续6 w口服给予青钱柳叶提取物后,与模型组比较,青钱柳叶提取物中、高剂量组大鼠体质量增加,血糖曲线下面积减少,血糖下降,糖化血红蛋白含量降低;青钱柳叶提取物高剂量组血清胰岛素含量升高;青钱柳叶提取物各剂量组胰岛细胞形态萎缩均有所改善。结论:青钱柳叶提取物可促进2型糖尿病大鼠胰岛素分泌,降低血糖值及糖化血红蛋白含量,改善糖耐量受损,减轻胰岛细胞的损伤。

青钱柳叶活性成分的抗氧化活性及UPLC-QTOF-MS/MS分析

利用96孔板法测定青钱柳叶不同溶剂(水、70%乙醇、乙酸乙酯和正己烷)提取物中总酚、总黄酮含量及抗氧化活性(DPPH自由基清除能力、还原能力、总抗氧化能力),考察酚类物质含量与抗氧化活性的相关性,并采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight tandem mass spetrometry,UPLC-QTOF-MS/MS)分析提取物中主要活性成分。结果表明:不同提取物中总酚、总黄酮含量及抗氧化活性存在显著性差异且70%乙醇溶液提取物表现出最高的总酚(219.01 mg GAE/g)、总黄酮含量(7.23 mg CE/g)及最强的DPPH自由基清除能力(35.46 mg TE/g)和还原能力(1.89 mmol Fe SO_4/g);总酚、总黄酮含量与DPPH自由基清除能力、还原能力之间呈正相关,与总抗氧化能力呈显著负相关,表明多酚类物质是青钱柳中主要的抗氧化剂。UPLC-QTOF-MS/MS分析70%乙醇溶液提取物并初步鉴定出22种化合物,包括2种有机酸、4种酚酸、5种黄酮、8种三萜皂苷类和3种酯类,其中酚酸和黄酮类化合物是主要的抗氧化活性成分,有机酸、三萜皂苷及酯类化合物可能是潜在的抗氧化活性成分。

化学计量学结合指纹图谱评价不同产地青钱柳叶的质量

目的:同时测定不同产地青钱柳叶中5种化学成分含量,化学计量学结合指纹图谱评价不同产地青钱柳叶的质量。方法:采用HPLC法同时测定青钱柳叶中绿原酸、异槲皮苷、槲皮苷、山柰酚、山柰素的含量。建立青钱柳叶HPLC指纹图谱,并进行相似度评价,结合指纹图谱对14批青钱柳叶样品进行主成分分析(PCA)和聚类分析(HCA),并进行整体质量评价。结果:不同产地青钱柳叶中5种化学成分含量存在较大差异,相似度均在0.80以上,以共有峰相对峰面积进行PCA分析可以将不同产地的青钱柳叶进行较好的区分,结果与HCA分析基本一致。结论:指纹图谱结合化学计量学方法可以用于不同产地来源的青钱柳叶的质量评价,为其全面质量控制提供参考。

青钱柳叶多糖双氧水脱色工艺研究

目的:优化青钱柳叶多糖双氧水脱色工艺。方法:采用双氧水进行脱色处理,以脱色率及多糖保留率为指标,在单因素试验的基础上利用正交试验优化脱色工艺。结果:青钱柳叶多糖双氧水最佳脱色工艺为:在温度为70℃,双氧水体积分数为20%,调节p H值为8.5,脱色2 h。在此工艺下脱色率和多糖保留率分别达到85.2%、72.3%(n=3)。结论:双氧水对青钱柳多糖有较好的脱色效果。该脱色工艺操作简单、成本低廉、不引入其他杂质。

青钱柳叶HPLC指纹图谱研究及9个成分定量分析

目的:采用HPLC法建立青钱柳叶的指纹图谱及9个成分的含量测定。方法:采用Phenomenex Kinetex C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;变波长检测模式,建立不同产地的12批青钱柳叶HPLC指纹图谱,采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)"对结果进行分析处理,并对9个主要成分进行含量测定。结果:不同产地12批青钱柳叶的HPLC指纹图谱中,确定29个共有峰,并指认了其中9个色谱峰,分别是(+)-儿茶素、金丝桃苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸、槲皮苷、杨梅素、阿福豆苷、槲皮素、山柰酚、阿江榄仁酸。不同产地的12批青钱柳叶样品与对照指纹图谱的相似度差异较大。以上述9个成分作为主成分建立多指标测定方法,其线性关系良好,线性范围分别为24.88～497.6 ng、10.71～214.2 ng、83.69～1 673.8 ng、11.31～226.2 ng、8.31～166.2 ng、70.46～1 409.2 ng、1.673～33.46 ng、2.115～42.3 ng、12.46～249.2 ng;9个成分的平均加样回收率分别为100.18%、100.19%、101.00%、102.23%、101.24%、99.37%、99.98%、100.77%、100.54%,RSD均小于3%。12批样品中9个成分的含量分别为0.2675～1.2563 mg/g、0.3575～2.2750 mg/g、3.9438～12.4650 mg/g、0.2950～1.2213 mg/g、0.1450～1.2138 mg/g、0.3175～6.0763 mg/g、0.0250～0.2775 mg/g、0.0113～0.0675 mg/g、2.9913～5.8488 mg/g。结论:所建立的方法简便可靠、重复性好,可作为青钱柳叶药材质量控制方法。

青钱柳叶香豆素、黄酮含量测定及抗氧化活性研究

分析青钱柳叶中的香豆素和黄酮含量,比较了不同产地青钱柳叶中香豆素和总黄酮含量的差异,对青钱柳叶进行了体外抗氧化活性实验,结果表明:桂林伯林生物技术有限公司种植的青钱柳总黄酮含量和香豆素含量都较高,分别为2.8135%和6.9253%,高于湖南省绥宁县、江西省修水县的青钱柳叶总黄酮含量和香豆素含量。青钱柳叶有较好的清除羟自由基的能力,是一种较好的天然抗氧化剂,具有较高的开发价值。

青钱柳叶复方对糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号通路和GLUT4的影响

目的通过建立高血糖动物模型,研究青钱柳叶复方对糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号通路和GLUT4的影响及作用机制。方法采用高脂饮食联合小剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg建立2型糖尿病模型,造模成功后大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、青钱柳叶复方高剂量组(复方高剂量组)、青钱柳叶复方低剂量组(复方低剂量组)。正常对照组和模型组给予蒸馏水,各药物治疗组分别灌胃给予相应剂量药物。给药12周后,氧化酶法检测大鼠空腹血糖(FBG)的变化;ELISA法检测大鼠血清中的空腹胰岛素水平(FINS)的变化;计算各组大鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(HOMA-IS);Western-Blot法、RT-PCR法和免疫组织化学检测骨骼肌胰岛素信号通路IRS-1、IRS-2、PI3K、AKT、GLUT4的表达情况。结果复方(高、低)治疗组大鼠血清FBG、糖化血红蛋白(Hb A1c)、FINS均显著降低(P<0.05);HOMA-IR显著降低,HOMA-IS显著升高(P<0.05);其中复方高剂量组大鼠血清FBG、Hb A1c、FINS等含量低于复方低剂量组;但差异无统计学意义(P>0.05)。复方高剂量组糖尿病大鼠骨骼肌IRS-1、IRS-2、PI3K、AKT、GLUT4等蛋白表达量增多。结论青钱柳叶复方能降低2型糖尿病大鼠血糖,改善胰岛素抵抗。此作用是通过增加胰岛素受体底物(IRS-1、IRS-2)数量,激活PI3K途径增加GLUT4转位,增强骨骼肌中GLUT4基因和蛋白表达实现的。

超声波法提取青钱柳叶中的黄酮组分及其含量测定

本文以不同浓度的乙醇为溶剂,通过超声波法对青钱柳叶中的黄酮组分进行了提取,详细研究了乙醇浓度、体积、时间、温度对青钱柳叶中黄酮组分提取的影响;以芦丁为对照品,采用标准曲线法测定了青钱柳叶在不同提取条件下的黄酮含量。结果表明,使用超声波法提取青钱柳叶中黄酮组分的最佳条件为:乙醇浓度60%、超声时间35 min、超声温度35℃、固液比1:55。

土壤养分与青钱柳叶营养成分间的相关性分析

选取浙江省遂昌县等4个已种植3～5年的青钱柳(Cyclocaryapaliurus)人工培育试验基地为研究对象,分析了各个试验地的土壤养分和土壤矿质元素含量及对应的青钱柳叶矿质元素和有机成分含量,并分析了它们之间的相关性。结果表明:淳安试验地的土壤有机质含量和水解性氮含量较高,属1级,其它3个试验地差别不大,分属3～5级;所有试验地的有效磷含量较低,仅为6级;各试验地土壤中钙、镁、铁、锌等矿质元素含量均较高,达到很高或特高级别;硒含量0.1～0.3mg/kg,属中等水平。青钱柳叶多糖含量以淳安试验地为最高,并与其他试验地的有显著差异(P<0.05),其它指标间大部分无显著差异(P>0.05);青钱柳叶所含矿质元素中,铁与土壤速效钾、土壤镁、土壤铁成显著负相关,青钱柳叶多糖含量与土壤有机质、土壤水解性氮、土壤交换性镁成显著正相关,青钱柳叶黄酮含量与土壤养分和矿质元素含量间的相关性不明显。

青钱柳叶化学成分及其PTP1B抑制活性的研究

目的研究青钱柳叶的化学成分及其PTP1B抑制活性。方法利用反向色谱法分离水溶性成分,利用正向色谱法分离脂溶性成分,根据化合物的化学性质与波谱数据(如IR、ESI-MS、~1H-NMR、^(13)C-NMR、HMQC、HMBC等)鉴定化合物结构,PTP1B抑制活性模型测定化学成分的抑制活性。结果得到16个化合物(1~16),分别为山柰酚3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1),山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(2),山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(3),槲皮素3-O-α-L-鼠李糖(4),山柰酚(5),苯甲酸(6),没食子酸(7),(+)-2α-落叶松脂素硫酸钠(8),山柰酚-3-O-α-D-半乳糖苷(9),邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(10),六氢姜黄素(11),5S-5-羟基-1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-羟苯基)-3-庚酮(12),(+)-丁香脂素(13),浙贝素(14),鹅掌揪树脂酚A(15),烟酰胺(16)。结论化合物8~16为首次从青钱柳属植物中分得。化合物10具有PTP1B抑制活性,IC50为(4.89±0.37)μmol·L^(-1)。

青钱柳叶的化学成分分析

分析青钱柳叶中的主要化学成分:多糖、黄酮、皂苷、香豆素的含量,并比较了不同产地青钱柳叶中这四种主要成分含量的差异,结果表明:不同产地青钱柳叶中多糖含量相近,其余三项的含量均是湖南省绥宁县的高于江西省修水县的,湖南省绥宁县的青钱柳叶中多糖、黄酮、皂苷、香豆素的含量分别为:3.97%、1.97%、10.99%、6.63%,江西省修水县青钱柳叶中的分别为:3.99%、1.26%、9.83%、4.23%;青钱柳叶中主要的黄酮成分为槲皮素、杨梅素、山奈酚。

青钱柳叶降血糖作用研究

目的研究青钱柳叶双水相提取物对糖尿病小鼠的降血糖作用。方法通过高脂饮食联合腹腔注射链佐霉素(STZ)建立小鼠糖尿病模型,设置青钱柳叶双水相提取物高、中、低剂量组灌胃,连续14 d后测定空腹血糖值,检测血清中胰岛素(INS)、总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、极低密度脂蛋白含量(VLDL-C),采用HE染色法观察实验性糖尿病小鼠肝脏和胰腺的病理学变化。结果青钱柳叶双水相提取物中剂量能明显改善2型糖尿病小鼠体重减轻这一症状(P<0.01),低剂量组降低糖尿病小鼠空腹血糖(P<0.05),高剂量组显示出降低血清胰岛素的作用(P<0.05),青钱柳叶双水相提取物能降低糖尿病小鼠血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的含量,增加高密度脂蛋白含量。二甲双胍组和青钱柳叶双水相提取物高、中、低剂量组小鼠的肝脏和胰腺的病变较模型组有不同程度的减轻。结论青钱柳叶双水相提取物具有降低小鼠空腹血糖、降脂、改善胰岛素抵抗、保护胰岛细胞的作用,其降血糖的作用机制需进一步研究。

青钱柳叶饼干配方的优化

青钱柳叶具有降血压、降血脂和降血糖等多种功能。本研究尝试将青钱柳叶添加到饼干中,考察青钱柳叶添加后对饼干的色泽和硬度的影响。以感官评分作为评价指标,通过单因素和正交实验对饼干的配方进行优化。结果表明,青钱柳叶添加到饼干后,饼干的颜色加深,硬度下降,5%添加量的饼干与对照组相比,光亮值和硬度的降幅分别达30%和15%。正交优化后青钱柳叶饼干的最佳配方为:低筋面粉20.0 g、青钱柳叶粉1.0 g、麦芽糖醇12.0 g、黄油10.0 g、鸡蛋6.0 g、膨松剂0.2 g。用此配方生产的饼干外形完整、色泽均匀呈棕褐色、咀嚼后有愉悦的苦甜味。饼干中铁、锌的含量分别为14.70和8.30 mg/kg,三萜类和黄酮类的含量分别为35.07和26.28 mg/kg。本论文通过青钱柳叶休闲饼干的开发,为我国青钱柳资源的优质高效利用提供了一条新途径。